货号：MS2207 规格：100管/96样
果糖-1,6-二磷酸
（ Fructose-1,6 Diphosphate ，FDP）试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
果糖1,6-二磷酸是机体内的高能代谢物和代谢调控剂，是糖酵解途径的重要中间体，广泛存在于动植物和微生物体内，能影响细胞内钾离子的浓度，改善葡萄糖和其他能量底物的代谢，促进组织氧的释放，广泛应用于临床医药制剂。
测定原理：
醛缩酶催化果糖1,6-二磷酸降解，产物与DNPH缩合成紫红色物质，在540nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。
试剂组成和配制:
试剂一：液体110mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体0.4mL×1支，4℃避光保存。 试剂三：液体4mL×1瓶，4℃避光保存。 试剂四：液体16mL×1瓶，4℃保存。
样品处理:
1. 组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL试
剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清待测。 2. 细胞：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细
胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清待测。 3. 液体：直接检测。 测定操作:
对照管 测定管 样品（μL） 20 蒸馏水（μL） 20 试剂一（μL） 44 40 试剂二（μL） 4 充分混匀，37℃反应30min 试剂三（μL） 40 40 充分混匀，37℃温育10min 试剂四（μL） 160 160 充分混匀，于37℃温育10min，于微量石英比色皿/96孔板，第1页，共2页
蒸馏水调零，测定540nm处吸光值，记为A对照管和A测定管，△A=A测定管- A对照管，对照管只要做一管。 计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准曲线：y= 0.6971x+0.0012，R2=0.9983 1．按照质量计算
FDP（mg/g 鲜重）= (△A-0.0012) ÷0.6971÷（W÷V样总）
= 1.43×(△A-0.0012)÷W
2．按照细胞数量计算
FDP（mg/104 cell）= (△A-0.0012) ÷0.6971÷（细胞数量÷V样总）
=1.43×(△A-0.0012)÷细胞数量
3．按照液体体积计算
FDP（mg/mL）= (△A-0.0012) ÷0.6971
= 1.43×(△A-0.0012)
W：样本质量，g；V样总：加入提取液体积，1mL b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y= 0.3486x+0.0012，R2=0.9983 1．按照质量计算
FDP（mg/g 鲜重）= (△A-0.0012) ÷0.3486÷（W÷V样总）
= 2.87×(△A-0.0012)÷W
2．按照细胞数量计算
FDP（mg/104 cell）= (△A-0.0012) ÷0.3486÷（细胞数量÷V样总）
= 2.87×(△A-0.0012)÷细胞数量
3．按照液体体积计算
FDP（mg/mL）= (△A-0.0012) ÷0.3486
= 2.87×(△A-0.0012)
W：样本质量，g；V样总：加入提取液体积，1mL 注意事项:
最低检出限为1.72 mg/L。
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