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微生物实验环境水样中细菌总数的测定―――培养基的制备、消毒与灭菌

来源:锐游网
实验(一):环境水样中细菌总数的测定―――1.培养基的制备、消毒与灭菌

一、

实验目的与要求

1. 学习掌握培养基的制备原理

2. 通过制备麦氏培养基,掌握配制培养基的一般方法和步骤 3. 学会制作试管的斜面培养基

二、 实验原理

培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质,用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或代谢累积产物;人工配制培养基的目的,在于给微生物创造一个合适的营养条件。营养基配制的要素:营养---水分、碳源、氮源、生长因子、和无机盐;适宜的酸碱度和一定的缓冲能力;水活度;氧化还原电位。

三、 实验材料与方法

份量 0.5g 0.9g 1.25g 4.1g 10g 500ml 自然 麦氏培养基可用来培养酵母菌,利于酿酒酵母子囊孢子的形成,配方表如下: 材料 葡萄糖 KCl 酵母浸膏 醋酸钠 琼脂 水 PH 注意事项: 琼脂在常用浓度下96摄氏度时融化,实际应用时,一般在沸水浴中或在下面垫上石棉网煮沸融化,以免琼脂烧焦,同时在加热过程中要不断搅拌。琼脂在40摄氏度以下凝固,所以要在琼脂凝固前将培养基装入试管。

分装过程:将配制的培养基装入试管中,其装量不超过管高的1/3,多余的培养基要装入三角烧瓶中,其装量不要超过三角烧瓶的1/2。

分装完成后要贴上标签,注明时间、培养基名称、组别。 四、 实验过程

1. 称量和融化

按培养基配方比例依次准确地称取酵母浸膏、葡萄糖、琼脂、醋酸钠、KCl依次放入陶瓷杯中煮沸融化。酵母浸膏用玻璃棒挑取,放在称量纸上称量,称量后直接放入水中,这是稍加热,酵母浸膏就会与称量纸分离,然后取出纸片。加热过程中要不断搅拌,等药品完全溶解后,加水定容到500ml 2. 分装

使用漏斗分装装置趁热将制得的培养基分装到21支试管中,液体量不要超过试管的1/3,多余的培养基溶液装入三角烧瓶中,液体量不超过三角烧瓶的1/2 3. 包装和贴上标签

将试管加盖,注意试管要直立,不要倾斜放置。将21支试管分成3份,每份7支,分别用2层牛皮纸和橡皮筋将试管组和三角烧瓶包好,然后贴上标签,同时在牛皮纸上也写上表浅

上的信息,防止在灭菌的过程中标签上的字迹因为蒸汽二变模糊

4. 灭菌 五、 结果与讨论

加热煮沸后配制得到的麦氏培养基是淡黄色的溶液,冷却一会儿后变为淡黄色的透明固体

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