2型糖尿病肾病大鼠模型制备研究

维普资讯 http://www.cqvip.com ２８４０　实用医学杂志２００７年第２３卷第１８期　２型糖尿病肾病大鼠模型制备研究　宋恩峰　刘晶晶　贾汝汉　韦桂莲摘任开明　要　目的：探讨三联法制造２型糖尿病肾病大鼠模型的可行性。方法：５６只ＳＤ大鼠随机分为７组，分别　予不同处理『假手术组、单纯手术组、手术＋高糖高脂组、链脲佐菌素（ＳＴＺ）组、手术＋ＳＴＺ组、高糖高脂＋ＳＴＺ组、手　术＋高糖高脂＋ｓＴｚ组（三联法组）］，监测大鼠血糖、血胰岛素、血脂、血肌酐、尿蛋白、肾脏肥大指数，通过ＰＡＳ及　ＨＥ染色观察大鼠肾脏形态学变化。结果：三联法组血糖、血胰岛素、血脂、血肌酐、尿蛋白、肾脏肥大指数均明显高　于其他组（Ｐ＜０．０５），大鼠肾脏病理形态变化最明显。结论：三联法组较好地模拟了人类２型糖尿病的发病过程，　并出现了早期肾脏病变。　关键词糖尿病．２型糖尿病肾病动物模型　目前我国糖尿病的发病率呈升高趋势，但发病机　制尚未完全阐明，在预防和治疗方面仍不完善，建立　理想的动物模型对进一步研究糖尿病具有重要的意　义。而国内外研究２型糖尿病肾病多采用高糖高脂饮　食配合小剂量链脲佐菌素（ＳＴＺ）Ｅ１］的动物模型。本实　电仪器有限公司生产的ＳＮ　６８２型放射免疫计数器。　血标本采集予氯氨酮７０　ｍｇ／ｋｇ麻醉，心脏采血检测血　糖、血胰岛素、血甘油三酯（ＴＧ）、血胆固醇（ＴＣ）等。全　自动仪检测血肌酐（Ｃｒ）、ＴＧ、ＴＣ及尿Ｃｒ、尿微量蛋白。　验采用新的方法（三联法）制备２型糖尿病肾病模型，　即先予以切除大鼠右肾，继而高糖高脂饮食诱导，再　小剂量ＳＴＺ腹腔注射部分破坏大鼠的胰岛Ｂ细胞，　使大鼠出现糖尿病肾病的早期改变如肾小球高滤过、　微量白蛋白尿等。探讨此方法制造２型糖尿病肾病大　鼠模型的可行性。　１材料与方法　１．３判断标准２型糖尿病肾病大鼠需具备以下条　件：（１）随机血糖≥１６　ｍｍｏｌ／Ｌ，伴胰岛素敏感性下降；　（２）糖尿病肾病早期肾脏肥大，肌酐清除率（Ｃｃｒ）增加　或出现微量白蛋白尿。　１．４数据处理用ＳＰＳＳ　１０．０软件进行分析，结果以　均数±标准差（　±ｓ）表示。　２结果　２．１　实验过程中大鼠血糖变化三联法组大鼠血糖　１．１实验动物及模型建立清洁级雌性ｓＤ大鼠（购　自华中科技大学同济医学院实验动物中心，许可证号　为ＴＪＬＡ一２００３—４）５６只，体重１５０—１７０　ｇ。随机分成７　组：（１）假手术组，麻醉后从右背部人口分离右肾，不　做任何处理，作关闭切口。（２）单纯手术组，手术后，予　正常饮食。（３）手术＋高糖高脂组，手术后１周，予高糖　高脂饮食。（４）ＳＴＺ组，不手术，正常饮食第５周末　ＳＴＺ腹腔注射。（５）手术＋ＳＴＺ组，手术后１周，正常饮　食４周后，ＳＴＺ腹腔注射。（６）高糖高脂＋ＳＴＺ组，不手　术，高糖高脂饮食４周后，ＳＴＺ腹腔注射。（７）手术＋　高糖高￣Ｒ＋ＳＴＺ组（三联法组），手术后１周，高糖高　脂饮食４周后，ＳＴＺ腹腔注射。高糖高脂饮食：常规　饲料加２０％蔗糖，１０％猪油、２．５％胆固醇。手术方法：　大鼠腹腔注射氯氨酮７０　ｍｇ／ｋｇ麻醉后行右肾切除　术。ＳＴＺ为ｓｉｇｍａ公司产品，３０　ｍｇ／ｋｇ，腹腔注射，造模　时间共６周。　１．２取材及指标测定代谢笼收集尿液并记录２４　ｈ　尿量，３　０００　ｒ／ｍｉｎ离心３　ｍｉｎ后取１　ｍＬ，一２０￣Ｃ保存　待测。血糖测定采用美国Ｏｎｅ　Ｔｏｕｃｈ血糖仪和试纸　条。胰岛素活性测定采用放免试剂盒。仪器：上海核福　基金项目：湖北省卫生厅立项课题（编号：［２００６］６３号一１９）　作者单位：４３００６０武汉大学人民医院　第６周明显高于假手术组（Ｊｐ＜０．０１）。与ＳＴＺ、手术＋　ＳＴＺ、高糖高脂＋ＳＴＺ组相比，亦明显升高（Ｐ＜０．０５）。　说明三联法组大鼠血糖符合糖尿病标准。见表１。　表１各组空腹血糖变化　互－４－Ｓ，ｍｍｏｌ／Ｌ　注：与假手术组比较，　Ｐ＜０．０１；与三联法组比较，＃Ｐ＜０．０５　２．２实验过程中大鼠胰岛素变化三联法组大鼠血　胰岛素在第５、６周明显升高，与假手术组相比，差异　有显著性（Ｐ＜０．０１）。各组也有升高，但均低于三联法　组（Ｐ＜０．０５）。见表２。　２．３血脂、尿蛋白、Ｃｃｒ、肾重／体重变化实验第６周，　三联法组ＴＣ、ＴＧ、２４　ｈ尿蛋白、Ｃｃｒ、肾重／体重明显升　高，与假手术组相比，差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。高糖　高脂＋ＳＴＺ组也有明显升高（Ｊｐ＜０．０１），但三联法组变　化较高糖高脂＋ＳＴＺ组更明显（Ｐ＜０．０５）。见表３。　２．４实验结束时大鼠肾脏形态学变化ＰＡＳ染色及　维普资讯 http://www.cqvip.com 实用医学杂志２００７年第２３卷第１８期　表２各组血胰岛素比较ｘ＋－ｓ，ｍｌＵ／Ｌ　ＨＥ染色．假手术组、单纯手术组肾小球及肾小管未见　病理改变，其余各组均有改变，可见程度不同的肾小　球系膜细胞增生。三联法组变化最大，肾小球基底膜　明显增厚．系膜区增宽，细胞外基质增多。　３讨论　２型糖尿病有更强的遗传基础，其发病年龄、发　病机制和治疗均与１型糖尿病不同。其危险因素包括　注：与假手术组比较，　Ｐ＜０．０１；与三联法组比较，＃Ｐ＜０．０５　老龄化、现代社会西方生活方式（体力活力减少，高热　量方便食品摄人增多以及肥胖）。目前认为糖尿病的　ｘ－＋ｓ　表３各组第６周血脂、肾功能变化注：与假手术组比较，　Ｐ＜０．０１；与高糖高脂＋ｓＴｚ组比较，＃Ｐ＜０．０５　发生、发展与以下因素有关。遗传易感性：现一致认　为，糖尿病不是一个单一疾病，而是多基因疾病，且有　广泛的遗传异质性，临床表现差别也很大，另外，糖尿　病的发生也与环境因素有关．包括人口老化、营养因　素、中央型肥胖、体力活动减少、都市化程度升高、子　宫内环境以及应激、化学毒物等。此外，“节约基因　（ｔｈｒｉｆｔｙ　ｇｅｎｏｔｙｐｅ）”学说　２Ｊ认为，人类在进化、生存斗　争中，逐渐形成节约基因，使人在食物不足的环境下，　节约能量，以适应恶劣环境。当食物充足时，此基因使　人肥胖，致胰岛素分泌缺陷和胰岛素抵抗，成为诱发　出糖尿病的潜在因素之一。高胰岛素血症和（或）胰岛　素抵抗：正常情况下，胰岛素水平与血糖具有正相关　性，但在２型糖尿病患者，则产生了胰岛素抵抗，即机　体对一定量的胰岛素的生物学反应低于预计正常水　病的防治具有重要意义。目前理想的２型糖尿病肾病　模型国内外研究较少。国内糖尿病的研究多采用ＳＴＺ　诱导的动物模型，该模型是一种类似于人类１型糖尿　病的动物模型，与２型糖尿病在发病机制、临床表现　差异很大。对２型糖尿病的研究国外多采用具自发性　糖尿病倾向的近交系纯种动物，如ｏｂ／ｏｂ、ｄｂ／ｄｂ、　ＮＺＯ、ＹｅｌｌｏｗＫＫ小鼠及Ｚｕｋｅｒ大鼠等．这些动物与人２　型糖尿病病程相似，是理想的２型糖尿病模型　３Ｊ。但　由于遗传因素在其发病过程中起主导作用（与环境因　素关系不大），这与临床又不尽相符，且存在价格昂　贵、来源有限等方面的局限性，影响了研究的开展。国　内外研究２型糖尿病多采用高糖高脂饮食配合小剂　量ＳＴＺ，此模型先诱导出胰岛素抵抗，再诱发胰岛素　代偿性分泌障碍，但此模型有造模时间长的局限性［　］。　糖尿病肾病早期主要病理改变是肾小球肥大、肾小球　出现高压、高灌注、高滤过。本实验采用新的方法（三　联法）制备２型糖尿病模型是根据以上２型糖尿病所　致糖尿病肾病的病理生理变化，结合以往的经验，加　以改变而成，即先以切除右肾，造成左肾代偿性肥大，　平的一种现象。胰岛素抵抗和胰岛素分泌缺陷，是２　型糖尿病发病机制的２个基本环节和特征，并与冠心　病、高血压、血脂异常、内脏型肥胖等有关。胰岛素抵　抗是２型糖尿病临床过程中的早期缺陷，不同年龄、　种族、体力强度的个体中差异很大，处于这个阶段的　患者血胰岛素水平可正常或高于正常，但它与胰岛素　受体的结合能力以及受体后的效应均减弱，胰岛素介　导下肌肉和脂肪组织，摄取葡萄糖的能力下降，同时　肝脏糖生成增多。为了克服这种情况，胰岛素分泌增　加，但仍然不使血糖恢复正常基础水平，最终会导致　高血糖。　２型糖尿病的发病率占糖尿病发病率９０％以上．　而糖尿病肾病是糖尿病最常见和最严重的慢性并发　症之一。因此，建立良好的２型糖尿病肾病模型对本　继而高糖高脂饮食诱导出胰岛素抵抗，再小剂量ＳＴＺ　腹腔注射部分破坏大鼠的胰岛Ｂ细胞，使大鼠出现高　糖高脂、高胰岛素血症，并胰岛素抵抗，并出现糖尿病　肾病的早期改变如肾小球高滤过、微量白蛋白尿等。　肾病理改变（第６周时），三联法组见大鼠肾小球体积　明显增大，细胞数目增多，系膜区明显增宽，基膜增　厚，严重者，可见肾小球增生分叶。符合２型糖尿病所　致的糖尿病肾病特征　本实验三联法所建立的２型糖尿病模型与２型　维普资讯 http://www.cqvip.com 实用医学杂志２００７年第２３卷第ｌ８期　糖尿病患者发病过程、临床特点及生化代谢特征基本　致，并出现了典型的２型糖尿病所致的糖尿病肾病　早期肾脏病理变化。该三联法模型可为研究２型糖尿　一［３］陈丽萌，李学旺，黄利伟，等．２型糖尿病小鼠（ＫＫＡｙ）动物模型　的鉴定和早期肾脏病理改变［Ｊ］．中国医学科学院学报，２００２，　２４（１）：７１－７５．　［４］郭啸华，刘志红，李恒，等．高糖高脂饮食诱导的２型糖尿病大　鼠模型及其肾病特点［Ｊ］．中国糖尿病杂志，２００２，１０（５）：２９０—　２９４．　病的发病机制及防治，提供一种手段和工具。　４参考文献　［１］陈澍，刘雪芳．链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病肾病模型的建立［Ｊ］．　实用医学杂志，２００６，２２（１１）：１２３９—１２４０．　［５］孙桂菊，王少康，张小强，等．２型糖尿病大鼠模型的建立及糖尿　病并发症相关指标测定［Ｊ］．上海实验动物科学，２００３，２３（２）：　［２］Ｎｅｄ　Ｊ　Ｖ．Ｗｈｅｎ　ｓｏｍｅ　ｉｆｎｅ　ｏｌｄ　ｇｅｎｅｓ　ｍｅｅｔ　ａ、ｎｅｗ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ［Ｊ］．　７９—８２．　Ｗｏｒｌｄ　Ｒｅｖ　Ｎｕｔｒ　Ｄｉｅｔ。１９９９。８４：１—１８．　化疗药物外渗１例护理　尹文秀　药物化疗是治疗肿瘤的重要手段之　不熟练或违反操作常规．使血管壁损伤　－（１－３］。常用的给药途径是静脉滴注或注　而发生外渗：多次化疗后血管壁变硬、脆　射。大多数化疗药物具有强烈的局部刺　化．易弥漫渗出；药物本身的作用：几乎　激作用．药物外渗后轻者局部渗出区域　所有化疗药物都可刺激血管．使血管变　的皮肤出现红斑、肿胀、皮下硬结及轻中　脆、破裂而发生药物外渗。本例资料为治　度疼痛．严重者出现组织坏死、经久难愈　疗护士未作导入穿刺，穿刺失败。忽视巡　的溃疡．恢复期可因瘢痕挛缩致功能障　视。致药液外渗。　碍。甚至手术截肢　。为病人带来痛苦和　２．２药物外渗的预防　损害，更可能引发医疗护理纠纷。本科于　２．２．１充分的心理护理治疗前向患者　２００６年６月３０日发生化疗药物外渗１　告知治疗的重要性、效果和可能的不良　例．现就其护理过程报告如下。　反应，消除其恐惧心理，使患者有充分心　１病例资料　理准备．鼓励患者树立信心。积极配合治　患者男．６９岁，胃癌手术后在本科行　疗。　术后化疗．２００６年６月３０日行丝裂霉素　２．２．２合理选择血管选择弹性好．没　静脉化疗注射时药物外渗。使用丝裂霉　有反复穿刺过的静脉．不宜选反复多次穿　素静脉注射约３　ｍｉｎ．患者感觉左手背局　刺过的静脉。长期化疗病人应建立静脉　部肿胀，面积２．０　ｅｍ×３．２　ｅｍ，皮肤色泽　使用计划．注意保护大静脉。治疗护士应　发亮，呈青紫色，无溃疡，稍肿胀，压痛阳　掌握正确的化疗药物特性、给药方法、浓　性。每日给予５０％硫酸镁外敷。７月２１日　度、给药速度，减少对血管的不良刺激。　病人主诉病灶疼痛，握拳时加重，肿胀处　２．２．３输液针头的选择穿刺针头不宜　开始发黑。硬化并形成瘘道、溃烂，面积　过粗．针头越细对血管损害越小，一般采　３．０　ｅｍ×４．１　ｅｍ．清创后予以每日换药、　用６号半至７号头皮针。　经外用药膏１３　ｄ等未见效．２００６年８月　２．２．４治疗护士保持高度责任心以提高　２日起采用曼迪森一５００系列半导体激光　工作效率和穿刺成功率严格遵守操作　治疗．波长６５０　ａｍ，光斑直径８０～１００　规程．让病人取合理舒适的卧位，输注过　ｍｍ．功率４００　ｍｗ，时间２０　ｍｉｎ，１０　ｄ为　程中注意保暖，嘱病人尽量少活动，少翻　１个疗程。反复２个疗程后，创面干燥，无　身．以避免针头滑脱．一旦发现化疗药物　渗出，面积２．２　ｅｍ×３．２　ｅｍ，２００６年８月　外渗，应立即停止输注，立即处理。　２５日行切痂术并予以缝合．继续半导体　２．３化疗注意事项化疗药物使用前应　激光治疗３个疗程，２００６年９月２９日创　仔细核对药物后予以配制，行静脉穿刺　口愈合，创口皮肤色素沉着，握拳无不适　时．先用葡萄糖或生理盐水作导入穿刺，　主诉。　确保针头在血管内后，针头固定妥善后，　２护理　方可注入化疗药物。注射速度宜慢，边推　２．１药物外渗原因护理人员穿刺技术　边抽取回血以确认静脉通畅。使用过程　中应加强巡视．注意注射速度及局部有　作者单位：２００４４２上海市，同济大学附　无疼痛、肿胀，发现异常及时处理。注射　属同济医院　化疗药物前后需先进行水化，冲洗血管，　（收稿：２００７—０２—１５）　减少药物对血管的刺激。化疗药物注射　后仍用葡萄糖或生理盐水滴注，充分冲　洗皮条后予以拔针，防止输液完毕后拔　针时化疗药液滴入皮下．引起局部组织　损伤和发生静脉炎。化疗药物给药速度　不宜过快．避免血管在短时间内收强烈　刺激而损害。一旦发现外渗，立即停药。　局部注入生理盐水以稀释药液浓度．也　可用２％利多卡因局部注射．局部冷敷和　硫酸镁湿敷，以降低局部组织代谢和减　少组织坏死。切忌热敷。　３讨论　据报道．经外周静脉化疗给药的药　物外渗多有较高的发生率［５］。临床中应尽　量避免化疗药物外渗，把给患者造成的　危害降到最低限度。化疗前应合理选择　穿刺血管．防止药液外渗；用药前后加强　静脉冲洗；密切观察穿刺血管局部反应，　若发现药液外渗．应立即采取有效措施．　尽最大努力避免组织损伤．减轻患者的　痛苦。提高患者的生活质量。　４参考文献　［１］王亚军，方育。李非．不同新辅助化疗方　案治疗进展期胃癌的临床研究［Ｊ］．实　用医学杂志，２００７，２３（１）：５１—５３．　［２］赖善福，张惠光，易娇娇．恶性胸腔积液　导管引流并胸腔化疗的疗效观察［Ｊ］．实　用医学杂志，２００７，２３（３）：３２８—３２９．　［３］史阳湘．大剂量甲氨喋呤加ＡＰ方案化疗　后Ⅳ度骨髓抑制患者的护理［Ｊ］．实用　医学杂志，２００７，２３（３）：４２５—４２６．　［４］王哲海，孔莉，于金明．肿瘤化疗不良反　应与对策［Ｍ］．济南　山东科学技术出　版社．２００２：４３—４６．　［５］徐兵河，张文荣．抗肿瘤药物静脉外渗　的处理［Ｊ］．新医学，１９９５，２６（９）：４９７—　４９９．　（收稿：２００７—０４—１１）