鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感三联灭活疫苗免疫产生期试验

景小冬，李林　，章振华，张建伟。姜北宇　（北京市农林科学院畜牧兽医研究所１０００９７）　摘要：采用鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感（Ｈ９：１Ｅ￣）三联灭活疫苗，分别免疫ＳＰＦ鸡，免疫后７、　１４、２１天采血测定ＮＤ及ＡＩ（Ｈ９）ＨＩ抗体，并用ＮＤＶ、ＡＩＶ（Ｈ９）￣毒攻击，观察三联苗ＮＤ及ＡＩ（Ｈ９）　部分的免疫产生期；此外，先用Ｈ１２０活疫苗免疫ＳＰＦ鸡，免疫后３周，用三联苗加强免疫，免疫后７、１４、　２１天采血测定ＩＢ　ＨＩ抗体，观察三联苗ＩＢ部分的免疫产生期。结果证明，三联灭活苗的免疫产生期为　１４天。　关键词：鸡新城疫；传染性支气管炎；禽流感（Ｈ９亚型）；三联灭活疫苗；免疫产生期　Ａ　Ｔｒｉａｌ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｏｎｓｅｔ　Ｔｉｍｅ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒｉｖａ　ｌｅｎｔ　Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　Ｖａｃｃｉｎｅ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ　Ｄｉｓｅａｓｅ　ｌ　一ＩｎｔｅＣｔｌ０ＵＳ　ｂｒ０ｎＣｎｌ　，　・●　＾　■　■・■ｔｌ　Ｓ　ａｎｄ　ＡＶＩａｎ　ＩｎｔＩＵｅｎｚａ　■　－　■　■　●■　Ｊｉｎｇ　Ｘｉａｏ－ｄｏｎｇ　Ｌｉ　Ｌｉｎｇ　Ｚｈａｎｇ　Ｚｈｅｎ－ｈｕａ　Ｚｈａｎｇ　Ｊｉａｎ—ｗｅｉ　Ｊｉａｎｇ　Ｂｅｉ—ｙｕ　（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ａｎｉｍａｌ　Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ　ａｎｄ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｍｕｎｉｃｉｐａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，１０００９７）　Ａｂｓｔｒａｃｔｓ：ＳＰＦ　ｃｈｉｃｋｅｎｓ　ｗｅｒｅ　ｖａｃｃｉｎａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｔｒｉｖａｌｅｎｔ　Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　Ｖａｃｃｉｎｅ　ａｇａｉｎｓｔ　ＮＤ，ＩＢ　ａｎｄ　ＡＩ（Ｈ９）．　Ｂｌｏｏｄ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ａｔ　７ｄ，１４ｄ　ａｎｄ　２１ｄ　ａｆｔｅｒ　ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｅｓｔｅｄ　ｆｏｒ　ＮＤ　ｎｄ　ａＡＩ（Ｈ９）ＨＩ　ａｎｔｉｂｏｄ—　ｉｅｓ．Ｔｈｅ　ｃｈｉｃｋｅｎｓ　ｗｅｒｅ　ｃｈａｌｌｅｎｇｅｄ　ｗｉｔｈ　ｖｉｒｕｌｅｎｔ　ＮＤＶ　ａｎｄ　ＡＩＶ（Ｈ９）ｓｔｒａｉｎｓ　ａｆｔｅｒ　ｔｈａｔ．Ｏｎｓｅｔ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｖａｃｃｉｎｅ　ｔｏ　ＮＤ　ａｎｄ　ＡＩ（Ｈ９）ｗａｓ　ｅｘａｍｉｎｅｄ．Ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｉｃａｃｙ　ｆｏｆ　ｔｈｅ　ｖａｃｃｉｎｅ　ｏｎ　ＩＢ　ｃｏｎｔｒｏｌ，ｃｈｉｃｋｅｎｓ　ｗｅｒｅ　ｉｆｒｓｔｌｙ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｌｉｖｅ　Ｈ１２０　ａｎｄ　３　ｗｋｓ　ｌａｔｅｒ　ｂｏｏｓｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　Ｔｆｉｖａｌｅｎｔ　Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　Ｖａｃｃｉｎｅ．Ｂｌｏｏｄ　８ａｎｌ－　ｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ａｔ　７ｄ，１４ｄ　ａｎｄ　２１ｄ　ａｆｔｅｒ　２ｎｄ　ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｅｓｔｅｄ　ｆｏｒ　ＩＢ　ＨＩ　ａｎｔｉｂｏｄｙ．Ｔｈｅ　ｏｎｓｅｔ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ　ｗａｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｔｈｅ　ｔｒｉａｌ　ｓｔｕｄｙ　ｓｈｏｗｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｎｓｅｔ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ　ｏｆ　ｈｅ　Ｔｒｉｖａｌｅｎｔｔ　Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　Ｖａｃ—　ｃｉｎｅ　ａｇａｉｎｓｔ　ＮＤ，ＩＢ　ｎｄ　ａＡＩ（Ｈ９）ｉｓ　１４　ｄａｙｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ　Ｄｉｓｅａｓｅ；Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　Ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ；Ａｖｉｎ　Ｉａｎｆｌｕｅｎｚａ（Ｈ９　Ｓｕｂｔｙｐｅ）；Ｔｒｉｖａｌｅｎｔ　Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　Ｖａｃｃｉｎｅ；Ｏｎｓｅｔ　Ｔｉｍｅ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ　３６中国动物保■Ｃｈｉｎａ　Ａｎｉｍａｌ　Ｈｅａｌｔｈ　２０１０年２月　为了有效地控制鸡新城疫、传染性支气管炎、　Ｈ９亚型禽流感的发生…１２１，减少接种次数ｒ３］，根　据我国养鸡生产的需求，开展了鸡新城疫、传染　性支气管炎、禽流感（Ｈ９亚型）三联灭活疫苗　（Ｌａ　Ｓｏｔａ株＋Ｍ４１株＋ＷＤ株）的研究，研制出三　联灭活疫苗，免疫一次即可有效控制这三种传　染病的发生。我们采用实验室制备的三联苗进　行了免疫产生期试验研究，现将试验情况报告　如下：　１材料与方法　１．１材料　１．１．１疫苗　１．１．１．１鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感（Ｈ９亚　型）ｉ联灭活疫苗，其批号为：０９０１，本研究室制备　的实验室制品。　１．１．１．２　Ｈ１２０活疫苗，本研究室自制，其批号为：　０８０４１７。　１．１．２抗原ＮＤ　ＨＩ抗原、ＡＩ（Ｈ９）ＨＩ抗原及ＩＢ（Ｍ４１　株）ＨＩ抗原Ｉ　，均由本研究室自制。　１．１．３攻击用强毒、攻毒方法及剂量　１．１．３．１　ＮＤＶ北京株强毒其批号为０７０６２４，毒价　为１０８．３ＥＬＤ５０／０．１ｍｌ，攻毒途径为肌肉注射，剂量　为每只１０５．０ＥＬＤ５０。　１．１．３．２　ＡＩＶ（Ｈ９亚型）ＷＤ株其批号为０９０４０８，毒　价为１０７．５ＥＩＤ５０／Ｏ．１ｍｌ，ＨＡ价为１：５１２．攻毒途径　为翅静脉注射，１０×稀释毒，每只０．５ｍｌ。　１．１．４试验鸡２１日龄ＳＰＦ雏鸡由北京实验动物　中心购入，饲养在ＳＰＦ鸡隔离器内。　１．２方法　１．２．１　ＮＤ及ＡＩ（Ｈ９）部分免疫产生期试验将　９０只２１日龄ＳＰＦ鸡分成２组，第１组为免疫　组，６０只鸡，用三联灭活疫苗经颈部皮下注射　途径免疫，剂量为０．３ｍｌ／只；第２组为对照组，　３Ｏ只鸡不免疫为对照。分别于免疫后７、ｌ４、２１　天从免疫组各取２Ｏ鸡，从对照组取１０只鸡，采　作者简介ｉ景小冬（１９５７一），女，北京市人，助理研究员，　从事禽用疫苗研究。★通讯作者，高级兽医师　血测定ＮＤ及ＡＩ（Ｈ９）ＨＩ抗体，然后从免疫组中　取１０鸡，连同对照组鸡５只，用ＮＤＶ强毒北京　株攻击，攻毒后观察１４天，记录发病死亡鸡数　及保护鸡数；免疫组中另外１Ｏ鸡，连同对照组　鸡５只，用ＡＩＶ　Ｈ９　ＷＤ株的攻击，攻毒途径为　翅静脉注射，１０　Ｘ稀释的ＡＩＶ（Ｈ９）ＷＤ株每只　０．５ｍｌ，攻毒后５天采集泄殖腔及咽拭子分离病　毒，记录攻毒保护率。　１．２．２　ＩＢ部分免疫产生期试验２０只３周龄ＳＰＦ鸡　先用ＩＢ　Ｈ１２０活疫苗滴鼻免疫，１羽份／只，ｌＢ　Ｈ１２０活疫苗免疫后３周采血，然后，将２０只ＳＰＦ　鸡分成２个组，第１组１０只鸡，用三联苗加强免　疫，每只０．３ｍｌ，第２组１０只鸡作为仅用Ｈ１２０活　疫苗免疫组；加强免疫后７、１４、２ｌ天采血测定ＩＢ　ＨＩ抗体，连同三联苗免疫前（Ｈ１２０活苗免后３周）　血样，测定ＩＢ　ＨＩ抗体，计算三联灭活疫苗加强免　疫后的抗体增加倍数，观察三联苗ＩＢ部分的免疫　产生期。　２结果　２．１　ＮＤ及ＡＩ（ｒＩ９）部分免疫产生期试验结果请　见表１。免疫后７天，免疫组鸡ＮＤ及ＡＩ（Ｈ９）ＨＩ抗　体均为阴性，ＮＤＶ强毒攻击后，免疫组试验鸡全部　发病，表现为精神沉郁、呼吸症状、神经症状等，死　亡７只，攻毒后１４天，２只恢复正常，１只有神经症　状，对照组试验鸡在５天内全部死亡；ＡＩＶ　Ｈ９　ＷＤ　株的攻击后，免疫组及对照组鸡均全部分毒阳性。　免疫后ｌ４天，免疫组鸡ＮＤ及ＡＩ（Ｈ９）ＨＩ抗体滴度　分别为７．２及５．１　Ｌｏｇ２，ＮＤＶ强毒攻毒免疫组试验　鸡１０／１０保护，对照组试验鸡５／５死亡，ＡＩＶ　Ｈ９　ＷＤ株的攻毒免疫组鸡１０／１０分毒阴性，对照组　鸡５／５分毒阳性。免疫后２ｌ天，免疫组鸡ＮＤ及　ＡＩ（Ｈ９）ＨＩ抗体滴度分别为８．９及８．０　Ｌｏｇ２，　ＮＤＶ强毒攻毒免疫组试验鸡１０／１０保护，对照　组试验鸡５／５死亡，ＡＩＶ　Ｈ９　ＷＤ株的攻毒免疫　组鸡１０／１０分毒阴性，对照组鸡４／５分毒阳性。　试验结果证明，三联苗ＮＤ及ＡＩ（Ｈ９）部分免疫　产生期为１４天。　２０１０年２月Ｃｈｉｎａ　Ａｎｉｍａｌ　Ｈｅａｔｌｈ中国动物保健３７　＿　-兰查堡壅表lbid及AI(119)部分免疫产生期试验5死亡组试验鸡5／，AIVH9WD株的攻毒免疫组鸡。10／10一一分毒阴性对照组鸡4／5分毒阳性，试验结果证。il：‘．Ir󰀀●l，l_____一明三联苗ND及，AI(H9)部分免疫产生期为14天H120113HI32．一IB部分免疫产生期试验是先用活疫菡■一l：fl'’■：●’0r‘_____一免疫SPF鸡免疫后3周采血测用，，，抗体21，然后三联菡加强免疫22．，免疫后7天．14天．天采1313部分免疫产生期试验结果请见表2。H120：首．血测定IBIH抗体，观察三联茼m部分的免疫产3．免后3周(三联苗加强免疫前)IBHI抗体滴度为1(1l：2：m171生期HI。H120首免后1：周(三联苗加强免疫前)：IB)，三联苗加强免疫后7天IBHI抗体滴度也为，抗体滴度为7，171(1241．)三联苗加强免疫，171(1．：2m)抗体没有增加三联苗加强免疫后14，，后天IBHI抗体滴度也为1，：171(1．：241．)抗，天IBHI抗体滴度为1，：845(1，：2矾)，是首免抗体的：体没有增加滴度为1：三联苗加强免疫后14天IBHl抗体，．494．．倍三联苗加强免疫后2l天，IBHI抗体滴度为l。845(1：264．)，是首免抗体的，494．倍，1576(1：2。)是首免抗体的922倍，．试验结果证明。，三联苗加强免疫后2l天IBHI抗体滴度为11576．：三联苗IB部分免疫产生期为表2IB14天(I，：273．)是首免抗体的，922．倍。试验结果。邮分免疫产生期试验证明三联苗IB部分免疫产生期为14天33．试验证明三联灭活茁的免疫产生期为，14天，为我们在本疫苗使用过程中制定合理的免疫程序提供了技术依据。■HF参考文献：3．小结与结论采用鸡新城疫传染性支气管炎禽流感(n、、I]【M】北京：中国农业(美)BW卡尔尼克主编禽病学(第十版)【．．．．3197、出版社(1999)。653．—665。742—761．哑型)三联灭活疫苗分别免疫SPF鸡免疫后，．2】甘孟侯主编禽流感(第二版)【【M]中国农业出版社．，2002年，1一14．14、21、天采血测定ND及AIVAI。(H9)HI抗体ND，并用及AI3】宁宜宝主编兽用疫苗学呻北京中匡§农业出版社(2008)551【．—，555．NDV(H9)强毒攻击观察三联苗，【4】姜北字郑世兰刘月焕等鸡传染性支气管炎HA抗原的制备及，．H1(H9)部分的免疫产生期；免疫后7天免疫组鸡ND试啦搠去的建立[J】实验动物科学与管理1998．，，15(3)：1317—．及AI(H9)HI抗体均为阴性，，NDV强毒攻击后免，、、疫组试验鸡全部发病表现为精神沉郁呼吸症状神经症状等死亡，7，只攻毒后，14天2只恢复正，常，1只有神经症状对照组试验鸡在，5天内全部死亡；AIVH9WD株的攻击后免疫组及对照组鸡，均全部分毒阳性。免疫后14天免疫组鸡ND及AI(H9)HI抗体滴度分别为72．及51h．g2NDV，强毒料兽药营销售后服务人员使用还可作为大用书定价198元／本另加10％邮资、。、中专兽医专业的教师和学生参考：，。攻毒免疫组试验鸡，10／10保护，5对照组试验鸡5／10分毒阴死亡AIVH9WD株的攻毒免疫组鸡10／性对照组鸡，5／5分毒阳性。免疫后21天免疫组，鸡ND，及AI(H9)HI抗体滴度分别为89．及8，．0Log2NDV10保护对照强毒攻毒免疫组试验鸡10／司38中宣动物保■ChinaAnimalHealth2010年2月