中国抗生素杂志２０１２年７月第３７卷第７期 ５０１ 文章编Ｉ号：１００１—８６８９（２０１２）０７—０５０１－０６ 耐氨基糖苷类铜绿假单胞菌相关耐药基因的：研究 屈艳 张崇 曹开源，， 苗霞３余广超ｓ （１新乡医学院微生物学教研室，新乡４５３００３；２新乡医学院药学院药理学教研室，新乡４５３００３ ３中山大学临床检验标准化研究中心，广州５ｌＯＯ８Ｏ） 摘要：目的 了解广州地区耐氨基糖苷类抗生素铜绿假单胞菌的氨基糖苷类修饰酶（ＡＭＥｓ）基因和甲酰化酶基因的存在情 况。方法 用聚合酶链反应（ＰＣＲ】测定临床分离的１９６株氨基糖苷类抗生素耐药的铜绿假单胞菌７种主要的ＡＭＥｓ基因和２种甲 酰化酶基因。结果 广州Ｉ地区铜绿假单胞菌的ＡＭＥｓ基因携带率较高（９３．３７％），其修饰酶基因检出率分别为ａｎｔ（３ ，＿，（５４．５９％）， ａａｃ 一 ４４．８９％），ａａｃｒ６，一 ４３．３７％），ａａｃ（６ ３６．７３％），ａｎｔ（２ ＇＿，（３２．１４％），ａｐｈｒ３ －， １９．９０％），ａａｃ（３）－１（０）；Ｊ司时携带２种或２ 种以上ＡＭＥｓ基因的菌株占７０．９２％；未检测到甲酰化酶基因阳性的菌株。结论 广州地区铜绿假单胞菌中ＡＭＥｓ基因携带率较 高，已出现多型别流行趋势，同一菌株携带多个不同的ＡＭＥｓ基因现象较多；尚未发现有甲酰化酶的流行。 关键词：铜绿假单胞菌；氨基糖苷类修饰酶；甲酰化酶；基因型；耐药 中图分类号：Ｒ３７８．９９ １ 文献标识码：Ａ Ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｏｎｓａ Ｑｕ Ｙａｎ ，Ｚｈａｎｇ Ｃｈｏｎｇ ，Ｃａｏ Ｋａｉ－ｙｕａｎ ，Ｍｉａｏ Ｘｉａ ａｎｄ Ｙｕ Ｇｕａｎｇ—ｃｈａｏ。 （１ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ ４５３００３；２ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＰｈａｒｍａ—ｃｏｌｏｇｙ，Ｐｈａｒｍａｃｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆＸｉｎｘｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ ４５３００３；３ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎ￣ｅ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄ， Ｓｕｎ Ｙａｔ—ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５ １ ００８０） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｉｓｔｉｎｇ ｓｉｔｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｍｏｄｉｌｙｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ（ＡＭＥｓ） ｇｅｎｅ ａｎｄ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅ ｏｆ ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ．ｒｅｓｉｔａｎｔ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ｉｎ Ｇｕａｎｇ：，ｈｏｕ ａｒｅａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １ ９６ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ－ｒｅｓｉｔａｎｔ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｉｎ Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｆｇｒ ７ ｍａｉｎ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ＡＭＥｓ ｇｅｎｅ ａｎｄ ２ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｓ ｂｙ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｏｆ ｔｈｅ ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ —ｒｅｓｉｔａｎｔ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｉｎ Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ．９３．３ ７％ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｒｉｍｅｒｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｆｏｒ ＡＭＥｓ． Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｗｅｒｅ：ａｎｔ（３ ＝）－，（５４．５９％），ａａｃ（３）－ＩＩ（４４．８９％），ａａｃ —，，（４３＿３７％），ａａｃ ９－１ （３６．７３％），ａｎｔ（２ （３２．１４％），ａｐｈｒ３ ０ （１９．９０％），ａａｃ（３）－Ｉ（０）．Ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｒａｔｅ ｔｈａｔ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｃａｒｒｙｉｎｇ ｔｗｏ ｏｒ ｍｏｒｅ ｇｅｎｅｔｙｐｅｓ ｗａｓ ７０．９２％．ａｎｄ ｔｈｅ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｓ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ａｎｙ ｏｆ ｔｈｅ ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ—ｒｅｓｉｔａｎｔ Ｐ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ｉｓｏｌａｔｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ａｅｔ‘ｕｇｉｎｏｓａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｉｎ Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ｔｈａｔ ｃａｒｌＴ￣ｉｎｇ ｔｈｅ ＡＭＥｓ ｈａｓ ａ ｈｉｇｈ ｌｅｖｅ１，ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｙｐｅ ｉＳ ｍｕｌｔｉｐｌｅ．Ｂｅｓｉｄｅｓ，ｔｈｅｒｅ ｉＳ ｎｏ ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｗｉｔｈ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｉｎ Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ａｔ ｐｒｅｓｅｎｔ．Ｔｈｅ ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ ｔｈａｔ ｃａｒｒｙｉｎｇ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｇｅｎｅｔｙｐｅｓ ｉｎ ｏｎｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｉｓ ｑｕｉｔｅ ａ ｌｏｔ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｐ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ；Ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｇｅｎｅ；Ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｓ；Ｇｅｎｏｔｙｐｅ；Ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ 收稿日期：２０１１－１１．Ｏ７ 基金项目：国家重大传染病防治科技重大专项（Ｎｏ．２００９ＺＸ１０００４—２１３１ 作者简介：屈艳，女，￣１９８２年，硕士，助教，主要从事细菌耐药研究，Ｅ—ｍａｉｌ：ｑｕｙａｎｘｘｍｕ＠１６３．ｔｏｍ ， 通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃａｏｋｙ＠ｍａｉｌ．ｓｙｓｕ．ｅｄｕ．ｃａ ５０２ 铜绿假单胞菌是临床上最常见的条件致病菌之 一，可引起机体多系统、多脏器或多部位感染。近年 来，由于其分离率高、耐药谱广泛、治疗困难、死亡 率高并时有爆发流行而受到高度重视【 。氨基糖苷 类抗生素属于浓度依赖性药物，对铜绿假单胞菌、 肺炎克雷伯菌等常见革兰阴性杆菌的抗生素后效应较 长，杀菌作用完全，常与Ｂ一内酰胺类药物合用来治疗 铜绿假单胞菌的感染。但铜绿假单胞菌对具有抗假单 胞菌活性的氨基糖苷类药物，如庆大霉素、阿米卡星 等的耐药问题日趋严重，己经成为全球性的问题。氨 基糖苷类抗生素修饰酶的产生是铜绿假单胞茵对氨基 糖苷类抗生素耐药的主要机制，甲酰化酶是近年来报 道的一种新的耐药机制。然而尚未见广州地区有铜绿 假单胞菌的氨基糖苷类耐药相关基因的报道，为了解 广州地区铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗生素的耐药机 制，我们对相关的氨基糖苷类修饰酶基因及甲酰化酶 基因进行了检测及初步研究。 １ 材料和方法 １．１ 菌株来源 从２００３年１月一２００７年１２月年广州地区７家医院 各种标本中分离的铜绿假单胞菌４９９株中筛选出１９６ 株对庆大霉素，阿米卡星两种氨基糖苷类抗生素耐 药的铜绿假单胞菌。所有菌株均采用ＶＩＴＥＫ．３２全自 动微生物鉴定系统进行种属鉴定。质控铜绿假单胞 茵ＡＴＣＣ２７８５３购自卫生部临床检验中心。 １．２主要试剂 ＥｘＴａｑ酶、ｄＮＴＰ、１０×ＰＣＲ ｂｕｆｆｅｒ、ＤＬ２０００ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ均购自ＴａＫａＲａ公司 １．３药敏试验 参照美国临床和实验室标准化协会（ＣＬＳＩ ２０１ １）推荐 的方法，用琼脂平皿二倍稀释法测定铜绿假单胞菌对 亚胺培南（ＩＭＰ），美罗培南（９ ７ ４ ＭＲＰ），头孢他啶（＂ ８ ９ ４ ＣＡＺ），４ 头孢吡肟（ＣＰＥ），庆大霉素（ＧＭ），阿米卡星（ＡＭＫ）， 环丙沙星（ＣＰＬＸ），左氧氟沙星（ＬＶＬＸ），氨曲南（ＡＴＭ） 的ＭＩＣ值。抗生素药粉购自广东省药品检定所。 １．４ ＰＣＲ引物设计 根据ＧｅｎＢａｎｋ数据库收录的ＡＭＥｓ基因和甲酰化 酶基因序列信息，采用Ｐｒｉｍｅｒ Ｐｒｅｍｉｅｒ ５．Ｏ软件包辅 助，参考相关文献＿３＿５１，设计７种氨基糖苷类修饰酶基 因型及２种甲酰化酶基因型的特异性引物，然后由上 海英骏生物技术有限公司（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）合成。引物序 列见表ｌ～２。 １．５细菌培养 耐氨基糖苷类铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究屈艳等 表１氨基糖苷类修饰酶基因ＰＣＲ￣］物序列 Ｔａｂ．１ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆｐｒｉｍｅｒｓ ｆｏｒ ＡＭＥＳ ｇｅｎｅｓ 基因名称 引物序ｙｔＪ（５，－３’） 产物长度／ｂｐ … Ｐ１：ＧＣＣＡＣＣ１１ＡＣＴＣＣＣＡＡＣＡＴＣＡＧＣ 、Ｐ２：ＴＣ ｒＡＧＡＴＡ＿ＴＡＧＡＴＣＴＣＡＣＴＡＣＧＣＧ Ｐ１：ＡＣＴＧＴＧＡＴＧＧＧＡＴＡＣＧＣＡＴＣＧＴＧ ａａｃ（３）．ＩＩ— Ｐ２ ：ＣＴＣＣＧＴＣＡＧＣＧＴＴＴＣＡＧＣＣＡ Ｐｌ： ｒＧＡＧＴＧＧＣＴＡＡＡＴＣＧＡＴＣ ａａｃｆ６ｌ 、】．Ｉ Ｐ２：ＣＣＣＧＣＴＴＴＣＴＣＧＴＡＧＣＡ Ｐ１：ＴＴＣＡＴＧＴＣＣＧＣＧＡＧＣＡＣＣＣＣ ａａｃｒ６ｔ１一ＩＩ Ｐ２：ＡＣＴＣＴＴＣＣＧＣＣＡＴＣＧＣＴＣＴＧＧＧ ａｎｔ纯ｔ９－１ Ｐ２Ｐ１：ＧＣＧＡＡＡＴＣＴＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧ ：ＧＣＴＧＴ１．ＡＣＡＡＣＧＧＡＣＴＧＧＣＣＧ ａｎｔｆ３”）一Ｉ Ｐ１：ＴＧＡＴＴＴＧＣＴＧＧＴＴＡＣＧＧＴＧＡＣ Ｐ２：ＣＧＣＴＡＴＧＴＴＣＴＣＴＴＧＣＴＴＴＴＧ Ｐ ｌ：ＴＡＣＡＧＡＧＡＣＣＡＣＡＴＡＣＡＧＴＧ ａｐｈｒ３ｆ１一Ｖ／ ‘ Ｐ２：ＧＧＡＣＡＡＴＣＡ ＡＴＡＡＴＡＧＣＡＡＴ 表２ 甲酰化酶基因ＰＣＲ引物序列 Ｔａｂ．２ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒｓ ｆｏｒ １ ６Ｓ ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ＲＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｓ 细菌分离培养按照《全国临床检验操作规程》 （第三版）进行。 １．６ ＡＭＥｓ及甲酰化酶基因的ＰＣＲ扩增 采用煮沸法提取细菌ＤＮＡ模板，ＰＣＲ扩增以 产相应酶的Ｐａ作为阳性对照，质控标准菌株ＡＴＣＣ ２７８５３作为阴性对照。各种靶基因ＰＣＲ扩增体系均 为：每反应体系上、下游引物各１ｇＬ，细菌ＤＮＡ模板 或对照４ｇＬ，１０×反应缓冲液５ｇＬ，（１ＮＴＰ混合物（每 ｄＮＴＰ １０ｍｍｏｌ／Ｌ）４ｇＬ，Ｔａｑ酶（５Ｕ／Ｌ）０．３ｇＬ，去离子水 （加至终体积为５０ｇＬ）３４．７ｇＬ。热循环参数均为９４￣Ｃ预 变性５ｍｉｎ，然后９４￣Ｃ １ｍｉｎ，５５℃１ｍｉｎ，７２℃ｌｍｉｎ， 循环３５周期，最后７２℃延长５ｍｉｎ。扩增产物经ｌ％琼 脂糖凝胶电泳，溴化乙锭（ＥＢ）染色，凝胶成像系统 分析结果。扩增产物送至Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司进行纯化和 双向序列测定，测序结果与Ｐｕｂｍｅｄ Ｂｌａｓｔ￣Ｌ对。 ２结果 ２．１ １９６株氨基糖苷类抗生素耐药的铜绿假单胞菌对 ９种抗生素的ＭＩｃ 和ＭＩＣ。 值 １ ９６株氨基糖苷类抗生素耐药的铜绿假单胞菌 中国抗生素杂志２０１２年７Ｙ］第３７卷第７期 表５产修饰酶菌株基因组合类型检测结果 Ｔａｂ．５ Ｔｈｅ Ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｇｒｏｕｐｓ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆＡＭＥｓ—ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒａｉｎｓ ５０５ 基因类型 Ｐａ菌株数 所占ＬＬ￣Ｏ／％ １．０９ ８．２０ ９＿２９ ３．２８ Ｏ．５５ １．６４ ０．５５ ５．４６ ０．５５ ２．１９ Ｏ．５５ ６．Ｏ１ ０．５５ ０．５５ ４．９２ ０．５５ ０．５５ ２．１９ ４．３７ １．６４ ２ １９ ２．１９ Ｏ．５５ ０．５５ ２．１９ １．Ｏ９ Ｉ１．４８ １．６４ ０．５５ ２．７３ ２．１９ ０．５５ ６．０１ １．０９ １．６４ ３．２８ ０．５５ ２．１９ １．６４ １．０９ 为氨基糖苷类抗生素耐药的铜绿假单胞菌中，共检 出１８３株产ＡＭＥｓ菌株，说明携带ＡＭＥｓ在铜绿假单 胞菌对氨基糖苷类抗生素耐药的机制中居于主导地 位，也佐证了ＡＭＥｓ在铜绿假单胞菌对氨基糖苷类 抗生素耐药中的重要性。 种ＡＭＥｓ中除ａａｃｒ３ｊ—Ｉ未 扩增出阳性结果，其他基因检测阳性率由高到低依 为：ａｎｔ（３ｔ９－ｚ，ａａｃ（３）．１１，ａａｃ（６ｔ）．ＩＩ，ａａｃ（６ｔ）．Ｉ， ａｎｔｒ２ 一，，ａｐｈ（３ 一ＩＶ，在美国和日本最常见的基因 ５０６ 型别是ａｎｔ（２ 一，、ａａ￣ｒ６ 一，；欧洲、拉丁美洲和南非 最常见的基因型别则为ａａｃ（３）－ＩＩ，ａａｃ（６ ｒＪＩ，，ａｎｔ（２”）一 和ａａｃｒ６ 一ｌ＋ａａｃ（３）一Ⅳ，与国内的文献报道也有所差 异＿７】。本研究中最常见的氨基糖苷类修饰酶基因是 ａｎｔ（３ 一 。研究中有ｌ３株氨基糖苷类药物耐药的铜绿 假单胞菌未检测出７种ＡＭＥｓ中的任何一种，推测这 些菌株耐药是因为携带其他其它不常见的ＡＭＥｓ，或 由其它耐药机制（如外排泵，外膜蛋白等 所致，有待 于进一步探讨和证实。 研究还发现，７０．９２％的临床耐药菌株同时携带 两种或两种以上的ＡＭＥｓ，有５株铜绿假单胞菌甚 至检测出同时携带５￣ＡＭＥｓ基因，最常见的联合 耐药基因ａａｃ ：）一ＩＩ＋ａａｃ 一ＩＩ＋ａｎｔ（３ 一，，检出率达到 Ｉ １．４８％，说明广州地区铜绿假单胞菌对氨基糖苷类 抗生素的耐药机制复杂，多种ＡＭＥｓ共同导致细菌对 氨基糖苷药物的耐药，复杂的产酶状况导致了临床 菌株复杂多样的耐药表型。通过对有阳性结果的菌 株进行ＤＮＡ测序，发现所测序列与不同种细菌的相 应修饰酶同源，说明氨基糖苷类修饰酶可在广泛的 菌种间通过多种途径ｆ如：质粒、整合子和转座子等） 进行传播和流行，应当引起临床医生的重视。 此外，日本学者近年来发现对氨基糖苷类抗生 素的新的耐药机制——１６Ｓ ｒＲＮＡ甲基化酶（即甲酰化 酶１。目前，在多个国家和地区已检测到编码这种酶 的基因，包括ｒｍｔＡ、ｒｍｔＢ、ｒｍｔＣ、ａｒｍＡ及ｒｔｎｔＤ［３，５，８－９］。 由于１６Ｓ ｒＲＮＡ甲基化酶介导对氨基糖苷类药物的 高度耐药（其典型的ＭＩＣ＞１０２４ｍｇ／ｍＬ），以及编码基 因的高度可移动性，因此将可能使越来越多的临床 分离菌产生对氨基糖苷类药物的高水平耐药，已成 为氨基糖苷类药物耐药机制的研究热点。而ｒｍｔＡ和 ｒｍｔＤ只在铜绿假单胞菌中有报道。为此，我们也对 这两种基因进行了检测，结果未检测￣ｒｍｔＡ、ｒｍＤ 阳性的菌株，说明这种新的对氨基糖苷类高度耐药 的机制尚未在我国广州地区发现，但我们仍不可掉 以轻心，对该种耐药机制的监控应继续进行下去。 综上所述，广州地区近年来耐氨基糖苷类铜绿 假单胞菌中氨基糖苷类修饰酶检出率较高，且有多 型别流行趋势，多基因同时携带现象也较严重，但 尚未有甲酰化酶耐药基因的出现。本研究完善了广 州地区铜绿假单胞菌对氨基糖苷类耐药的分子流行 病学资料，并为临床选用抗生素提供理论依据，帮 耐氨基糖苷类铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究屈艳等 助制定控制医院感染的有效措施，指导研究开发新 的抗菌药物，解决细菌耐药性问题。临床上需重视 耐药基因的检测，ＡＭＥｓ及甲酰化酶基因ＰＣＲ检测方 法的建立为氨基糖苷类耐药机制研究，临床分离株 监测和分子流行病学研究提供了手段。 参考文献 【１］Ｋａｙａｂａｓ Ｕ，Ｂａｙｒａｋｔａｒ Ｍ，Ｏｔｌｕ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ａｎ ｏｕｔｂｒｅａｋ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ｂｅｃａｕｓｅ ｏｆ ｉｎａｄｅｑｕａｔｅ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｉｎ ａ ｕｒｏｌｏｇｙ ｕｎｉｔ：ａ ｐｕｌｓｅｄ－ｉｆｅｌｄ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ－ｂａｓｅｄ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃ ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｃｏｎｔｒｏｌ，２００８，３６（１）：３３—３８． ［２］ 陈茶，黄彬，蓝锴，等．铜绿假单胞菌“泛耐株”耐药相关 基因研究［Ｊ］＿中国抗生素杂志，２００９，３４（２）：１ １ １－１ １３． ［３ ３］Ｄｏｉ Ｙｊ ｄｅ Ｏｌｗｅ￣ａ Ｇａｒｃｉａ Ｄ，Ａｄａｍｓ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅｌ １６Ｓ ｒＲＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｓｅ ＲｍｔＤ ａｎｄ ｍｅｔａｌｌｏ—ｌａｃｔａｍａｓｅ ＳＰＭ－１ ｉｎ ａ ｐａｎｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ｉｓｏｌａｔｅ ｆｒｏｍ Ｂｒａｚｉｌ［Ｊ］．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００７，ｌ２（４）： ８５２．８５６． ［４】 糜祖煌，陆亚华．氨基糖苷修饰酶及其基因检测［Ｊ］．现代 实用医学，２００４，１６（１）：１３—１４． 【５］Ｙａｍａｎｅ Ｋ，Ｄｏｉ Ｙｏｋｏｙａｍａ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｅｔｉｃ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒｍｔＡ ｇｅｎｅ ｉｎ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｓｏｌａｔｅｓ［Ｊ］．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００４，３８（２）： ２０６９．２０７４． ［６］ Ｓｈａｗ Ｋ Ｊ，Ｈａｒｅ Ｒ Ｓ，Ｓａｂａｔｅｌｌｉ Ｆ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ａｎｄ ＤＮＡ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌｉｓｏｌａｔｅｓ［Ｊ］．Ａ ｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，１９９１，３５（３）：２２５３—２２５６． 【７】ＭｉｌｌｅｒＧＨ，ＳａｂａｔｅｌｌｉＦ Ｊ，ＨａｒｅＲＳ，ｅｔａ１．Ｔｈｅｍｏｓｔｆｒｅｑｕｅｎｔ ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ—ｃｈａｎｇｅｓ ｗｉｔｈ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ ａｒｅａ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄ西，１９９７，２４（Ｓｕｐｐｌ １）： ￥４６一Ｓ５１． ［８］ Ｗａｃｈｉｎｏ Ｊ，Ｙａｍａｎｅ Ｋ，Ｓｈｉｂａｙａｍａ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｎｏｖｅｌ ｐｌａｓｍｉｄ— ｍｅｄｉａｔｅｄ １ ６Ｓ ｒＲＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｓｅ，ＲｍｔＣ，ｆｏｕｎｄ ｉｎ ａ ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ ｉｓｏｌａｔｅ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｎｇ ｅｘｔｒａｏｒｄｉｎａｒｙ ｈｉｇｈ－ｌｅｖｅｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｇａｉｎｓｔ ｖａｒｉｏｕｓ ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ［Ｊ］．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００６，５０（１）：１７８－１８４． ［９】Ｇｏｎｚａｌｅｚ—Ｚｏｒｎ Ｂ，Ｔｅｓｈａｇｅｒ Ｔ，Ｃａｓａｓ Ｍ，ｅｔ ａ１．ＡｒｍＡ ａｎｄ ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ［Ｊ］．Ｅｍｅｒｇ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，２００５，１ １（６）：９５４－９５６．
