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尿液红细胞定量分析方法学的探讨
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塞 . 坠匿堂2 生!Q旦箜 1鲞箜 塑 卫 rn ! nd b0ratory Medicine,Oct.2013,V01.31。N0.5 ・425. ・论著・ 尿液红细胞定量分析方法学的探讨 李扬宇,郑春盛 f福建中医药大学附属人民医院检验科,福建福州350004) 摘要:目的探讨并比较尿液红细胞自动化仪器定量方法与人工镜检定量计数的关系。方法制备尿红细胞标准液.分 别用不离心、离心两种人工镜检方法和UF一100全自动尿沉渣分析仪、朗迈UriSed全自动尿沉渣分析仪两种自动化尿液分 析仪进行检测,分析四种尿红细胞定量方法间的差异。结果离心镜检法检测尿红细胞结果与理论浓度之间偏差最大.不离 心镜检法、UF一100分析仪法、朗迈UriSed分析仪法检测结果较接近理论浓度。不离心镜检法检测结果与理论浓度之间之间 差异无统计学意义(P>0.05);UF一100分析仪、朗迈UriSed分析仪、离心镜检检测结果与理论浓度间的差异均有统计学意义 (P<0.05);不离心镜检法检测结果与UF一100分析仪、朗迈UriSed分析仪检测结果间的差异无统计学意义 0.05):离心镜检 检测结果与UF一100分析仪、朗迈UriSed分析仪检测结果之间的差异有统计学意义fP<0.05)。UF一100分析仪检测结果与朗 迈UriSed分析仪检测结果之间的差异有统计学意义(P<O.O5)。四种方法的检测结果与理论值之间均有良好的线性关系fr值 分别为0.991,0.999,0.999,0.998)。结论尿液红细胞离心镜检计数法不适用于红细胞定量分析。UF一100分析法和朗迈 UriSed分析法由于具有快速自动化检测的特性更适用于尿红细胞常规定量检测,但对尿红细胞的识别应另行探讨 不离心 镜检计数法能较准确地反映尿液红细胞的实际浓度,但由于操作繁琐,效率低下且存在人工误差而不实用.可作为自动化尿 分析仪的复检方法 关键词:尿红细胞:定量分析;尿沉渣分析仪 中图分类号:R446.12+1 文献标识码:A 文章编号:1674一l129(2013)05—0425—03 ● DOI:10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.007 Methodological study of quantitative analysis for urinary red blood cells LI Yangyu,ZHENG Chunsheng.Department of Laboratory Medicine,Afilfiated People Hospital fFuojio ̄University ofTraditional Chinese Medicine,Fuzhou 350004,China Abstract:Objective To study the quantitative method of detecting urinary red blood cells(RBC)by automated urine cell analyzer and evaluate its relationship with the microscopic count.Methods Urine samples with different concentrations of RBCs were detected by manual microscopy with/without centrifugalization,UF一100 urinary sediment analyzer and LabUMat UriSed auto— mated urine cell analyzer,respectively.Results Urine RBC concentration detected by manual microscopy with centrifugalization deviated dramatically from theoretical concentration.While the concentration analyzed by manual microscopy without centrifuga1. ization UF一100 and LabUMat UriSed was close to theoretical concentration.There was no statistical difference between resuhs analyzed by manual microscopy without eentrifugalization and theoretical concentration 】>0.05).There were statistical differences among the results tested by manual microscopy with centrifugalization,UF-IO0 and LabUMat UriSed fP<0.05).There were no sta— tistical difference between results analyzed by manual microscopy without eentrifugalization and that by UF一100 or by LabUMat UriSed rP>0.05).There were statistical diference between results analyzed by manual microscopy with eentrifugalization and that by uF一100 or by LabUMat UriSed(P<0.05).There was statistical difference between results analyzed by UF一100 and that by LabUMat UriSed fP<0.05).There was good linear relationship between the detection results of the four methods and the theoretical concentration(r was 0.991,O.999,0.999,0.998,respectively).Conclusion Manual microscopy with eentrifugalization is not appli— cable for the quantitative analysis of urinary RBCs.UF一100 and LabUMat UriSed are more applicable for routine quantitative de— tection of urinary RBCs for their quick and automated features.Nevertheless,the function for the cell identification should be un— der further investigation.Manual microscopy without eentrifugalization may reflect the actual RBC concentration more accurately. But it's overelaborate,ineficientf and existing artificil error,ita should be used for rechecking the results detected by the automated urine cell analyzer. Key words:Urinary Red Blood Cells;Quantitative methods;Urinary sediment analyzer 尿液红细胞镜检对于泌尿系统疾病的诊断、 鉴别诊断、定位及预后判断具有重要的参考价值, 是重要常规试验项目。为此,美国CLSI和中华医 吾面 ■ 手 年8月出生,主管技师,毕业于福 建医科大学.本科.主要研究方向为l临床检验。 学会检验分会分别对尿液红细胞定量进行了规范 [11。随着自动化仪器如UF一100全自动尿沉渣分析 仪、朗迈UriSed全自动尿沉渣分析仪等的应用.为 尿红细胞定量提供了新的方法。但在临床应用上 .426. 实验与检验医学2013年10月第31眷第 塑 卫 ri Il nd Laboratory MediciI1e…Oct , . . 各种检测方法差异很大.为了探讨这些差异的原 因.我们以红细胞标准液的浓度为参考标准.对不 离心、离心镜检计数、UF一100全自动尿沉渣分析 仪、朗迈UriSed全自动尿沉渣分析仪四种方法进 行比对分析,现报告如下 先在低倍视野下观察细胞的分布情况.再在高倍 视野下计数lO个大方格内的红细胞数 离心镜检 计数法:将lOml尿液标本倒入一次性尿沉渣管, 充分混匀。以1500 r/min.离心5 min,吸去上清液, 留取0.2 ml沉渣.用一次性吸管轻轻混匀后,滴入 一1材料与方法 1.1材料朗迈UriSed全自动尿沉渣分析仪及配 次性尿沉渣计数板内.静置片刻.先在低倍视野 下观察细胞的分布情况.再在高倍视野下计数lO 个大方格内的红细胞数 离心后尿液标本的红细 胞数(红细胞数/LLl')=10个大方格的红细胞数/浓缩 倍数 在标本配制后2 h内完成所有检测 1.5检测方法将各浓度尿红细胞标准液分成6 套尿沉渣计数板f匈牙利77Elektronika公司1:UF一 100全自动尿沉渣分析仪f日本Sysmex公司);普通 双目生物显微镜(日本0lympus公司);TDL一5一A低 速离心机(中国飞鸽公司);一次性尿沉渣计数板f北 京恒瑞天创机电设备有限公司1 1.2标准红细胞的制备选择福建省血液中心提 供的滤白洗涤红细胞样本1份.用血细胞分析仪 f用美国雅培公司提供的校准品校准.批号为 份,每份分别用不离心镜检法、UF一100分析仪法、 朗迈UriSed分析仪法、离心镜检法检测。 1.6统计学处理数据处理采用SPSS18.0统计软 件进行分析.统计方法采用Wilcoxon秩和检验 L5023.N5023.H5023) ̄0量红细胞数值.使用正常 人混合尿液f收集多人尿液.用高速离心方法除去 2结果 2.1四种方法尿红细胞检测结果离心镜检法检 测尿红细胞结果与理论浓度之间偏差最大.不离 心镜检法、UF一100分析仪法、朗迈UriSed分析仪 法检测结果较接近理论浓度 在浓度为1000/ ̄1和 细胞成分,留取上清液1将滤白洗涤红细胞配制成 浓度为1000/I,1、500/Ixl、250/Ixl、125/Ixl、62.5/txl、 31.3/ l、15.6/Ixl和7.8/ I的标准液。 1.3分析仪法检测前充分混匀尿液.严格按分析 仪操作说明书进行检测 检测中用SYSMEX公司 的UF—CHECK液对UF一100尿液分析仪进行室内 质控监测 浓度500/ ̄1时以不离心结果最高.离心结果最低 其它浓度以UF一100分析仪测试结果最高.离心镜 检法最低。UF一100分析法除为1000/Ixl外.结果均 为正偏差:不离心镜检法除浓度为1000/ ̄1和浓度 1.4人工镜检定量计数法不离心镜检计数法:将 混匀尿液滴人一次性尿沉渣计数板内,静置片刻。 500/txl外.结果均为负偏差:其它两种检测方法结 果均为负偏差。离心镜检法偏差最大。见表1。 表1四种方法红细胞检测结果 ±s,细胞数^J1) 2.2四种方法尿红细胞检测结果与理论浓度经 Wilcoxon秩和检验结果不离心镜检法检测结果 与理论浓度之间之间差异无统计学意义:UF一100 测结果与UF一100分析仪、朗迈UriSed分析仪检 测结果之间的差异有统计学意义 UF一100分析仪 检测结果与朗迈UriSed分析仪检测结果之间的差 异有统计学意义 见表2。 2.3四种方法尿红细胞检测结果与理论浓度的线 分析仪、朗迈UfiSed分析仪、离心镜检检测结果与 理论浓度间的差异均有统计学意义:不离心镜检 法检测结果与UF一100分析仪、朗迈UriSed分析 仪检测结果间的差异无统计学意义:离心镜检检 性关系各检测方法检测结果与理论浓度均有良 好的线性关系 见表3 塞 医堂 生 旦笙 鲞箜 塑垦 坠 ! Laboratory Medicin_ ̄_e Oct.2013,Vo1.31,No.5 .427. 表2四种方法尿红细胞检测结果与理论浓度经 Wilcoxon秩和检验结果 胞存在上清液中.例如一些肾脏病变时,陈旧红细 胞Hb溢出,成为影细胞.使尿液比重降低.红细胞 不能完全离心到管底而留在上清液中。f21离心时 一些红细胞被机械性破坏 f31离心后的沉渣未充 分混匀 f41计数的尿红细胞在计数池内的分布不 匀造成误差。f51尿红细胞数量较少时,10个大方内 的红细胞量太少。f61尿沉渣管的材质不同,红细胞 黏附在管壁.造成红细胞数量减少。f71未能准确留 取0.2ml的尿沉渣。f81在结果换算时要除以50这 表3四种方法尿红细胞检测结果与理论浓度的线性关系 3讨论 尿沉渣的显微镜检查是识别尿有形成分的 “金标准” 为规范尿沉渣镜检的方法学.中华医 学会检验分会和美国,CLSI都制定了尿沉渣镜检 的标准操作规程.检测时留取l0 ml尿液于尿沉渣 离心管中.标准条件下离心后.准确留取0.2ml沉 渣混匀.滴入标准尿沉渣计数板内.记录每高倍视 野中尿液有形成分的数量.结果用l0个视野中最 少和最多的有形成分数f×~XX个细胞/高倍视野1报 告 上世纪80年代后建议采用每微升有形成分数 量f×个细胞/Ixl1的方式报告结果.即准确计数一定 体积计数板内细胞数后.再经换算得出尿沉渣中 有形成分的数量 人工镜检由于操作繁琐.在标本 量少时是可行的.但是如果标本数量过多.那么检 测结果的质量和速度就会受到影响_3_ 近年来.为 提高检测效率.及时发出检验报告.各种自动化的 尿液分析仪相继而世.减轻了临床检测压力.但是 从临床应用上看.各种检测方法之间有很大差异. 给临床应用带来混乱 本研究结果表明.离心镜检法检测尿红细胞 结果与理论浓度之间偏差最大.不离心镜检法、 UF一100、朗迈UriSed分析仪检测结果较接近理论 浓度 其中不离心镜检检测结果与理论浓度之间 的差异无统计学意义 离心法检测结果与理论值 相差很大.其检测的结果均比理论值明显减少 产 生这种误差的原因可能有以下几个方面 :f1)尿液 标本在离心后.并没有全部沉到管底。还有部分细 个浓缩系数,放大了上述的误差。 UF一100全自动尿沉渣分析仪是利用流式技 术与电阻抗原理进行细胞计数 朗迈UriSed全自 动尿沉渣分析仪是将不离心的尿液加入特制的计 数板中.通过内置离心机以2000r/min离心f半径 6cm)10s.使尿液均匀地沉积于计数板底部,然后采 用显微一电荷耦合器件(CCD)摄像技术对尿液成分 图像进行拍摄.最后通过人工神经网络等多种计 算模型对尿液成分进行自动识别和分类计数并统 计结果.检测结果可通过对图像的人工识别进行 修正 这两种检测方法检测尿红细胞结果与理论 值之间的差异有统计学意义.但是它们与不离心 镜检法之间的差异无统计学意义.与理论浓度之 间也有良好的线性关系.再加上具有快速自动检 测的特性.这两种方法可以作为临床尿红细胞定 量的常规检测方法 综上所述,不离心镜检、UF一100分析法、朗迈 UriSed分析法检测时尿液均未离心.其结果与理论 值较接近.在临床尿红细胞常规定量上是可取的 UF一100分析法、朗迈UriSed分析法两种方法由于 具有快速自动化检测的特性更适用于尿红细胞常 规定量检测.不离心镜检法由于操作繁琐.效率低 下且存在人工误差而不实用.可用于自动化尿分 析仪可疑结果的复检方法[ 离心法镜检存在诸 多影响因素.不适用于定量分析.但是离心镜检法 可以浓缩尿液中的有形成分.对于早期发现病理 成分.具有重要的诊断意义.如果能够进行标准化 操作.其结果也可具有一定的代表性,仍是常规检 测的重要方法 此次研究是在无其它物质干扰的理想状态下 检测尿红细胞 在实际工作中.尿液标本的存放时 间、尿红细胞经肾脏或泌尿道挤压等破坏、尿液比 重过低、尿pH值偏高、尿液标本收集容器受到消 毒剂污染,真菌、脂肪滴、结晶等被误(下转第439页) 实验与检验医学2013年10月第3l卷第5期Exoefimental and Laboratorv Medicine Oct! , !! !, Q: .439. 人畜粪便污染 且水体自净能力较差.卫生学危害 也较大闱.同时我们在调查过程中还发现,某县大 做到不喝生水,不污染水资源,以切实改善当地农 民的饮水条件,为当地农民的生命安全和身体健 康提供保障 参考文献 [1】刘辉,余明星,王瑞,等.饮用水安全应急监测规划概述[J1.人民长 多数农村饮用水水井深度不够.大多为浅层地下 水.导致地下水容易受到雨水冲刷的污泥或者环 境中垃圾的污染.因此与地表水没有形成明显差 异。 江.201 1,42(2)87—89. 『2132 ̄部国家标准化管理委员会.GB/T5750—2006生活饮用水卫生 标准生活饮用水标准检验方法【M】.北京:中国标准出版社, 2o07. 本次调查中所反映的某县农村饮用水卫生情 况十分严峻。尤其是微生物超标.成为当下亟待解 决的问题 一方面.政府急需加强和落实国家的农 【3]卫生部国家标准化管理委员会.中华人民共和国生活饮用水卫 村饮用水安全工程的相关政策.给当地农民的生 生准【M].北京:中国标准出版社,2010. 活用水提供必需的消毒等处理。改善当地的水源 【4]谢丰光,雷源茂,曾晖.桂阳县农村生活饮用水安全与卫生状况调 查【J】.实用预防医学,2010,17(8):1577—1578. 环境和饮水设施,改良水质,防止雨水或者其他环 [5】刘琼,唐衍兴,朱敏.农村生活饮用水水质监测分析【J].实验与检验 境因素带来的污染 并且进一步加强对当地饮水 医学,2010。28(3):317. 设施的管理和监测:另一方面。加强对当地农民的 【6】闻金生,熊发平.上高县1988—2007年水质检测结果分析叨.实验 宣传教育.提高农民健康饮水的意识.让大家努力 与检验医学,2008.26f6):717—718. 接第427页)判为红细胞,菌尿等都会干扰尿红细 【4】丛玉隆,马骏龙,张时民,等.尿液细胞成分定曩分析方法学研究田. 胞定量检 ̄lJ[8-1o]。因此尿液标本检测前应重视标本 中华检验医学杂志,2006,29(3):211-214. 分析前质量控制[111,对尿分析仪结果有疑问时。应 【5]陆玉静,马骏龙,刘培培,等.朗迈UrisSed型全自动尿沉渣分析仪 的应用评价啪.解放军医学杂志,2010,35(3):326—329. 进行人工镜检确认.决不能不加分析作为确诊依 【6】祝丙华,王会中,高德禄,等.UrisSed全自动尿液有形成分分析仪 据 采用尿沉渣分析仪法和显微镜检查法联合检 性能评价【J】.国际检验医学杂志,2012,33(14):1727—1729. 测尿液可降低漏检率.提高检测的精确度,为临床 [7】丛玉隆.自动化仪器检查尿有形成分的问题与思考【J].实用医院 准确诊断和及时治疗提供有效的依据【 。此外,由 临床杂志。2012。9f3):l一3. 于在尿红细胞标准液配制过程中.样本的稀释也 【8】洪英,田居祥.AVE-762C型尿液有形成分分析仪系统性能评价 [J].实验与检验医学,2012,30(5):524—525. 会造成一定程度的误差.本研究所用的四种检测 【9】马骏龙,丛玉隆.菌尿对尿液分析仪测定尿红细胞的影响叨.中华 方法检测红细胞时的差异并不代表各方法学的真 医学检验杂志.1999.22(4):206—208. 实识别能力 【10】陈津,王德春,王丹,等,IRis iQ2OO全自动尿沉渣分析仪与Symex 参考文献 UF一1130分析仪及人工镜检的比较和评价[J].中华检验医学杂志, 【1】叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程【M】.第3版.南 2006,29(4):374-375. 京:东南大学出版社.2006:293—294. 【l1】高杰.检验科应重视分析前标本因素对检验结果的影响[J】.实验 【2】丛玉隆.尿液沉渣检查标准化建 ̄3qJ].中华检验医学杂志,2002,25 与检验医学.2012.30 ̄):461—462. (3):249-250. [12]张红霞,费安兴,江鸿,等.尿干化学分析法、尿沉渣分析仪法和显 【3】丛玉隆,马骏龙.尿液有形成分镜检与自动化检测方法学利弊和 微镜检查法联合检测尿白、红细胞及管型结果分析 .实验与检 互补分析『J].中华检验医学杂志,2009,32( ̄:609—611. 验医学.2012.30(3):288—290.
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