・502・虫垦堡金!逝压兰!!垒生!旦筮!!鲞筮§塑£!世型丛型塑些!!垦!i塑:』!堕;Q!!:!!!:!兰:塑!:12225—319X.2014.01.05.HRS/EHRA/ECASsurgicalpatientandablationof10.1016/j.jaec.2014.03.022.[4]CalkinsexpertatrialH,KuckKH,CappatoR,eta1.2012con5ensus[7]张海波,盂旭,韩杰,等.278例心脏瓣膜手术同期行冠状动脉旁路移植术的临床分析[J].中国综合l临床,2007,23(12):1097—1099.DOI:10.3760/cma.J.issn.1008—6315.2007.12.019.statementoncatheterandforfibrillation:recommendationsselection,follow—up,proceduraltechniques,patientmanagement[8]MiyairibiatrialT,MiuraS,KigawaI,eta1.Mid・termresultsofprocedureusingbipolarradiofrequencyacloseddefinitions,endpoints,andresearchtrialdesign:areportoftheHeartRhythmablationSociety(HRS)TaskForceonCatheterandSu画caltheconcomitantlyperformedwithHOH—mitralcardiacoperations[J].InteractCardiovascAblationofAtrialEuropeanbranchofHearttheFibrillation.DevelopedinpartnershipwithThoracSurg,2009,9(2):169—172.doi:10.RhythmAssociation(EHRA),aArrhythmiatheAmericanregistered1510/icv_ts.2008.195149EuropeanSocietyofCardiology(ESC)andthe[9]崔永强,孟旭,李岩等.干式双极射频消融手术治疗器质性心房颤动[J].中国医药,2010.5(6):522—524,DOI:10.3760/ema.j.issn.1673.4777.2010.06.015.EuropeanAmericanRhythmCardiacwithSociety(ECAS);CollegeofAsiaandincollaborationCardiology(ACC),PacificHeartHeartAssociation(AHA),thethe[10]SoniLK,CedolaSR,CoganJ,eta1.RishtatriallesionsdoofanotSociety(APHRS).andtheSociety《ThoracicFoundation.theAmericanSurgeonsimprovethesurgicalefficacyofcompleteleftatriallesiontheysetinthe(STS).EndorsedbyofCardiologygovemingbodiesoftheAmericanCollegeHeartAssociation,thetreatmentatrialfibrillation,butThoracCardiovasedoincreaseproceduralmorbidity[J].JSurg,2013,145EuropeanCardiacArrhythmiaSociety.山eEuropeanHeartRhythmAssociation,theHeartRhythmSocietyofThoracicSurgeons,theAsiaPacific(2):356—361.doi:10.1016/j.jtevs.2012.09.091.[11]WorkuB,PakSW,CheemaF,eta1.IncidenceandpredictorsofSllrgicalablationforatrialfibrillationSociety,andtheHeartRhythmSociety[J].HeartpacemakerplacementafterRhythm.2012,9(4):632—696.doi:10.1016/j.hrthm.2011.12.016.[J].Ann[12]AdThoracSurg,201l,92(6):2085—2089.doi:10.1016/j.athoracsur.2011.07.058.RM,Gammie[5]AdN,SuriJS,eta1.SurgicalablationofatrialinNorthN,HenryLL,HolmesSD,eta1.Theimpactofsurgicalhiigh—riskablationfib—llationtrendsCardiovascandoutcomesAmerica『J1.Jnoracforatrialfibrillationinpatients[J]AnnThoracSurg,Surg,2012,144(5):1051—1060.doi:10.1016/j.jtcys.2012,93(6):1897-903.doi:10.1016/i.athoracsur.2012.02.094.2012.07.065.[6]Cox儿.Abriefoverviewofsurgeryforatrialfibrillation[j].Ann(收稿13期:2016-04-05)CardiothoracSurg.2014Jan;3(1):80-8.doi:10.3978/j.issn.(本文编辑:张印朋)血管内皮生长因子C和E—cadherin与胃癌侵袭转移的关系刘维明李雪峰郭健石志良周国强彭建宛传丹【摘要】目的研究血管内皮生长因子C(VEGF.C)、E.cadherin在胃癌中mRNA和蛋白水平的表达,分析其表达与I临床病理特征间关系,探讨其在胃癌中的表达意义。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应方法检测40例胃癌与癌旁正常胃黏膜组织中VEGF—C、E-cadherinmRNA的表达;应用免疫组织化学方法检测胃癌与癌旁正常胃黏膜VEGF—C、E.cadherin蛋白的表达;分析VEGF-C、E—cadherinmRNA和蛋白表达与临床病理特征间的关系。结果40例胃癌患者癌组织中VEGF.C蛋白表达量0.461±o.012较癌旁正常组织0.036+0.023显著增高(t=1.101,P<O.05),而E—cadherin明显低于癌旁正常组织(0.079+0.002与0.321-+0.005,t=1.844,P<O.05)。VEGF—CmRNA表达与组织学分级、TNM分期、淋巴结和远处转移等有关(t值分别为一1.621、一1.474、一2.378、一1.966,P均<0.05);E-cadherinmRNA表达与肿瘤直径、组织学分级、TNM分期上有显著性差异(t值分别为1.875、1.673、1.544,P均<O.05)。VEGF—C与E—cadherin蛋白表达呈负相关(r=-0.688,P<O.05)。结论VEGF—C在胃癌组织表达上调,而E—cadherin表达下调,可能参与胃癌细胞侵袭及转移的发生。【关键词】胃癌;血管内皮生长因子C;E-cadherin基金项目:常熟市卫生局科技计划项目(csws201206)VascularendothelialfactorCandE.cadherinrelationshipwiththeinvasionandmetastasisofhumangastriccancerLiuWeiming,LiXuefeng,GuoJian,ShiZhiliang,ZhouGuoqiang,R增Jian,WanDOI:10.3760/cma.j.issn.1008-6315.2016.06.008作者单位:215500扬州大学医学院附属常熟市第二人民医院普外科(刘维明、李雪峰、郭健、石志良、周国强、彭建);常熟市医学检验中心(宛传丹)通信作者:刘维明,Email:1wm6818@sina.com万方数据主圄堡盒!逝压!Q!垒生!旦星!!鲞筮鱼翅g!型型塑!堕丝堕笪垦!i塑:』!塑!!!!,y丛:!!,盟!!!Chuandarl-GeneralSurgeryDepartment,theSecondHospitalofChangshuAffiliatedtoMedicalCollegeofYangzhouUniversity,Changshu215500,ChinaCorrespondingauthor:LiuWeirning,Email:1wm6818@sina.cornToinvestigatetheexpressionofvascularendothelialfactorc(VEGF.C)andE。cadheriningastriccancerandexploretherelationshipbetweenexpressionofVEGF—CandE.cadherinandtheReal—timequantitativereverseranscriptase.polymerasechainrectionpathogenesisofgastriccancer.Methodswas【Abstract】0bjectiveappliedOff40casesofgastriccancerandcorrespondingadjacentnoncanceroustissues.inordertodetectmRNAexpressionofVEGF-CandE—cadheringene.VEGF.CandE.cadherinproteinexpressioningastriccancerandadjacentnormalgastricmucosaweredetectedbyimmunohistochemistry.StatisticalanalysisWascarriedouttoanalyzethecorrelationthesegastrictissuesamongVEGF—C.E.cadherinandproteinexpressionwithvariousclinicalparametersincancerpatients.ResultsWas0.461±0.012,significandyexpressionTheexpressionofVEGF.Cproteinin40casesofgastriccancer'scancerhigherthanthatintheadiacentnormaltissues(0.036+0.023;£=l_101,wasP<0.05),butE—cadherinsignificantlylowerthanthatoftheadjacentnormaltissues(0.079±0.002VS.0.32l±O.005;t:1.844,P(O.05).ThereWascorrelationbetweenVEGF.CmRNAexpressionwithhistologicalgrading,TNMstaging,lymphnodeanddistantstage,thereWasmetastasis(t=一1.621,一1.474,一2.378,一1.966,Ptumor<0.05).ThereWascorrelationbetweenE.cadherinmRNAexpressionwithasize,histologicalgrading.TNMsignificantdifference(t=1.875,1.673,1.544。P<0.05).VEGF—CanimportantexpressionWasnegativelycorrelated(r=一0.688,P<0.05).ConclusiondecreasedexpressionofE.eadherinmayplayGastricVascalarendothelialfactorC:andE.cadherinproteinUp—regulatedofVEGF—CgeneandcancerroleinthecarcinogenesisofgastricE—cadherin【Keywords】cancer;Fundprogram:ScienceandTechnologyPlanProjectsofHeathBureauofChangshu(csws201206)胃癌是目前常见的消化道恶性肿瘤之一,有文献表明胃癌的浸润和转移与多种抑癌基因失活有关。E—cadhedn是抑制肿瘤侵袭转移的基因之一¨J,而血管内皮生长因子C(VEGF—C)是参与肿瘤血管和淋巴管生成的血管生成因子"。3J。本研究采用实时荧光定量RT・PCR和免疫组织化学方法对胃癌癌组织与癌旁正常胃黏膜组织中的VEGF.C、E-cadherin表达情况进行检测,并分析VEGF—C、E—cadhefin表达与l临床病理特征间的关系,进而分析探讨其与胃癌侵袭转移的关系。资料与方法1.一般资料:随机收集我院普外科2013年3月至2014年3月间胃癌手术切除标本,术中立即取定量,RNA分装后置于-80%:冰箱保存备检。逆转录操作按说明书进行。所得eDNA置于一20℃低温冰箱保存备检。3.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应:VEGF—C、E-cadhefin引物系广州复能生物工程有限公司合成,VEGF—C,E—cadhefinGAPDH。使用ToYoBo公司试剂,反应体系10斗l,其中试剂SYBR5斗l,上下游引物浓度125nmol/L各1肛l,eDNAl斗l,消毒蒸馏水2“l,RT.PCR反应条件:95℃预变性1min,然后95cc15S,60℃60S,40个循环,在ABl7900HT(美国应用生物系统公司ABI)上进行RT—PCR扩增反应。每个样品重复3次,取平均值。每次实验以相应溶解曲线和1.5%琼脂糖凝胶电泳来判断扩增产物的特异性。结果判定:CT值为每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环,用2一AACT方法分析E—cadherin、VEGF—C相对表达水平。4.免疫组织化学染色:一抗(E-cadhefin)购于材分别放人10%的甲醛固定和液氮速冻后置于一80℃低温冰箱保存待查。标本为40例胃癌癌组织及距肿瘤约8cm左右的正常胃黏膜,其中男29例,女11例。40例胃癌包括15例低分化腺癌,4例高分化腺癌,14例中分化腺癌,6例黏液腺癌,1例高级别上皮内瘤变。患者年龄48.0~82.0岁,中位年龄66.3岁,所有标本均由我院病理科医师确诊。胃癌按国际抗癌联盟(UICC)公布的TNM分期标准进行分期。2.RNA的抽取与eDNA的合成:取标本组织约50谷哥公司,一抗(VEGF-C)购于boster公司,免疫组织化学试剂盒及显色剂购于福州迈新生物技术开发公司,采用免疫组织化学UhraSensitiveTMS—P试剂盒。实验步骤按试剂盒说明书进行。5.免疫组化蛋白表达量判断:阳性判定标准:VEGF—C、E—cadhefin在胞浆或胞膜出现棕黄色颗粒,即低倍光镜下随机选取5个视野,每个视野在高倍镜下计数100个细胞中的阳性细胞数,取其均值,阳性细胞数≥10%为阳性表达,<10%为阴性表达。采用HPIAS一1000彩色病理图文报告管理系统对mg在冰上研磨加Trizol(美国Invitrogen公司)裂解组织提取RNA,方法按试剂盒说明书进行,所提取的总RNA用分光光度计DU8000测定其纯度并万方数据生国筮金!垣瘗!Q!鱼生!旦墓!!鲞筮!期鱼!世型丛!!丝塑丛£堕塑:』!些兰Q!鱼,!型:j!:塑!:垒VEGF.C、E.cadherin的表达进行半定量分析,每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野,测定每视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积,计算阳性面积率。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测定值。阳性面积率=(单位面积中阳性反应的显著增高(t=1.101,P<O.05),而E-cadherin明显低于癌旁正常组织(t=1.844,P<0.05)。4.VEGF—C、E.cadherin蛋白表达的相关性分析:见表3。讨论总面秽单位面积中细胞的总面积)X100%。6.统计学处理:应用统计学软件SPSS19.0处理数据。正态分布的计量资料以x±s表示,两组间比较采用t检验;相关分析采用Spearman等级相关检验。P<0.05为差异有统计学意义。结1.VEGF.C、E.cadherin胃癌是世界范围内最常见的消化道恶性肿瘤之一,形成原因及机制目前尚未明确,有学者认为正常细胞的癌变、肿瘤血管的形成、肿瘤细胞凋亡、抑制及肿瘤细胞的增值与胃癌的形成有关,而这些因素与胃癌患者术后的生存率密切相联。因此研究胃癌术后复发与转移对患者生存期及后续治疗有重要的临床意义。VEGF—C是肿瘤血管生成和淋巴管生成的重要果mRNA表达与临床病理学特征的关系:见表1。2.胃癌及癌旁正常组织中免疫组织化学染色VEGF—C、E—cadherin蛋白表达特征:VEGF-C、E—血管生成因子∽。J,而原发灶浸润和转移是导致其短期内死亡的主要原因。本研究检测了胃癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中VEGF—CmRNA和蛋白的表达情况,免疫组织化学检测结果发现癌组织中VEGF—C的阳性表达率明显高于癌旁正常胃黏膜组织(P<0.01)。采用RT—PCR法对VEGF—CmRNA在胃癌cadherin阳性表达主要分布在细胞浆,见图l。3.胃癌及癌旁正常组织中VEGF—C、E.cadherin蛋白表达情况:见表2。40例胃癌VEGF—C阳性表达35例(87.5%),E.cadherin阳性表达只有6例组织中的表达量检测也高于癌旁正常胃黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.01)。VEGF-CmRNA表(15.0%);40例胃癌旁正常胃黏膜组织中VEGF—C阳性表达只有16例(40.0%),而E—cadherin阳性表达34例(85,0%)。胃癌癌中VEGF—C蛋白表达量达量与组织学分级相关、TNM分期、淋巴结、远处转移等有相关性(P均<0.05),但与患者年龄、性别、表l不同分组数据间E—cadherin与VEGF—CmRNA的表达量(2.AACT,x士s)组别年龄<60岁≥60岁性别男性女性肿瘤直径<3.0enl例数VEGFCmRNA表达量t值P值E—cadherinmRNA表达量t值P值9.541±0.3400.860+0.6830.917土O.8890弛9.022士0.7498.575±0.929O.88l±O.6760.97l-sO.222凹¨10.578±0.49710.00,.4-1-02201.276±0.8720.747±O.678≥3.0cm他船8.732±0.327组织学分级高、中分化低分化TNM分期I+IIIII+IV1.209±0.3951.215±1.0340.773±O.7306.656±0.5201.147+0.9600.708=t=0.696堰笼11.145±0.690他船12.518土0.36l淋巴结阴性0.759±0.4890.966_+0.6470.89l±O.895阳性远处转移阴性阳性0弛11.217±0.8597.976±0.5720.896±0.8760.993±0.535%019.476±0.120万方数据史垦绽金!晦鏖垫!!生!旦笠!!鲞筮i期垦!丛丝丛!ii!堡堡垡垦!i坠:』!塑垫!鱼:!!!:丝:堕!:!燃图1霪㈣燃蕊E.cadherinmRNA检测结果发现在癌旁正常胃黏膜组织中的表达量高于胃癌组织(P<0.01)。胃癌癌组织中E—cadhefinmRNA阳性表达量与患者年龄、鬣性别、淋巴结、远处转移无相关性(P均>0.05),在肿瘤直径、组织学分级、TNM分期上有显著性差异(P均<0.05)。表明在胃癌组织中E—cadherin的低表达与及侵袭转移有关。本研究同时运用麟}露爱:;‘注:A.正常组织VEGF-C;B.正常组织E.eadherin;C.癌组织VEGF—C;D.癌组织E.cadherin攀一Spearman等级相关检验性分析显示,胃癌中的E-cadhefin与VEGF-C蛋白呈负相关(r=一0.688,P<0.05),表明胃癌的发生过程中E—cadhefin低表达时伴随着VEGF-C蛋白的高表达。综上所述,结合本试验研究结果分析,胃癌的发生发展过程可能是因为VEGF.C增殖为肿瘤的侵袭和转移提供了有利的条件,而E—cadhenn在胃癌组织中表达减少,导致细胞失去黏附能力而产生了高胃癌及癌旁正常组织中免疫组织化学染色VEGF—C、E—cadherin蛋白表达特征(sP染色.x400)表2胃癌组织与癌旁组织的E—cadherin与VEGF—C蛋白表达的阳性面积率分析(;±s,%)组别例数VEGF—C蛋白表达量E.eadherin蛋白表达量度的侵袭性,更易于转移。因此检测VEGF—C、E—cadherin表达对判定胃癌的侵袭转移有一定的指导意义。参考文献[1]AokiR,YasudaM,TorisuR,eta1.RelationshipandE・cadherinexpressioninbetweenlymphnodemetastasissubmucosalinvasiveRes,2009,69gastriccarcinomaswithastric—phenotype[J].Cancer表3胃癌癌组织中E—cadherin、VEGF.C蛋白表达相关性分析(5):159—167.[2]Yancopoulos242—248.GD,DavisS,GaleNW,eta1.Vascular-specificgrowthfactotsandbloodvesselformation[J].Nature,2000,407(6801):[3]MakinenT,VeikkolaT,MustjokiS,eta1.Isolatedlymphaticendothelialcellstransducegrowth,SuturaltheVEGF-C/Dreceptor4762.4773.andmigratorysignalsviaVEGFR.3[J].EMBOJ,2001;20(17):mediatedRhoAcellmigration肿瘤大小等临床特征间无相关性(尸均>0.05)。由此我们推测VEGF—C的高表达可能促进了胃癌的侵袭转移,与Murray等Mo研究结果基本一致。[4]MurrayD,HorganG,MacmathunaP,eta1.NETlfacilitateslysophosphatidieactivationacidinducedandinvasioningastriccancer[J].BritishJournalD,eta1.Somaticofancer,2008,99(8):1322—1329.E—cadherin是一类介导细胞之间相互粘附的钙依赖性跨膜蛋白,当E-cadhefin表达下降或缺失,肿瘤细胞易于脱离,一旦获得转移的必要条件,就可脱离原发灶而发生侵袭和转移【5击J。在乳腺癌的研究中,Turashvili等¨o发现42.9%的乳腺癌组织中存在E.cadhefin表达缺失,且E.cadhefin的表达缺失与乳腺癌的淋巴结转移、远处转移、TNM分期及预后不[5]CorsoG,CarvalhoJ,MarrellimutationsanddeletionsoftheE・eadheringenepredictpoorwithgastric875.survivalofpatientscancer[J].JClinicalOneology,2013,31(7):868—[6]PinheiroH,CarvalhoJ,OliveiraP,eta1.TranscriptioninitiationarisingfromE・cadherin/CDHlintron2:anovelproteinisoformthatincreasesgastriccancercellinvasionandangiogenesis[J].HumanJ,etofE—MoleeularGenetics2012,21(19):4253・4269.K,Bouehalal,Expressionin[7]TurashvilicadherinbreastG,Bouehalovaandc—erbB-2/HER一2/neuoncoproteinhish-grade良有关,而Sasaki等旧1证实E—cadhefin在食管癌中呈现异常表达,且与患者预后密切相关。本研究检测了胃癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中E—cadhefinmRNA和蛋白的表达情况,免疫组织化学检测结果发现癌旁正常胃黏膜组织中E.cadhefin的阳性表达率明显高于胃癌组织(P<0.01);采用RT-PCR法对cancer[J].CaskPatol,2007,43(3):87—92.K.NatsugoeS,IshigamiS,eta1.SignificanceE-eadherinancer[8]SasakiofTwistexpressionanditsOS,meiationwithinesophagealsquamouscellcarcinoma[J].JExpClinRes,2009,21:158.(收稿13期:2016・03-26)(本文编辑:张印朋)万方数据