・５０２・虫垦堡金！逝压兰！！垒生！旦筮！！鲞筮§塑￡！世型丛型塑些！！垦！ｉ塑：』！堕；Ｑ！！：！！！：！兰：塑！：１２２２５—３１９Ｘ．２０１４．０１．０５．ＨＲＳ／ＥＨＲＡ／ＥＣＡＳｓｕｒｇｉｃａｌｐａｔｉｅｎｔａｎｄａｂｌａｔｉｏｎｏｆ１０．１０１６／ｊ．ｊａｅｃ．２０１４．０３．０２２．［４］ＣａｌｋｉｎｓｅｘｐｅｒｔａｔｒｉａｌＨ，ＫｕｃｋＫＨ，ＣａｐｐａｔｏＲ，ｅｔａ１．２０１２ｃｏｎ５ｅｎｓｕｓ［７］张海波，盂旭，韩杰，等．２７８例心脏瓣膜手术同期行冠状动脉旁路移植术的临床分析［Ｊ］．中国综合ｌ临床，２００７，２３（１２）：１０９７—１０９９．ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．Ｊ．ｉｓｓｎ．１００８—６３１５．２００７．１２．０１９．ｓｔａｔｅｍｅｎｔｏｎｃａｔｈｅｔｅｒａｎｄｆｏｒｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ｆｏｌｌｏｗ—ｕｐ，ｐｒｏｃｅｄｕｒａｌｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ｐａｔｉｅｎｔｍａｎａｇｅｍｅｎｔ［８］ＭｉｙａｉｒｉｂｉａｔｒｉａｌＴ，ＭｉｕｒａＳ，ＫｉｇａｗａＩ，ｅｔａ１．Ｍｉｄ・ｔｅｒｍｒｅｓｕｌｔｓｏｆｐｒｏｃｅｄｕｒｅｕｓｉｎｇｂｉｐｏｌａｒｒａｄｉｏｆｒｅｑｕｅｎｃｙａｃｌｏｓｅｄｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｓ，ｅｎｄｐｏｉｎｔｓ，ａｎｄｒｅｓｅａｒｃｈｔｒｉａｌｄｅｓｉｇｎ：ａｒｅｐｏｒｔｏｆｔｈｅＨｅａｒｔＲｈｙｔｈｍａｂｌａｔｉｏｎＳｏｃｉｅｔｙ（ＨＲＳ）ＴａｓｋＦｏｒｃｅｏｎＣａｔｈｅｔｅｒａｎｄＳｕ画ｃａｌｔｈｅｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔｌｙｐｅｒｆｏｒｍｅｄｗｉｔｈＨＯＨ—ｍｉｔｒａｌｃａｒｄｉａｃｏｐｅｒａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＩｎｔｅｒａｃｔＣａｒｄｉｏｖａｓｃＡｂｌａｔｉｏｎｏｆＡｔｒｉａｌＥｕｒｏｐｅａｎｂｒａｎｃｈｏｆＨｅａｒｔｔｈｅＦｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ．ＤｅｖｅｌｏｐｅｄｉｎｐａｒｔｎｅｒｓｈｉｐｗｉｔｈＴｈｏｒａｃＳｕｒｇ，２００９，９（２）：１６９—１７２．ｄｏｉ：１０．ＲｈｙｔｈｍＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＥＨＲＡ），ａＡｒｒｈｙｔｈｍｉａｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎｒｅｇｉｓｔｅｒｅｄ１５１０／ｉｃｖ＿ｔｓ．２００８．１９５１４９ＥｕｒｏｐｅａｎＳｏｃｉｅｔｙｏｆＣａｒｄｉｏｌｏｇｙ（ＥＳＣ）ａｎｄｔｈｅ［９］崔永强，孟旭，李岩等．干式双极射频消融手术治疗器质性心房颤动［Ｊ］．中国医药，２０１０．５（６）：５２２—５２４，ＤＯＩ：１０．３７６０／ｅｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３．４７７７．２０１０．０６．０１５．ＥｕｒｏｐｅａｎＡｍｅｒｉｃａｎＲｈｙｔｈｍＣａｒｄｉａｃｗｉｔｈＳｏｃｉｅｔｙ（ＥＣＡＳ）；ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｓｉａａｎｄｉｎｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｏｎＣａｒｄｉｏｌｏｇｙ（ＡＣＣ），ＰａｃｉｆｉｃＨｅａｒｔＨｅａｒｔＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＡＨＡ），ｔｈｅｔｈｅ［１０］ＳｏｎｉＬＫ，ＣｅｄｏｌａＳＲ，ＣｏｇａｎＪ，ｅｔａ１．ＲｉｓｈｔａｔｒｉａｌｌｅｓｉｏｎｓｄｏｏｆａｎｏｔＳｏｃｉｅｔｙ（ＡＰＨＲＳ）．ａｎｄｔｈｅＳｏｃｉｅｔｙ《ＴｈｏｒａｃｉｃＦｏｕｎｄａｔｉｏｎ．ｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＳｕｒｇｅｏｎｓｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｓｕｒｇｉｃａｌｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｃｏｍｐｌｅｔｅｌｅｆｔａｔｒｉａｌｌｅｓｉｏｎｔｈｅｙｓｅｔｉｎｔｈｅ（ＳＴＳ）．ＥｎｄｏｒｓｅｄｂｙｏｆＣａｒｄｉｏｌｏｇｙｇｏｖｅｍｉｎｇｂｏｄｉｅｓｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＣｏｌｌｅｇｅＨｅａｒｔＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，ｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔａｔｒｉａｌｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ，ｂｕｔＴｈｏｒａｃＣａｒｄｉｏｖａｓｅｄｏｉｎｃｒｅａｓｅｐｒｏｃｅｄｕｒａｌｍｏｒｂｉｄｉｔｙ［Ｊ］．ＪＳｕｒｇ，２０１３，１４５ＥｕｒｏｐｅａｎＣａｒｄｉａｃＡｒｒｈｙｔｈｍｉａＳｏｃｉｅｔｙ．山ｅＥｕｒｏｐｅａｎＨｅａｒｔＲｈｙｔｈｍＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，ｔｈｅＨｅａｒｔＲｈｙｔｈｍＳｏｃｉｅｔｙｏｆＴｈｏｒａｃｉｃＳｕｒｇｅｏｎｓ，ｔｈｅＡｓｉａＰａｃｉｆｉｃ（２）：３５６—３６１．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｔｅｖｓ．２０１２．０９．０９１．［１１］ＷｏｒｋｕＢ，ＰａｋＳＷ，ＣｈｅｅｍａＦ，ｅｔａ１．ＩｎｃｉｄｅｎｃｅａｎｄｐｒｅｄｉｃｔｏｒｓｏｆＳｌｌｒｇｉｃａｌａｂｌａｔｉｏｎｆｏｒａｔｒｉａｌｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎＳｏｃｉｅｔｙ，ａｎｄｔｈｅＨｅａｒｔＲｈｙｔｈｍＳｏｃｉｅｔｙ［Ｊ］．ＨｅａｒｔｐａｃｅｍａｋｅｒｐｌａｃｅｍｅｎｔａｆｔｅｒＲｈｙｔｈｍ．２０１２，９（４）：６３２—６９６．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｈｒｔｈｍ．２０１１．１２．０１６．［Ｊ］．Ａｎｎ［１２］ＡｄＴｈｏｒａｃＳｕｒｇ，２０１ｌ，９２（６）：２０８５—２０８９．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ａｔｈｏｒａｃｓｕｒ．２０１１．０７．０５８．ＲＭ，Ｇａｍｍｉｅ［５］ＡｄＮ，ＳｕｒｉＪＳ，ｅｔａ１．ＳｕｒｇｉｃａｌａｂｌａｔｉｏｎｏｆａｔｒｉａｌｉｎＮｏｒｔｈＮ，ＨｅｎｒｙＬＬ，ＨｏｌｍｅｓＳＤ，ｅｔａ１．Ｔｈｅｉｍｐａｃｔｏｆｓｕｒｇｉｃａｌｈｉｉｇｈ—ｒｉｓｋａｂｌａｔｉｏｎｆｉｂ—ｌｌａｔｉｏｎｔｒｅｎｄｓＣａｒｄｉｏｖａｓｃａｎｄｏｕｔｃｏｍｅｓＡｍｅｒｉｃａ『Ｊ１．Ｊｎｏｒａｃｆｏｒａｔｒｉａｌｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎｉｎｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］ＡｎｎＴｈｏｒａｃＳｕｒｇ，Ｓｕｒｇ，２０１２，１４４（５）：１０５１—１０６０．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｔｃｙｓ．２０１２，９３（６）：１８９７－９０３．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｉ．ａｔｈｏｒａｃｓｕｒ．２０１２．０２．０９４．２０１２．０７．０６５．［６］Ｃｏｘ儿．Ａｂｒｉｅｆｏｖｅｒｖｉｅｗｏｆｓｕｒｇｅｒｙｆｏｒａｔｒｉａｌｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ［ｊ］．Ａｎｎ（收稿１３期：２０１６－０４－０５）ＣａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃＳｕｒｇ．２０１４Ｊａｎ；３（１）：８０－８．ｄｏｉ：１０．３９７８／ｊ．ｉｓｓｎ．（本文编辑：张印朋）血管内皮生长因子Ｃ和Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ与胃癌侵袭转移的关系刘维明李雪峰郭健石志良周国强彭建宛传丹【摘要】目的研究血管内皮生长因子Ｃ（ＶＥＧＦ．Ｃ）、Ｅ．ｃａｄｈｅｒｉｎ在胃癌中ｍＲＮＡ和蛋白水平的表达，分析其表达与Ｉ临床病理特征间关系，探讨其在胃癌中的表达意义。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应方法检测４０例胃癌与癌旁正常胃黏膜组织中ＶＥＧＦ—Ｃ、Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎｍＲＮＡ的表达；应用免疫组织化学方法检测胃癌与癌旁正常胃黏膜ＶＥＧＦ—Ｃ、Ｅ．ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白的表达；分析ＶＥＧＦ－Ｃ、Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎｍＲＮＡ和蛋白表达与临床病理特征间的关系。结果４０例胃癌患者癌组织中ＶＥＧＦ．Ｃ蛋白表达量０．４６１±ｏ．０１２较癌旁正常组织０．０３６＋０．０２３显著增高（ｔ＝１．１０１，Ｐ＜Ｏ．０５），而Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ明显低于癌旁正常组织（０．０７９＋０．００２与０．３２１－＋０．００５，ｔ＝１．８４４，Ｐ＜Ｏ．０５）。ＶＥＧＦ—ＣｍＲＮＡ表达与组织学分级、ＴＮＭ分期、淋巴结和远处转移等有关（ｔ值分别为一１．６２１、一１．４７４、一２．３７８、一１．９６６，Ｐ均＜０．０５）；Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎｍＲＮＡ表达与肿瘤直径、组织学分级、ＴＮＭ分期上有显著性差异（ｔ值分别为１．８７５、１．６７３、１．５４４，Ｐ均＜Ｏ．０５）。ＶＥＧＦ—Ｃ与Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达呈负相关（ｒ＝－０．６８８，Ｐ＜Ｏ．０５）。结论ＶＥＧＦ—Ｃ在胃癌组织表达上调，而Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ表达下调，可能参与胃癌细胞侵袭及转移的发生。【关键词】胃癌；血管内皮生长因子Ｃ；Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ基金项目：常熟市卫生局科技计划项目（ｃｓｗｓ２０１２０６）ＶａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｆａｃｔｏｒＣａｎｄＥ．ｃａｄｈｅｒｉｎｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈｔｈｅｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｈｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒＬｉｕＷｅｉｍｉｎｇ，ＬｉＸｕｅｆｅｎｇ，ＧｕｏＪｉａｎ，ＳｈｉＺｈｉｌｉａｎｇ，ＺｈｏｕＧｕｏｑｉａｎｇ，Ｒ增Ｊｉａｎ，ＷａｎＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００８－６３１５．２０１６．０６．００８作者单位：２１５５００扬州大学医学院附属常熟市第二人民医院普外科（刘维明、李雪峰、郭健、石志良、周国强、彭建）；常熟市医学检验中心（宛传丹）通信作者：刘维明，Ｅｍａｉｌ：１ｗｍ６８１８＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ万方数据主圄堡盒！逝压！Ｑ！垒生！旦星！！鲞筮鱼翅ｇ！型型塑！堕丝堕笪垦！ｉ塑：』！塑！！！！，ｙ丛：！！，盟！！！Ｃｈｕａｎｄａｒｌ－ＧｅｎｅｒａｌＳｕｒｇｅｒｙＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ｔｈｅＳｅｃｏｎｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣｈａｎｇｓｈｕＡｆｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅｏｆＹａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈｕ２１５５００，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＬｉｕＷｅｉｒｎｉｎｇ，Ｅｍａｉｌ：１ｗｍ６８１８＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｆａｃｔｏｒｃ（ＶＥＧＦ．Ｃ）ａｎｄＥ。ｃａｄｈｅｒｉｎｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒａｎｄｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＶＥＧＦ—ＣａｎｄＥ．ｃａｄｈｅｒｉｎａｎｄｔｈｅＲｅａｌ—ｔｉｍｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅｖｅｒｓｅｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ．ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅｃｔｉｏｎｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓｗａｓ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅａｐｐｌｉｅｄＯｆｆ４０ｃａｓｅｓｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒａｎｄｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｄｊａｃｅｎｔｎｏｎｃａｎｃｅｒｏｕｓｔｉｓｓｕｅｓ．ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｄｅｔｅｃｔｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＶＥＧＦ－ＣａｎｄＥ—ｃａｄｈｅｒｉｎｇｅｎｅ．ＶＥＧＦ．ＣａｎｄＥ．ｃａｄｈｅｒｉｎｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒａｎｄａｄｊａｃｅｎｔｎｏｒｍａｌｇａｓｔｒｉｃｍｕｃｏｓａｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．ＳｔａｔｉｓｔｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓＷａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｔｈｅｓｅｇａｓｔｒｉｃｔｉｓｓｕｅｓａｍｏｎｇＶＥＧＦ—Ｃ．Ｅ．ｃａｄｈｅｒｉｎａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗｉｔｈｖａｒｉｏｕｓｃｌｉｎｉｃａｌｐａｒａｍｅｔｅｒｓｉｎｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＷａｓ０．４６１±０．０１２，ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｄｙｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＶＥＧＦ．Ｃｐｒｏｔｅｉｎｉｎ４０ｃａｓｅｓｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ＇ｓｃａｎｃｅｒｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅａｄｉａｃｅｎｔｎｏｒｍａｌｔｉｓｓｕｅｓ（０．０３６＋０．０２３；￡＝ｌ＿１０１，ｗａｓＰ＜０．０５），ｂｕｔＥ—ｃａｄｈｅｒｉｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅａｄｊａｃｅｎｔｎｏｒｍａｌｔｉｓｓｕｅｓ（０．０７９±０．００２ＶＳ．０．３２ｌ±Ｏ．００５；ｔ：１．８４４，Ｐ（Ｏ．０５）．ＴｈｅｒｅＷａｓｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＶＥＧＦ．ＣｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗｉｔｈｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｇｒａｄｉｎｇ，ＴＮＭｓｔａｇｉｎｇ，ｌｙｍｐｈｎｏｄｅａｎｄｄｉｓｔａｎｔｓｔａｇｅ，ｔｈｅｒｅＷａｓｍｅｔａｓｔａｓｉｓ（ｔ＝一１．６２１，一１．４７４，一２．３７８，一１．９６６，Ｐｔｕｍｏｒ＜０．０５）．ＴｈｅｒｅＷａｓｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＥ．ｃａｄｈｅｒｉｎｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗｉｔｈａｓｉｚｅ，ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｇｒａｄｉｎｇ．ＴＮＭｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（ｔ＝１．８７５，１．６７３，１．５４４。Ｐ＜０．０５）．ＶＥＧＦ—ＣａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＷａｓｎｅｇａｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ（ｒ＝一０．６８８，Ｐ＜０．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｄｅｃｒｅａｓｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥ．ｅａｄｈｅｒｉｎｍａｙｐｌａｙＧａｓｔｒｉｃＶａｓｃａｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｆａｃｔｏｒＣ：ａｎｄＥ．ｃａｄｈｅｒｉｎｐｒｏｔｅｉｎＵｐ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄｏｆＶＥＧＦ—ＣｇｅｎｅａｎｄｃａｎｃｅｒｒｏｌｅｉｎｔｈｅｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｇａｓｔｒｉｃＥ—ｃａｄｈｅｒｉｎ【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ｃａｎｃｅｒ；Ｆｕｎｄｐｒｏｇｒａｍ：ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＰｌａｎＰｒｏｊｅｃｔｓｏｆＨｅａｔｈＢｕｒｅａｕｏｆＣｈａｎｇｓｈｕ（ｃｓｗｓ２０１２０６）胃癌是目前常见的消化道恶性肿瘤之一，有文献表明胃癌的浸润和转移与多种抑癌基因失活有关。Ｅ—ｃａｄｈｅｄｎ是抑制肿瘤侵袭转移的基因之一¨Ｊ，而血管内皮生长因子Ｃ（ＶＥＧＦ—Ｃ）是参与肿瘤血管和淋巴管生成的血管生成因子＂。３Ｊ。本研究采用实时荧光定量ＲＴ・ＰＣＲ和免疫组织化学方法对胃癌癌组织与癌旁正常胃黏膜组织中的ＶＥＧＦ．Ｃ、Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达情况进行检测，并分析ＶＥＧＦ—Ｃ、Ｅ—ｃａｄｈｅｆｉｎ表达与ｌ临床病理特征间的关系，进而分析探讨其与胃癌侵袭转移的关系。资料与方法１．一般资料：随机收集我院普外科２０１３年３月至２０１４年３月间胃癌手术切除标本，术中立即取定量，ＲＮＡ分装后置于－８０％：冰箱保存备检。逆转录操作按说明书进行。所得ｅＤＮＡ置于一２０℃低温冰箱保存备检。３．实时荧光定量逆转录聚合酶链反应：ＶＥＧＦ—Ｃ、Ｅ－ｃａｄｈｅｆｉｎ引物系广州复能生物工程有限公司合成，ＶＥＧＦ—Ｃ，Ｅ—ｃａｄｈｅｆｉｎＧＡＰＤＨ。使用ＴｏＹｏＢｏ公司试剂，反应体系１０斗ｌ，其中试剂ＳＹＢＲ５斗ｌ，上下游引物浓度１２５ｎｍｏｌ／Ｌ各１肛ｌ，ｅＤＮＡｌ斗ｌ，消毒蒸馏水２“ｌ，ＲＴ．ＰＣＲ反应条件：９５℃预变性１ｍｉｎ，然后９５ｃｃ１５Ｓ，６０℃６０Ｓ，４０个循环，在ＡＢｌ７９００ＨＴ（美国应用生物系统公司ＡＢＩ）上进行ＲＴ—ＰＣＲ扩增反应。每个样品重复３次，取平均值。每次实验以相应溶解曲线和１．５％琼脂糖凝胶电泳来判断扩增产物的特异性。结果判定：ＣＴ值为每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环，用２一ＡＡＣＴ方法分析Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ、ＶＥＧＦ—Ｃ相对表达水平。４．免疫组织化学染色：一抗（Ｅ－ｃａｄｈｅｆｉｎ）购于材分别放人１０％的甲醛固定和液氮速冻后置于一８０℃低温冰箱保存待查。标本为４０例胃癌癌组织及距肿瘤约８ｃｍ左右的正常胃黏膜，其中男２９例，女１１例。４０例胃癌包括１５例低分化腺癌，４例高分化腺癌，１４例中分化腺癌，６例黏液腺癌，１例高级别上皮内瘤变。患者年龄４８．０～８２．０岁，中位年龄６６．３岁，所有标本均由我院病理科医师确诊。胃癌按国际抗癌联盟（ＵＩＣＣ）公布的ＴＮＭ分期标准进行分期。２．ＲＮＡ的抽取与ｅＤＮＡ的合成：取标本组织约５０谷哥公司，一抗（ＶＥＧＦ－Ｃ）购于ｂｏｓｔｅｒ公司，免疫组织化学试剂盒及显色剂购于福州迈新生物技术开发公司，采用免疫组织化学ＵｈｒａＳｅｎｓｉｔｉｖｅＴＭＳ—Ｐ试剂盒。实验步骤按试剂盒说明书进行。５．免疫组化蛋白表达量判断：阳性判定标准：ＶＥＧＦ—Ｃ、Ｅ—ｃａｄｈｅｆｉｎ在胞浆或胞膜出现棕黄色颗粒，即低倍光镜下随机选取５个视野，每个视野在高倍镜下计数１００个细胞中的阳性细胞数，取其均值，阳性细胞数≥１０％为阳性表达，＜１０％为阴性表达。采用ＨＰＩＡＳ一１０００彩色病理图文报告管理系统对ｍｇ在冰上研磨加Ｔｒｉｚｏｌ（美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）裂解组织提取ＲＮＡ，方法按试剂盒说明书进行，所提取的总ＲＮＡ用分光光度计ＤＵ８０００测定其纯度并万方数据生国筮金！垣瘗！Ｑ！鱼生！旦墓！！鲞筮！期鱼！世型丛！！丝塑丛￡堕塑：』！些兰Ｑ！鱼，！型：ｊ！：塑！：垒ＶＥＧＦ．Ｃ、Ｅ．ｃａｄｈｅｒｉｎ的表达进行半定量分析，每张切片随机选取５个完整而不重叠的高倍镜视野，测定每视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积，计算阳性面积率。以每例５个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测定值。阳性面积率＝（单位面积中阳性反应的显著增高（ｔ＝１．１０１，Ｐ＜Ｏ．０５），而Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ明显低于癌旁正常组织（ｔ＝１．８４４，Ｐ＜０．０５）。４．ＶＥＧＦ—Ｃ、Ｅ．ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达的相关性分析：见表３。讨论总面秽单位面积中细胞的总面积）Ｘ１００％。６．统计学处理：应用统计学软件ＳＰＳＳ１９．０处理数据。正态分布的计量资料以ｘ±ｓ表示，两组间比较采用ｔ检验；相关分析采用Ｓｐｅａｒｍａｎ等级相关检验。Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。结１．ＶＥＧＦ．Ｃ、Ｅ．ｃａｄｈｅｒｉｎ胃癌是世界范围内最常见的消化道恶性肿瘤之一，形成原因及机制目前尚未明确，有学者认为正常细胞的癌变、肿瘤血管的形成、肿瘤细胞凋亡、抑制及肿瘤细胞的增值与胃癌的形成有关，而这些因素与胃癌患者术后的生存率密切相联。因此研究胃癌术后复发与转移对患者生存期及后续治疗有重要的临床意义。ＶＥＧＦ—Ｃ是肿瘤血管生成和淋巴管生成的重要果ｍＲＮＡ表达与临床病理学特征的关系：见表１。２．胃癌及癌旁正常组织中免疫组织化学染色ＶＥＧＦ—Ｃ、Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达特征：ＶＥＧＦ－Ｃ、Ｅ—血管生成因子∽。Ｊ，而原发灶浸润和转移是导致其短期内死亡的主要原因。本研究检测了胃癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中ＶＥＧＦ—ＣｍＲＮＡ和蛋白的表达情况，免疫组织化学检测结果发现癌组织中ＶＥＧＦ—Ｃ的阳性表达率明显高于癌旁正常胃黏膜组织（Ｐ＜０．０１）。采用ＲＴ—ＰＣＲ法对ＶＥＧＦ—ＣｍＲＮＡ在胃癌ｃａｄｈｅｒｉｎ阳性表达主要分布在细胞浆，见图ｌ。３．胃癌及癌旁正常组织中ＶＥＧＦ—Ｃ、Ｅ．ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达情况：见表２。４０例胃癌ＶＥＧＦ—Ｃ阳性表达３５例（８７．５％），Ｅ．ｃａｄｈｅｒｉｎ阳性表达只有６例组织中的表达量检测也高于癌旁正常胃黏膜组织，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。ＶＥＧＦ－ＣｍＲＮＡ表（１５．０％）；４０例胃癌旁正常胃黏膜组织中ＶＥＧＦ—Ｃ阳性表达只有１６例（４０．０％），而Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ阳性表达３４例（８５，０％）。胃癌癌中ＶＥＧＦ—Ｃ蛋白表达量达量与组织学分级相关、ＴＮＭ分期、淋巴结、远处转移等有相关性（Ｐ均＜０．０５），但与患者年龄、性别、表ｌ不同分组数据间Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ与ＶＥＧＦ—ＣｍＲＮＡ的表达量（２．ＡＡＣＴ，ｘ士ｓ）组别年龄＜６０岁≥６０岁性别男性女性肿瘤直径＜３．０ｅｎｌ例数ＶＥＧＦＣｍＲＮＡ表达量ｔ值Ｐ值Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎｍＲＮＡ表达量ｔ值Ｐ值９．５４１±０．３４００．８６０＋０．６８３０．９１７土Ｏ．８８９０弛９．０２２士０．７４９８．５７５±０．９２９Ｏ．８８ｌ±Ｏ．６７６０．９７ｌ－ｓＯ．２２２凹¨１０．５７８±０．４９７１０．００，．４－１－０２２０１．２７６±０．８７２０．７４７±Ｏ．６７８≥３．０ｃｍ他船８．７３２±０．３２７组织学分级高、中分化低分化ＴＮＭ分期Ｉ＋ＩＩＩＩＩ＋ＩＶ１．２０９±０．３９５１．２１５±１．０３４０．７７３±Ｏ．７３０６．６５６±０．５２０１．１４７＋０．９６００．７０８＝ｔ＝０．６９６堰笼１１．１４５±０．６９０他船１２．５１８土０．３６ｌ淋巴结阴性０．７５９±０．４８９０．９６６＿＋０．６４７０．８９ｌ±Ｏ．８９５阳性远处转移阴性阳性０弛１１．２１７±０．８５９７．９７６±０．５７２０．８９６±０．８７６０．９９３±０．５３５％０１９．４７６±０．１２０万方数据史垦绽金！晦鏖垫！！生！旦笠！！鲞筮ｉ期垦！丛丝丛！ｉｉ！堡堡垡垦！ｉ坠：』！塑垫！鱼：！！！：丝：堕！：！燃图１霪㈣燃蕊Ｅ．ｃａｄｈｅｒｉｎｍＲＮＡ检测结果发现在癌旁正常胃黏膜组织中的表达量高于胃癌组织（Ｐ＜０．０１）。胃癌癌组织中Ｅ—ｃａｄｈｅｆｉｎｍＲＮＡ阳性表达量与患者年龄、鬣性别、淋巴结、远处转移无相关性（Ｐ均＞０．０５），在肿瘤直径、组织学分级、ＴＮＭ分期上有显著性差异（Ｐ均＜０．０５）。表明在胃癌组织中Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ的低表达与及侵袭转移有关。本研究同时运用麟｝露爱：；‘注：Ａ．正常组织ＶＥＧＦ－Ｃ；Ｂ．正常组织Ｅ．ｅａｄｈｅｒｉｎ；Ｃ．癌组织ＶＥＧＦ—Ｃ；Ｄ．癌组织Ｅ．ｃａｄｈｅｒｉｎ攀一Ｓｐｅａｒｍａｎ等级相关检验性分析显示，胃癌中的Ｅ－ｃａｄｈｅｆｉｎ与ＶＥＧＦ－Ｃ蛋白呈负相关（ｒ＝一０．６８８，Ｐ＜０．０５），表明胃癌的发生过程中Ｅ—ｃａｄｈｅｆｉｎ低表达时伴随着ＶＥＧＦ－Ｃ蛋白的高表达。综上所述，结合本试验研究结果分析，胃癌的发生发展过程可能是因为ＶＥＧＦ．Ｃ增殖为肿瘤的侵袭和转移提供了有利的条件，而Ｅ—ｃａｄｈｅｎｎ在胃癌组织中表达减少，导致细胞失去黏附能力而产生了高胃癌及癌旁正常组织中免疫组织化学染色ＶＥＧＦ—Ｃ、Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达特征（ｓＰ染色．ｘ４００）表２胃癌组织与癌旁组织的Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ与ＶＥＧＦ—Ｃ蛋白表达的阳性面积率分析（；±ｓ，％）组别例数ＶＥＧＦ—Ｃ蛋白表达量Ｅ．ｅａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达量度的侵袭性，更易于转移。因此检测ＶＥＧＦ—Ｃ、Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ表达对判定胃癌的侵袭转移有一定的指导意义。参考文献［１］ＡｏｋｉＲ，ＹａｓｕｄａＭ，ＴｏｒｉｓｕＲ，ｅｔａ１．ＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐａｎｄＥ・ｃａｄｈｅｒｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｂｅｔｗｅｅｎｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓｓｕｂｍｕｃｏｓａｌｉｎｖａｓｉｖｅＲｅｓ，２００９，６９ｇａｓｔｒｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａｓｗｉｔｈａｓｔｒｉｃ—ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ表３胃癌癌组织中Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ、ＶＥＧＦ．Ｃ蛋白表达相关性分析（５）：１５９—１６７．［２］Ｙａｎｃｏｐｏｕｌｏｓ２４２—２４８．ＧＤ，ＤａｖｉｓＳ，ＧａｌｅＮＷ，ｅｔａ１．Ｖａｓｃｕｌａｒ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｔｓａｎｄｂｌｏｏｄｖｅｓｓｅｌｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２０００，４０７（６８０１）：［３］ＭａｋｉｎｅｎＴ，ＶｅｉｋｋｏｌａＴ，ＭｕｓｔｊｏｋｉＳ，ｅｔａ１．Ｉｓｏｌａｔｅｄｌｙｍｐｈａｔｉｃｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｔｒａｎｓｄｕｃｅｇｒｏｗｔｈ，ＳｕｔｕｒａｌｔｈｅＶＥＧＦ－Ｃ／Ｄｒｅｃｅｐｔｏｒ４７６２．４７７３．ａｎｄｍｉｇｒａｔｏｒｙｓｉｇｎａｌｓｖｉａＶＥＧＦＲ．３［Ｊ］．ＥＭＢＯＪ，２００１；２０（１７）：ｍｅｄｉａｔｅｄＲｈｏＡｃｅｌｌｍｉｇｒａｔｉｏｎ肿瘤大小等临床特征间无相关性（尸均＞０．０５）。由此我们推测ＶＥＧＦ—Ｃ的高表达可能促进了胃癌的侵袭转移，与Ｍｕｒｒａｙ等Ｍｏ研究结果基本一致。［４］ＭｕｒｒａｙＤ，ＨｏｒｇａｎＧ，ＭａｃｍａｔｈｕｎａＰ，ｅｔａ１．ＮＥＴｌｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｃｉｄｉｎｄｕｃｅｄａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＢｒｉｔｉｓｈＪｏｕｒｎａｌＤ，ｅｔａ１．Ｓｏｍａｔｉｃｏｆａｎｃｅｒ，２００８，９９（８）：１３２２—１３２９．Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ是一类介导细胞之间相互粘附的钙依赖性跨膜蛋白，当Ｅ－ｃａｄｈｅｆｉｎ表达下降或缺失，肿瘤细胞易于脱离，一旦获得转移的必要条件，就可脱离原发灶而发生侵袭和转移【５击Ｊ。在乳腺癌的研究中，Ｔｕｒａｓｈｖｉｌｉ等¨ｏ发现４２．９％的乳腺癌组织中存在Ｅ．ｃａｄｈｅｆｉｎ表达缺失，且Ｅ．ｃａｄｈｅｆｉｎ的表达缺失与乳腺癌的淋巴结转移、远处转移、ＴＮＭ分期及预后不［５］ＣｏｒｓｏＧ，ＣａｒｖａｌｈｏＪ，ＭａｒｒｅｌｌｉｍｕｔａｔｉｏｎｓａｎｄｄｅｌｅｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅＥ・ｅａｄｈｅｒｉｎｇｅｎｅｐｒｅｄｉｃｔｐｏｏｒｗｉｔｈｇａｓｔｒｉｃ８７５．ｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＪＣｌｉｎｉｃａｌＯｎｅｏｌｏｇｙ，２０１３，３１（７）：８６８—［６］ＰｉｎｈｅｉｒｏＨ，ＣａｒｖａｌｈｏＪ，ＯｌｉｖｅｉｒａＰ，ｅｔａ１．ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｉｎｉｔｉａｔｉｏｎａｒｉｓｉｎｇｆｒｏｍＥ・ｃａｄｈｅｒｉｎ／ＣＤＨｌｉｎｔｒｏｎ２：ａｎｏｖｅｌｐｒｏｔｅｉｎｉｓｏｆｏｒｍｔｈａｔｉｎｃｒｅａｓｅｓｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．ＨｕｍａｎＪ，ｅｔｏｆＥ—ＭｏｌｅｅｕｌａｒＧｅｎｅｔｉｃｓ２０１２，２１（１９）：４２５３・４２６９．Ｋ，Ｂｏｕｅｈａｌａｌ，Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎ［７］ＴｕｒａｓｈｖｉｌｉｃａｄｈｅｒｉｎｂｒｅａｓｔＧ，Ｂｏｕｅｈａｌｏｖａａｎｄｃ—ｅｒｂＢ－２／ＨＥＲ一２／ｎｅｕｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎｈｉｓｈ－ｇｒａｄｅ良有关，而Ｓａｓａｋｉ等旧１证实Ｅ—ｃａｄｈｅｆｉｎ在食管癌中呈现异常表达，且与患者预后密切相关。本研究检测了胃癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中Ｅ—ｃａｄｈｅｆｉｎｍＲＮＡ和蛋白的表达情况，免疫组织化学检测结果发现癌旁正常胃黏膜组织中Ｅ．ｃａｄｈｅｆｉｎ的阳性表达率明显高于胃癌组织（Ｐ＜０．０１）；采用ＲＴ－ＰＣＲ法对ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＣａｓｋＰａｔｏｌ，２００７，４３（３）：８７—９２．Ｋ．ＮａｔｓｕｇｏｅＳ，ＩｓｈｉｇａｍｉＳ，ｅｔａ１．ＳｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅＥ－ｅａｄｈｅｒｉｎａｎｃｅｒ［８］ＳａｓａｋｉｏｆＴｗｉｓｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｉｔｓＯＳ，ｍｅｉａｔｉｏｎｗｉｔｈｉｎｅｓｏｐｈａｇｅａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＪＥｘｐＣｌｉｎＲｅｓ，２００９，２１：１５８．（收稿１３期：２０１６・０３－２６）（本文编辑：张印朋）万方数据
