２０１１年全国病理技术新进展研讨会论文汇编很多的脂肪颗粒。特别是脂肪颗粒较少时，在经过二甲苯脱蜡，此时脂肪颗粒就已基本上全部丢失，在进行脂肪染色时也就基本上找不到脂肪颗粒了。针对这个问题，我对石蜡切片的脂肪染色进行了多个条件的摸索、探讨。标本来源选取乳腺组织中含有脂肪颗粒的蜡块四个，在四种条件下处理后进行油红Ｏ染色观察脂肪染色的情况。方法：选取四种条件：ｌ、经烤片二十分钟后，进行二甲苯脱蜡处理，经梯度酒精入水，再进行油红Ｏ染色。２、经烤片二十分钟后，将切片直接进入７０℃水中，热浴脱蜡十分钟，不经二甲苯处理，直接进行油红Ｏ染色。３、经烤片二十分钟后，将切片直接放入７０℃的水中，热浴脱蜡二十分钟，其间换水２次（７０℃），不经二甲苯处理，进行油红。染色。４、经烤片二十分钟后，将切片直接放入７０℃的水中，热浴脱蜡四十分钟，其间换水４次（７０℃），不经二甲苯处理，进行油红。染色。操作方法ｌ、７２℃烤箱中烤片２０分钟。２、将切片放入事先准备好的８０℃以上的蒸馏水中洗一分钟。３、再更换两次以上热水，各５～１０分钟。４、将油红Ｏ工作液滴于切片上１０分钟。５、用６％的异丙醇除去多余的染液。６、苏木素复染，盐酸酒精分化，氨水返蓝。７、水洗８、擦去多余水分，用甘油明胶封片。结果含有脂肪较多的切片经二甲苯脱蜡，梯度酒精入水后，进行油红Ｏ染色，其脂肪颗粒丢失一部分，但在脂肪颗粒较多时脂肪染色较用热水脱蜡的鲜亮，但脂肪有一定的丢失且阳性区域减少。经水脱蜡的切片，根据时间的长短脂肪颗粒的区域有不同的变化，换水次数多且时间长的切片脂肪染色明显脂肪颗粒丢失较少。而在水中时间短的切片虽然脂肪颗粒丢失较少，但切片中含有的石蜡成分也较多，因此脂肪染色不如在水中时间长且两次以上更换水的切片染色明显。讨论目前各家医院在进行脂肪染色时均运用冷冻切片，其由于不经任何处理，其脂肪颗粒丢失较少染色较鲜明，结果是大家公认的。而用石蜡切片进行脂肪染色的还是比较少的。而一些回顾性研究需要进行脂肪染色时，必须用石蜡切片，因此我对几种方法进行比较性染色，通过热水将蜡融化，使其漂浮于水面。为了更好地使石蜡融化的完全，可多次用热水漂洗，因此在入热水之前可进行烤片二十分钟以上，在入水多次漂洗切片，用水脱蜡的这种方法虽然能尽可能的保留组织中的脂肪颗粒，使染色尽量阳性，但也有一定的弊端，由于是用水熔蜡，其切片上的石蜡必定要存留一部分，所以油红。染色的结果在镜下观察时就显得不是那么干净，但较用二甲苯脱蜡再经酒精入水，其脂肪颗粒就丢失的少得多，对于回顾性研究来说，就有一定的意义，因此这种方法可供大家参考使用。２７．ＰＡＳ染色法显示肠道组织杯状细胞的关键步骤２０１１年全国病理技术新进展研讨会论文汇编贾旭张宇忠钟相根北京中医药大学基础医学院关键词：盐基碱性品红；ＰＡＳ染色；杯状细胞；分色液肠道组织的杯状细胞数量从十二指肠到大肠呈逐渐增多趋势，杯状细胞内的主要物质为粘多糖。ＨＥ染色时的杯状细胞呈淡蓝色，与周围细胞区别不大，不易观察细胞内粘液的含量变化，ＨＥ染色时杯状细胞的多糖成分被水溶解而呈现空白。我们应用改良ＰＡＳ染色法，使杯状细胞呈现突出而鲜明的红色易于观察，在不同肠段的解剖定位和细胞内粘液物质半定量时可以对不同动物不同状态和不同肠段的杯状细胞功能代谢作深入研究。现将染色关键步骤介绍如下：ｌ材料和方法１．１组织和切片制备：取正常大鼠肠组织标本１０例，每例分别区分为十二指肠、空肠、回肠、乙状结肠和直肠等５个肠段。另取慢性结肠炎大鼠肠组织标本１０例，每例也分别区分为十二指肠、空肠、回肠、乙状结肠和直肠等５个肠段。取材后标本迅速用４℃保存的固定Ｃａｒｏｎｙ液【ｌ】固定，常规脱水、透明、浸蜡包埋，切片厚度４微米。１．２溶液制备：＠Ｓｃｈｉｆｆ染液制备：ｌ克盐基碱性品红溶于１００ｍｌ去离子水，煮沸后加重亚硫酸钠２克，冷却后再加ＩＮ盐酸２０ｍｌ，然后混匀避光保存，室温放置２４小时。使用前在溶液中加入３００ｍｇ活性碳混匀过滤，过滤后的液体为淡黄色透明液体，即为染液【２】。②分色液制备：ｌＮ盐酸５ｍｌ与１０％重亚硫酸钠６ｍｌ混合于１００ｍｌ蒸馏水中。１．３染色方法：切片脱蜡进水后，１％过碘酸ｌＯ’，Ｓｃｈｉｆｆ液染４０’，分色液分色６’，分三次，每次２’。随时在显微镜下观察，直到红蓝两色对比清晰匀称。自来水流水冲洗，蒸馏水洗，苏木素复染核３’，脱水、透明、封片。２结果肠道组织的杯状细胞突出而鲜明地呈鲜红色。细胞核为蓝色，背景为淡粉色。３讨论观察杯状细胞数量的改变和粘多糖含量的多少是诊断肠道功能代谢和结构改变的重要形态学依据。肠粘膜表面上皮和固有层的杯状细胞形状如同酒杯，功能用于合成储存并分泌粘液到肠腔，起润滑和保护肠道组织的作用，杯状细胞因含有氨基乙糖和游离的乙糖基，不含任何游离酸基或硫酸脂，故称为中性粘多糖，中性粘多糖ＰＡＳ法显示为阳性。在ＰＡＳ染色方法原理中过碘酸作为氧化剂把葡萄糖分子中带有羟基的键打开，而生成醛基再与Ｓｃｈｉｆｆ液中的无色复红液染色剂结合呈现紫红色，故而，肠道组织经ＰＡＳ染液反应后，杯状细胞形态结果为细胞内粗大的紫红色颗粒呈杯状分布，根据细胞内中性粘多糖物质的多少，可以是孤立散在、也可以是均匀密集，对这些ＰＡＳ阳性物质的定量和定位分析，可以估计各段肠道组织功能代谢的变化和对疾病的反应。我们在染色中有三个关键步骤：其一，就是组织新鲜取材后必须用Ｃａｒｎｅｙ固定液固定，配制方法为：冰醋酸１０ｍｌ，氯仿３０ｍｌ，无水乙醇６０ｍｌ，冰箱４℃保存。肠组织取材后其糖原分解为葡萄糖易溶于水，假如使用含水的固定液葡萄糖将被溶解而失去，杯状细胞位置就变为空白。因而使用以乙醇为主要成分的Ｃａｒｎｅｙ固定液可以保护葡萄糖成分，杯状细胞得以显示。其二，是Ｓｃｈｉｆｆ染液的配制时对碱性副红的选择。众多的碱性复红试剂包装配制Ｓｃｈｉｆｆ染液时不够理想，配制时不能按预期的呈现淡黄色透明状，而是不透明的红色液体。唯独盐基碱性复红可以达到满意的结果。由于染料是复合试剂，包装上不写分子式，给选择试剂带来了困难，我实验室唯独一瓶标有”盐基”的碱性副红试剂在配Ｓｃｈｉｆｆ液时，可以使染液最终５０２０１１年全国病理技术新进展研讨舍论文汇犏呈谈黄色透明状。其三．是对分色的控制。切片在Ｓｃｈｉｆｆ溶液作用之后，用分色液浸泡２分钟，重复３次，同时显镦镜观察。此时杯状细胞越来越鲜红而清晰．掌握分色程度至最完美。分色渡的配制成分与Ｓｃｈｉｆｆ染液的成分相近，唯独没有盐基碱性品红．所以，分色液可以稀释染液，使颜色变浈，因此，利用这个性质，把ＰＡＳ染液刚染完的片子，用分色渡作用，就会起到洗去非特异部位的浮色．使该着色部位杯状细胞更加清晰。如果分色液作用时间过长，则引起杯状细胞褪色现象．经过摸索，分色三次，每次２。的时间对所显示的杯状细胞适度。附；大鼠肠组织ＰＡＳ染色照片２８．天青石兰Ｂ联合苏术精增强核染色能力的报告范尔钟亭颗北京市耳鼻咽喉科研究所采用天青石兰Ｂ和苏木精两种核染色剂联合应用．改善因脱钙时间长。组织酸化．核染色不良的状况。现将方法报告如下：Ｉ材科与方｛去１．Ｉ材料新西兰白兔４０只．雌雄不限。检验科已鉴定的金黄色葡萄球菌菌株。Ｏｌｙｍｐｕｓ手术显微镜。Ｉ２方法（１）在Ｏｌｙｍｐｕｓ手术显微镜下．将金黄色葡萄球菌注入兔上颌窦中．制造兔鼻赛炎模型。在ＣＴ下观察兔鼻窦内有炎症出现，为模型成功。取兔头用ｌＯ％中性甲醛固定．５％ＨＬ脱钙，石蜡包埋，冠状位连续切片．ＨＥ染色。（２）兔鼻腔鼻窦石蜡切片分为两组。第１组按常规ＨＥ染色法染色。第２组切片脱蜡入水后，先八５％硫酸铁铵溶液中浸泡１０分钟，直接入天青石兰Ｂ染液中染色１０分钟，再＾苏木精染浈中染色１０分钟。又入５％硫酸铁铵溶渡中浸泡５分钟。２结果第１组在显微镜下观察：①假复层纤毛柱状上皮的细胞核不易分辨，胞浆的伊红颜色遮盖了胞核的蓝色，＠兔上颌窦窦腔内有大量脓性分泌物聚集，因不能识别核的形态特征，所以不能确认爽性细胞种类（见圈ｌ、２）。第２组在显微镜下观察：①假复层纤毛柱状上皮胞浆红染．胞核蓝染，组织结构清晰。②兔上颌窦窦腔内可清楚分辨脓性分泌物内有大量嗜中性粒细胞．吞噬了异物的组织细胞及部分淋巴细胞．细胞核与细胞浆蓝红相映，对比清楚（见圈３、４）。３讨论在临床和实验病理学的诊断与研究中，遇到骨质和其它已钙化的病变组织．必须先行脱钙，才能完成切片工作。我们在对慢性副鼻窦炎兔模型的研究中，需要对兔鼻腔鼻窦进行连续切片．以观察炎症对骨膜和骨质的影响。由于兔鼻腔鼻窦骨质结构多，使用弱酸脱钙会延长制片周期，因而实验室往往使用５％ＨＣＩ先行脱钙，再用Ｉｆｉ％ＥＤＴＡ对组织进行碱化，同时兼有进一步脱钙作用。但有时却因５％ＨＣＩ脱钙时问过长．ＥＤＴＡ不能完成对过度酸化组
