中国免疫学杂志２０１１年第２７卷 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－４８４Ｘ．２０１１．１２．１９ 单增李斯特菌作为疫苗载体的研究进展① 周 云潘蕾郝春秋贾战生 （陕西省西安市第四军医大学唐都医院传染科，西安７１００３８） 文献标识码Ａ 文章编号１０００－４８４Ｘ（２０１１）１２－１１３２－０３ 中国图书分类号Ｒ３９２．１１ 单核细胞增生李斯特菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｈｅｎｅｓ） 简称单增李斯特菌（Ｉ朋），是一种革兰氏阳性兼性厌 氧、胞内寄生菌，对环境耐受性强，可在较高的盐浓 度（可高达４０％ＮａＣ１）以及宽泛的ｐＨ（ｐＨ３—１２）和温 度范围（０～４５℃）内生长，并可形成夹膜，因而ＬＭ 广泛存在于自然界的不同环境中（土壤、水源、植物 存活，通过ＬＬＯ、ＰＩ．ＰＬＣ和ＰＣ—ＰＬＣ溶解宿主细胞吞 噬体膜逃离吞噬体，进入胞浆后复制繁殖，ＡｃｔＡ引 起宿主细胞肌动蛋白聚合，实现细胞内或细胞间的 扩散，避免遭遇胞外环境以进一步逃逸机体免疫系 统ｌ引。 及动物体内等），易污染各种食品（肉、奶、海产品及 蔬菜等），属条件致病性人畜共患病原菌¨１ Ｊ。和其他 细菌相比（如分枝杆菌、沙门氏菌、志贺菌等），ＬＭ不 仅能耐受极端环境，还能通过激活ＣＤ４ 、ＣＤ８ Ｔ细 胞而有效的诱发完全细胞免疫＿２Ｉ３ Ｊ。野生型ＬＭ的 致死剂量比其他细菌高很多，安全性好，鉴于上述特 点，ＬＭ作为基因疫苗的载体应用于科学研究越来越 ２ ＬＭ诱发的免疫反应 ２．１ 固有免疫 固有免疫在清除ＬＭ和控制感染 的早期起重要作用。脾脏的吞噬细胞和树突状细胞 （ＤＣ）是ＬＭ在体内生长的主要寄居处，感染第一天， 包含活细菌的这些细胞迁移到脾脏白质的Ｔ细胞 区，建立二级防御并激发嗜中性粒细胞反应。在肝 脏中枯否细胞清除大部分循环细菌，嗜中性粒细胞 通过ＩＬ－６和其他趋化因子迅速聚集在感染位点，分 泌ＩＬ．８、ＣＳＦ．１、ＭＣＰ．１，这些细胞因子在炎性反应和 广泛。本文对ＬＭ生物学特性、免疫应答、载体的构 建及其临床应用等方面的研究进展作总结。 １生物学特性 ＬＭ的毒力主要由六个基因组成的基因簇所决 定，顺序是ｐｆｆＡ、ｐｉｃＡ、ｈｌｙ、ｍｐｌ、ａｃｔＡ和ｐｌｃＢ。由转录 诱导巨噬细胞中起重要作用Ｌ６Ｊ。巨噬细胞（Ｍ ）感 染ＬＭ后，产生大量促炎因子和细胞因子，其中最重 要的早期细胞因子是ＩＬ．１２ｐ７０、工型干扰素、ＩＬ－１８。 这些细胞因子及其下游的细胞因子诱导大量嗜中性 粒细胞的涌入，吞噬和杀死循环细菌，募集ＮＫ细胞 因子ｐｒｆＡ调节的内化素ＩｎｌＡ和ｌｕＩＢ为最早鉴 定出的与细菌侵袭力相关的毒力因子，ＩｎｌＡ通过与 并合成ＩＦＮ 进一步刺激ＡＰＣｓ的成熟ｌ＿７Ｊ。ＬＭ对刺 激ＤＣ成熟和激发ＣＤ８ Ｔ细胞活性也有影响。ＬＭ 侵入ＤＣ胞质，可诱导共刺激分子（ＣＤ４０、ＣＤ８０和 ＣＤ８６）的高表达及ＩＬ－１２、ＩＬ－１０、ＩＬ－６和ＴＮＦ—ａ的有效 上皮细胞钙粘蛋白（Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ）相互作用而发挥效 应，ＩｎｌＢ介导ＬＭ侵入肝细胞和非上皮细胞等；ｈｌｙ编 码的李斯特菌溶素０（ＬＬ０）是其最基本的毒力因子， 能裂解吞噬体膜，使ＬＭ逸入胞浆并大量繁殖；ｐｌｃＡ 和ＤｌｃＢ分别编码磷脂酰肌醇特异性磷脂酶（ＰＩ—ＰＬＣ） 生成。ＤＣ产生的细胞因子（尤其是ＩＬ－１２和ＩＩＪ－１Ｏ） 是决定产生ＩＦＮ．７的Ｔ细胞比例的主要因素，表明 和卵磷脂酶（ＰＣ．ＰＬＣ），有助于ＬＭ逃离吞噬小体； ａｃｔＡ编码一种表面蛋白，诱导宿主细胞肌动蛋白聚 Ｉ３４进入细胞质是Ｔ细胞产生细胞因子的最佳诱导 条件，是对抗病菌并产生保护性细胞毒Ｔ淋巴细胞 （ｃＴＬ）反应的重要因素＿８ Ｊ。体内实验结果与上述体 外实验相一致Ｉ ９ｌ。Ｆｅｎｇ￣ｍ 发现ＬＭ可以诱导ＤＣ产 生足量ＩＦＮ．Ｂ以诱发抗原特异性Ｔ细胞活化，产生 保护性细胞免疫。 集，在细菌表面形成极化的肌动蛋白尾，使ＬＭ在胞 浆内运动并促进其向邻近细胞扩散＿４ｊ。ＬＭ侵入机 体后首先感染专职抗原提呈细胞（ＡＰＥｓ）并在胞内 ①本文为国家“十一五”重大传染病防治专项（２００９ＺＸ１０００４—７１５） 作者简介：周云（１９８６年一），女，在读硕士，主要从事病毒性肝炎 ２．２适应性免疫 由于ＬＭ可以存在于Ｍ 胞浆 内，因此可以同时引起ＭＨＣ工类和ＭＨＣ ＩＩ类抗原 的基础与临床研究； 通讯作者及指导教师：贾战生（１９５９年一），男，博士生导师，主要从 事病毒性肝炎的基础与临床研究，Ｅ—ｍａｉｌ：ｉｉ— ａｚｓｈ＠ｆｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ 提呈反应，有效诱导抗原特异性ＣＩＭ 、ＣＤ８ Ｔ细胞 应答【１１］。同时，ＬＭ独特的生理特点可起到加强抗 原提呈的作用，ＬＭ表面的脂胞壁酸质、肽聚糖、载脂 周 云等单增李斯特菌作为疫苗载体的研究进展第１２期 蛋白等可以与ＤＣ表面的特异性Ｔｏｌｌ样受体结合， ＤＣ在识别这些抗原后可以通过调节ＣＤ８０和ＣＤ８６， 的、安全的疫苗载体的优点有：（１）李斯特菌能在标 准ＢＳＬ２实验室中很容易地生长；（２）基因操作李斯 特菌使重组减毒的疫苗株能安全应用于人类的技术 已经建立；（３）容易操作，利用质粒或染色体系统可 ＭＨＣⅡ类分子及炎性分子如ＩＬ－１２、ＴＮＦ．ｄ而起到加 强抗原提呈作用，没有ＤＣ，就不能有效诱发ＣＤ８ Ｔ 细胞免疫［１２］。ＣＤ４ 和ＣＤ８ Ｔ细胞是清除ＬＭ感染 的重要效应细胞，ＣＤ８ Ｔ细胞产生穿孔素、颗粒酶、 ＩＦＮ．７；ＣＩＭ Ｔ细胞产生Ｔｈｌ细胞因子，如ＴＮＦ ａ、 ＩＦＮ一７、ＩＬ－２；其他细胞如Ｂ细胞，调节性Ｔ细胞和非 经典ＭＨＣ型Ｔ细胞主要通过影响ＣＤ４ 和ＣＤ８ Ｔ 以表达多个基因产物；（４）对其生命周期，遗传学和 免疫学特性有广泛的知识；（５）直接感染ＡＰＣｓ并在 细胞内生长，如单核细胞，Ｍｅ？和Ｄｃ，从而运送ＴＡＡ 到细胞质中，通过免疫系统导致加工和抗原提呈。 这些特性使得李斯特菌作为疫苗的运送载体，不仅 细胞来发挥作用＿１０Ｉ１ 。 ３重组ＬＭ作为疫苗载体 ３．１ ＬＭ的减毒ＬＭ作为疫苗载体用于临床，需要 进行菌株减毒。目前普遍的减毒方法是细菌毒力基 因的缺失或插入突变，使ＬＭ减毒并保持其免疫原 性。通过插人外源性基因片段，导致编码ＬＬＯ的基 因发生突变，可使ＬＭ毒力下降１０万倍。单基因敲 除ａｃｔＡ可使毒力下降１万倍。双缺失ａｃｔＡ／ＩｎｌＢ以 及ａｃｔＡ／ｐｌｃＢ也已经成功应用于实验中Ｎ５］。另有研 究小组开发灭活但有代谢活性（ＫＢＭＡ）的ＬＭ疫苗， 同时具有活疫苗的功能和死疫苗的安全性，为重组 疫苗治疗感染性疾病和癌症提供了一个平台＿１ 。 与革兰氏阴性菌（沙门氏菌和大肠杆菌）相比，革兰 氏阳性菌ＬＭ不会过早的激活机体的免疫系统，导 致载体被迅速清除＿１ 。单增ＬＭ使用的便利之处在 于它不同的基因组株已测序，生物体的基因易于处 理，众多毒力减弱突变株已构建成功。 ３．２利用ＬＭ运送核酸利用单增李斯特菌运送 ＤＮＡ或ＲＮＡ已被证明，它通过一个自杀机制来释放 质粒ＤＮＡ或ＲＮＡ直接进入哺乳动物的细胞质 中ｌ＿１ 。这种自杀的李斯特菌使用减毒骨干，其中缺 失的基因用于芳香族氨基酸合成的ａｒｏＡ和用于色 氨酰ｔＲＮＡ合成的ｔｗｓ；并利用包含噬菌体Ａ】１８裂 解基因（ｐｌｙｌ １８）的自裂解质粒来运送ＤＮＡ。一旦细 菌进入受感染的哺乳动物细胞质，１）ｌｙｌ１８表达，李斯 特菌载体裂解。Ｓｏｕｄｅｒｓ等［１９］用类似的方法构建了 单增李斯特菌ＤＮＡ疫苗，通过ＤＮＡ运送肿瘤相关 抗原和自杀质粒。还有种增加ＤＮＡ运送效率的替 代方法是使用ｂａｃｔｏｆｅｃｔｉｏｎ，包括用抗生素治疗以促 进细菌裂解和质粒ＤＮＡ的释放［２０Ｊ。在这个研究 中，减毒的ＬＭ突变体对氨苄西林敏感，并且质粒中 包含能导致细菌裂解的真核转录的细胞溶素。使用 氨苄西林能诱导细菌裂解并且转移质粒ＤＮＡ到宿 主细胞质。 ３．３李斯特菌作为疫苗载体的应用ＬＭ作为强大 可以运送抗原蛋白，而且可以运送ＤＮＡ和ＲＮＡ＿２ 。 重组ＬＭ作为疫苗载体诱导抗病毒或肿瘤抗原 的特异性细胞免疫，已应用于表达流感病毒、淋巴细 胞脉络丛脑膜炎病毒（ＬＣＭＶ）、人类乳头瘤病毒 ＨＰＶ．１６ Ｅ７、人类免疫缺陷综合症病毒ＨＩＶ ｇａｇ、酪氨 酸酶相关蛋白（Ｔｒｐ２）、前列腺特异性抗原（ＰＳＡ）、 ＨＥＲ－２／ｎｅｕ等［２２－２６］。研究者已证明了一个高度减毒 的表达ＨＰＶ Ｅ７抗原的ＬＭ株在治疗宫颈癌患者一 期临床试验中的安全性，这项试验指出了载体的安 全性和耐受性，并提出ＬＭ作为一种载体在临床治 疗方面的可能性＿２７ｊ。最近（２０１１年）Ｓｃｉａｒａｎｇｈｅｌｌａ 等【２８ｊ构建了减毒圳载体，Ｌｍｄｄ．ＢｄｏｐＳＩＶｇａｇ，编码 ＳＩＶｍａｃ２３９ ｇａｇ。胃内给予猕猴３×１０ 个细菌是安 全的，并能诱导抗ｇａｇ细胞免疫反应，但体液免疫无 应答。实验认为这种新的减毒活性Ｌｍｄｄ—ＢｄｏｐＳＩＶ． ｇａｇ可能为口服疫苗提供一个有吸引力的平台ｌ 。 另有研究者应用两种减毒的李斯特菌：ａｃｔ＿Ａ＿一／ｐｌｃＢ． （ＢＭＢ７２）或ａｃｔ＿Ａ＿一／ＩｎｌＢ．（ＢＭＢ５４），都表达Ａ型流感 病毒核蛋白融合抗原，体外和小鼠体内评估这两株 的安全性和毒性，并且有２２名健康志愿者接受单次 口服其中一种疫苗，观察其安全性、保护作用及免疫 原性Ｌｍ］。结果表明该口服疫苗安全，能诱发中等强 度的针对ＩＪＭ复合抗原的粘膜免疫和细胞免疫，但 是没有诱发针对流感病毒抗原的特异性免疫反应。 ４重组减毒 的应用前景和问题 作为递呈外源基因的细菌疫苗载体需满足以下 几个条件：（１）安全性好，即在动物模型中毒力比其 亲本菌株至少低４个对数倍数；（２）能在感染细胞的 胞质中稳定表达外源基因；（３）能优先感染专职 ＡＰＣｓ；（４）储存条件下性能稳定，不会发生外源基因 丢失；（５）价格低廉。携带特异性抗原的减毒重组 ＬＭ能够引起肿瘤退行性变，抵抗病毒进一步感染， 为肿瘤和难治性病毒感染的治疗提供了新思路。然 而，重组ＬＭ作为疫苗载体应用于临床仍存在一些 问题，如基因敲除后的减毒菌株毒力能否保持稳定， １１３４・ 中国免疫学杂志２０１１年第２７卷 李斯特菌携带的外源性抗原编码基因是否能稳定表 达蛋白，表达的蛋白是否有功能，人体内预存的针对 ＬＭ的免疫能否影响有效的内源性免疫和适应性免 疫，保证患者安全的剂量及患者免疫情况的纳入和 排除标准是什么等等¨７ｊ。Ｌｅｏｎｇ等［３ｏ］就发现人体有 高水平的（所测志愿者的６ｏ％）预先存在的针对ＬＭ ｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ［Ｊ］．Ａｄｖ Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００９；６６：１－２７ １５ Ａｎｇｅｌａｋｏｐｏｕｌｏｓ Ｈ，Ｌｏｏｃｋ Ｋ，Ｓｉｓｕｌ Ｄ Ｍ ｅｔ ａ／．Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ｓｈｅｄｄｉｎｇ ｏｆ ｎ ａａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ｗｉｈ ａ ｔｄｅｌｅｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｔＡ／ｐｌｃＢ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｖｏｌｎｔｅｕｅｒｓ：ａ ｄｏｓｅ ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｏｒａｌ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ，２Ｏ０２；７０（７）：３５９２．３６０１． １６ Ｂｒｏｃｋｓｔｅｄｔ Ｄ Ｇ，Ｂａｈｊａｔ Ｋ Ｓ，ＧｉｅｄｌｉｎＭＡ ｅｔ ａ１．ＫｉＩｅｄ ｂｕｔｍｅｔａｂｏｌｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ ｍｉｃｒｏｂｅｓ：ｆｌ ｎｅｗ ｖａｃｃｉｎｅ ｐａｒａｄｉｇｍ ｆｏｒ ｅｌｉｃｉｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｏｒ Ｔ＿ｅｅＩ１ Ｉｅ— ｓｏｎｓｐｅｓ ａｎｄｐｒｏｔｃｔｅｉｖｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００５；ｌｌ（８）：８５３： ８６０． 的细胞免疫，阻碍ＬＭ载体所携带的治疗基因或疫 苗的治疗效果。但是，最近有学者研究证明预先存 在的抗ＬＭ的免疫不会减弱口服ＬＭ疫苗抗ＨＩＶ ｇａｇ １７ Ｖａｓｓｎｘａ Ｇ，ＮｉｔｃｈｅｕＪ，Ｊｅｚｚａｒｄ Ｓ ｅｔ ａ１．Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｓｒｔａｔ ｅｓ ｌＪＪ。Ｊ Ｐａｔｈｏｌ，２００６；２０８（２）：２９０—２９８． １８ Ｐｉｌ ｍ Ｓ，Ｓｔｒｉｔｚｋｅｒ Ｊ，Ｓｅｈｏｅｎ Ｃ ｅｔ ｏ１．Ｂａｅ）ｏｆｃｔｉｅｏｎ ｏｆｍａｍｍａｌｉｎ ａｃｅｌｌｓｂｙ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ：ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ＤＮＡ ｄｅｌｉｖｅｒｙ 的免疫效应，ＬＭ空载体也没有诱发猕猴的抗体免疫 反应，表明进一步研究口服减毒ＬＭ疫苗的可行 性＿３ 。随着研究的不断深入，减毒重组ＬＭ必将得 到不断改进，为肿瘤和难治性病毒感染的治疗提供 更为广阔的前景。 ｌＪｊ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ，２００３；１０：２０３６—２０４５． １９ Ｓｏｕｄｅｒｓ Ｎ Ｃ，ＶｅｒｅｈＴ，ＰａｔｅｒｓｏｎＹ．Ｉｎ ｖｉｖｏ ｂａｃｔｏｆｃｔｅｉｏｎ：ｌｉｓｔｅｒｉａ ｃａｎｆｕｎｃ— ｔｉｏｎ ａｓ ａ ＤＮＡ—ｃａｎｃｅｒ ｖａｃｃｉｎｅ［ＪＪ．ＤＮＡ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，２０Ｏ６；２５：１４２ １５１． ０ ｖａ２ｎ Ｐｉｊｋｅｒｅｎ Ｊ Ｐ，ＭｏｒｒｉｓｓｅｙＤ，ＭｏｎｋＩＲ ｅｔ ｏ１．ＡｎｏｖｅｌＬｉ￣ｅｒｉａｍｏｎｏｃｙ— ｔｏｇｅｎｅｓ－ｂａｓｅｄ ＤＮＡ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ，２０１０；２１：４０５ ４１６． ２１ ＬｏＬ￣ｌｅｒ Ｄ １．Ｓｃｈｏｃｎ Ｃ Ｕ．Ｇｏｅｂｅｌ Ｗ ｅｔⅡｆ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｌｉｖｅ ｖａｃｃｉｎｅ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ｆｏｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆｐｒｏｔｅｉｎ ｎｔａｉｇｅｎ ｏｒ ａｎｔｉｇｅｎ－－ｅｎｃｏｄ・－ ５参考文献 １ Ｖａｚｑｕｅｚ Ｂｏｌａｎｄ Ｊ Ａ．Ｋｕｈｎ Ｍ．Ｂｅｒｃｈｅ Ｐ ｅｔ ａｆ．Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｉｎｇ ＤＮＡ ａｎｄ ｍＲＮＡ ｂｙ ｖｉｍｌｅｎｃｅ－ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ Ｌｉｓｔｅｉｒａ ｍｏｎｃｙａｔｏｇｅｎｅｓ［Ｊ］． Ｉｆｅｃｔｎ Ｉｍｌｎｎｎ，２００６；７４：３９４６．３９５７． ２２ Ｂｒｕｈｎ ＫＷ，Ｃｒａｆｔ Ｎ，Ｍｉｌｌｅｒ Ｊ Ｆ．Ｌｉｓｔｅｒｉａ ａｓ ａ ｖａｃｃｉｎｅ ｖｅｃｔｏｒ［Ｊ］．Ｍｉ． ｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ，２Ｏｏ７：９：１２２６—１２３５． ２３ Ｇｕｎｎ ＧＲ，ＺｕｂａｉｒＡ，Ｐｅｔｅｒｓ Ｃ ｅｔ ａＺ．ＴｗｏＬｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｅｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ｖａｃｃｉｎｅ ｖｅｃｔｏｒｓｔｈａｔ ｅｘｐｒｅｓｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｏｌｅｃｕｌａｒｆｏｒｍｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｏｍａ ｖｉＩｌｌｓ一 ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｖｉｍｌｅｎｃｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓｌＪｊ．Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ，２００１；１４：５８４— ６４０． ２ ＷａｌｌｃｈａＡ，Ｃａｒｅｏｌｒｌ ＫＤ，ＭａｃｉａｇＰ Ｃ ｅｔ ａ ．Ｍｕｌｔｉｐｉｅ ｅｆｆｃｔｏｒｍｅｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｉｎｆｆｎｕｎｏｔｈｅｒａ— １６（ Ｖ－１６）Ｅ７ ｉｎｄｕｃｅ ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅｌｙ ｄｉｆｅｒｅｎｔ Ｔ ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｔｈａｔ ｃｏｔ— ｒｅｌａｔｅｓ ｗｉ山ｔｈｅｉｒ ａｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｉｎｄｕｅｅ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｓｔｂｌａｉｓｈｅｄ ｔｎ／ｎｏｒ￥ｉｍ— ｐｅｕｔｉｃｓ［Ｊ］．Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２ｏ０９；６６：１－２７． ３ Ｂｒｕｈｎ Ｋ Ｗ，Ｃｒａｆｔ Ｎ，Ｍｉｌｌｅｒ Ｊ Ｆ．Ｌｉｓｔｅｆｉａ ａｓ ａ ｖａｃｃｉｎｅ ｖｅｃｔｏｒ［ＪＪ．Ｍｉｃｒｏｂｅｓ ｎｄ Ｉｎｆａｃｔｅｉｏｎ，２Ｏ０７；９：１２２６—１２３５． ｍｏｒｔａｌｉｚｅｄ ｂｙ｝Ⅱ）ｖ一１６［ＪＪ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００ｌ；１６７：６４７１－６４７９． ２４ Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ Ｊ，Ｆｒａｎｋｅｌ Ｆ Ｒ．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｇａｎｎｅｓ ａｓ ａｎ ４ Ｐｏ￣ｎｏｙ Ｄ Ａ，Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｙ Ｔ，Ｇｏｅｂｅｌ Ｗ ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ｏｆ ＡＩＤＳ ｖａｃｃｉｎｅ［Ｊｊ．Ｖａｃｃｉｎｅ，２００２；２０（１５）：２００７．２０１０． ２５ Ｓｉｎｇｈ Ｒ，Ｐａｔｅｒｓｏｎ Ｙ．Ｉｎ山ｅ Ｆ、，Ｂ／Ｎ皿Ｒ．２／ｎｅｕ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｏｕｓｅ ｂｏ山 ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ａｎｄ ｃｅｎｔｒａｌ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｌｉｍｉｔ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｎａｎｕｎ，１９９２；６０：１２６３— １２６７． ５ ＤｕｓｓｕｒｇｅｔＯ，Ｐｉｚａｒｍ－Ｃｅｒｄａ Ｊ，ＣｏｓｓａｒｔＰ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ｏｆＬｉｓｔｅｒｉ－ ＨＥＲ．２／ｎ ｕ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ—ｂａｓｅｄ ｖａｃｃｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｃａｎ— ｃｅｒ Ｉｒｍｎｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２ＯＯ７：５６：９２７—９３８． ２６ Ｓｈａｈａｂｉ Ｖ．Ｒｅｙｅｓ．Ｒｅｙｅｓ Ｍ．Ｗ ｌｃｈａ Ａ ｅｅｔ ａ／．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ［Ｊ］．Ａｎｎｎ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００４；５８：５８７—６１０． ６ Ｇｕｌｅｒｉａ Ｉ。Ｐｏｌｌａｒｄ Ｊ Ｗ．Ａｂｅｒｒａｎｔ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ａｎｄ ｎｅｕｔｍｐｈｉｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｄｙｎａｍｉｃｓ ａｎｄ ｉｍｐａｉｒｅｄ １ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ｉｎ ｃｏｌｏｎｙ。 ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ｂａｓｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ ａｇａｉｎｓｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒｌ Ｊｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍ— ｍａｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，２０ｏ８：５７：１３０１．１３１３． ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ １－ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｗｉｅｅ［Ｊ］．Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ，２００１；６９：１７９５－ １８０７． ２７ Ｍａｃｉａｇ Ｐ Ｃ，Ｒａｄｕｌｏｖｉｃ Ｓ，Ｒｏｔｈｍａｎ Ｊ．Ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｕｓｅ ｏｆ ａ ｌｉｖｅ—ａｔ— ｔｅｎｕａｔｅｄＬｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ｖａｃｃｉｎｅ：ａ Ｐｈａｓｅ Ｉ ｓａｆｅｔｙ ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｌｍ－ ７ Ｂｒｃｋｓｔｏｅｄｔ Ｄ Ｇ，Ｄｕｂｅｎｓｋｙ Ｊｒ Ｔ Ｗ．Ｐｒｏｍｉｅｓｓ ａｎｄ ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌ－ ｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ—ｂａｓｅｄ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｉｅｓ［Ｊ］ Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ，２００８；７（７）：１０６９．１０８４． ８ Ｂｒｚｏｚａ Ｋ Ｌ．Ｒｏｃｋｅｌ Ａ Ｂ，Ｈｉｌｔｂｏｌｄ Ｅ Ｍ．Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ａｎｔｒｙ ｏｆ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ－ ｕＪ０一Ｅ７ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｈｅ ｃｅｒｔｖｉｘ［Ｊｊ．Ｖａｃｃｉｎｅ， ２Ｏ０９：２７（３０）：３９７５—３９８３． ２８ Ｓｃｉａｒａｎｇｈｅｌｌａ Ｇ，Ｌａｋｈａｓｈｅａ Ｓ Ｋ，Ａｙａｓｈ—Ｒａｓｈｋｏｖｓｋｙ Ｍ ｅｔ ．Ａ ｌｉｖｅ ａｔ ｔｅｎｕａｔｅｄ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎａｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ｖａｃｃｉｎｅ ｖｅｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ＳＩＶ Ｇａｇ ｉｓ ｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊｊ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０ｏ４；１７３（４）：２６４１—２６５１． ９ Ｍｕｒａｉｌｌｅ Ｅ，Ｇｉａｎｎｉｎｏ Ｒ，Ｇｕｉｍａｌｄａ Ｐ ｅｔ ａ１．Ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｉｎ ｖｉｖｏ ｄｅｎｄｒｉｉｔｃ ｅｅｌｌ ｓａｆｅ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ ｉｎ ｍａｃａｑｕｅｓ ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ ｒｅｐｅａｔｅｄｌｙ ｌＪｊ．Ｖａｃｃｉｎｅ，２０ｌ１；２９：４７６４８６． ２９ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｐ Ｖ．Ｂ１ａｉｒ Ｂ Ｍ．Ｚｅｌｌｅｒ Ｓ ｅｔ ａ１．ＡｔｔｅｎｕａｔｅｄⅡｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏ— ｇｅｎｅｓ ｖａｃｃｉｎｅ ｖｅｃｔｏｒｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｎｕｅｌｅｏｐｒｅｔｅｉｎ：ｐｒｅｃｌｉｎｉｅａｌ ｅ— ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ｌｉｖｅ ｖｅｒｓｕｓ ｋｉｌｅｄ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ ｈｎ— ｍｕｌｌＯ１，２０ｏ５；３５：ｌ４６３ １４７１． １０ Ｆｅｎｇ Ｈ Ｐ，Ｚｈａｎｇ Ｄ，Ｐａｌｌｉｓｅｒ Ｄ ｅｔ ｏｌ Ｌｉｓｔｅｒｉａ－ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｍｙｅｌｏｉｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｖａｌｕ ｏｎ ａＩｌｄ ０ｒ丑ｌ ｉｎ０ｃｕｌａｄ叩０ｆ ｖ０ｌｕｎｔｅｅｒｓ ｌ Ｊ Ｊ． ｃｍｂｉ０ｌ ｈ眦ｎｍｏｌ， ２Ｏｌ１：５５：３Ｏ４．３１７． ｃｅｉｌｓ ｐｒｏｄｕｃｅ ＩＦＮ—Ｂ，ｐｒｉｍｉｎｇ Ｔ ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００５； １７５：４２１＿４３２． ３０ ＬｏＤｎｇ Ｍ Ｌ，Ｈ舭ｌｐｌ Ｊ，Ｉｊｕ Ｗ ｅ￡ⅡＺ．ｈ印ａｃｔ ０ｆ ｐｎ捌ｓｔｉｎｇ Ｖｅｃｔ０ｎ ｐｅｃｉ６ｃ ｉｍｍｕｎｉ竹０ｎ ｖａｃｃｉｎｅ ｐ０ｔ即ｃｙ：ｃｈａｒａｃｔ ｚａｔｉｏｎ ０ｆ ｌｉｓｔ ａ ｍｏｎｏｃｙｔ０ ｅｎｅｓ— ｌ１ Ｌａｄｅｌ Ｃ Ｈ。Ｆ１ｅｓｈ Ｉｎ Ｅ．Ａｍｏｌｄｉ Ｊ ｅｔ ａ１．Ｓｔｕｄｉｅｓ ｗｉ山ＭＨＣ ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｋｎｏｃｋ－ｏｕｔ ｍｉｃｅ ｒｅｖｅａｌ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｂｏｔｈ ＭＨＣ Ｉ－ａｎｄ ＭＨＣ ＩＩ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｔ ｓｐｅｃｍｃ ｈｍ 日Ｉ】ｄ ｃｄｌｕｌａｒ ｉｍ ｔｖ ｉｎ ｈ１ⅡＴ脚ｓ趴ｄ ｍ０ｄｅ１ｉｎｇ ｓｔｔＩｄｉｅｓ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｏｎ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ｉｆｅｃｔｎｉｏｎ［Ｊ３．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９４； １５３：３１１６－３１２２． ｕｓｉｎｇ ｒｅｃ０硼ｂｉｎａｎｔ ｖａｃｃｉｎｅｓ ｉｎ Ｉｌｌｉｃｅｌ Ｊ Ｊ．Ｉｒ ｃｔ ＩｒｎⅢｍ，２Ｏ０９；７７（９）： ３９５８—３９６８． １２ Ｊｕｎｇ Ｓ，ＵｎｕｔｍａｚＤ，ＷｏｎｇＰ ｅｔ ａ１．Ｉｎ ｖｉｖｏ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｏｆＣＤＩｌｃ（＋）ｄｅｎ— ｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ａｂｒｏｇａｔｅｓ ｐｒｉｍｉｎｇ ｏｆ ＣＤ８（＋）Ｔ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ ｃｅｌｌ—ｓ－ａ ３１ ＷｈｉｔＩｌｅＹ Ｊ Ｂ，Ｍｉｒｓｈａ｝ｌｉｄｉ Ｓ，Ⅱｍ ＳＹ ．蹦０ｒ嘲）０ｓｕｒｅｔ０粕ａ【ｌ即ｕａｔ． ｅｄ ｓｔ ａ ｖａｃｃｉｎｅ ｄ０ｅｓ ｎ０ｔ ｒｅｄｕｃｅ ｉｍｍｕｎｏ ｅｎｉｃｉｔｙ：ｐｒｅ—ｃｌｉＩｌｉｃａｌ ａｓｓｅｓｓ— ｓｏｃｉｔａｅｄ ｎｔｉａｇｅｎｓ［ＪＪ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２０ｏ２；１７：２１１－２２０． １３ Ｚｅｎｅｗｉｃｚ Ｌ Ａ，Ｓｈｅｎ Ｈ．Ｉｎｎａｔｅ ａｎｄ ａｄａｐｔｉｖｅ ｉＩｎｎｌｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｒｎｅｎｔ ０ｆ ｔＩｌｅ娟ｃａｃｙ ０ｆ ａ Ｌｉｓｔ ａ ｖａｃｃｉｎｅ ｉｎ ｔ｜ｌｅ ｉｎｄｕｃｔｉ０ｎ ０ｆ ｉｎⅡＨＬｌＩｌｅ Ｉｅ— ｓｐ衄ｓｅｓ ａ ｎｓｔ ＨＩＶｌＪｊ．Ｊｌｍ珊ｍｅ Ｂａｓｅｄ ｅｒ Ｖａｃｃｉｎｅｓ，２ｏＩ１；ｌ８（９）： ２—２． ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ：ａ ｓｈｏｒｔ ｏｖｅｒｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｆｅｃｔ，２００７；９（１０）：ｎ １２０８—１２１５． １４ Ｗａｌｌｅｃｈａ Ａ，Ｃａｒｒｏｌｌ Ｋ Ｄ，Ｍａｃｉａｇ Ｐ Ｃ ｅｔ ａｆ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｍｏｃｈａ． ｎｉｓｍｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｉｍ． ［收稿２０ｌ１・０ｒ７—１３修回２０ｌ！一ｏ７．２６］ （编辑倪鹏）
