SOP标准操作程序-AMY

淀粉酶（货号：OSR6106）

实验原理：

α-淀粉酶主要来源于胰腺和唾腺分泌。血清水平升高和急性胰腺炎，其它胰腺紊乱以及腮腺炎和细菌性腮腺炎有关1。

发生胰腺炎时，淀粉酶的活性快速升高，在发作后六到八小时内表现出来。在高水平维持一到三天，然后快速返回到正常值，反映了淀粉酶有效的肾清除率。

在肝脓肿，急性肝细胞损伤，肝硬化，肝癌，胆管癌和胆囊炎中可发现淀粉酶水平降低1。

淀粉酶是一种相当小的蛋白质，因此它随时准备过滤到尿液中去。尿液中淀粉酶浓度增加的时间比血清中更长。在一个两小时收集的尿样中检测淀粉酶的含量是检验胰腺炎的一个很好的测验。

方法

奥林巴斯AU640淀粉酶的测定是利用CNPG3。这种底物直接与α-淀粉酶发生反应，不需要辅酶。从底物中释放出CNP，每分钟吸光度增加与标本中α-淀粉酶的活性成正比。吸光度增加在410/480nm测定。

α-淀粉酶

CNPG3-------------﹥CNP + CNPG2 +葡萄糖 +麦芽三糖

标本：

病人准备：无特殊要求。

类型：标本最好是无溶血的血清或肝素化的血浆。血清应在收集后尽快分离出来。未酸化的尿液，随机或限时收取。

标本稳定性：不要用嘴吸取标本或对标本吹气，以免唾液淀粉酶使结果升高。血清淀粉酶在20～25℃稳定一个星期，避免微生物降解作用，在2～8℃时稳定一个月。对于尿液，酸性pH值可使淀粉酶的稳定性减弱，因此，储存前pH值应调至大约7.0。

仪器与材料:

仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪 材料：奥林巴斯AU640淀粉酶 参与反应成份的最终浓度：

MES缓冲液（PH6.05） 36.1 mmol/L 醋酸钙 3.60 mmol/L 氯化钠 37.2 mmol/L 氰酸钾 253 mmol/L CNPG3 1.63 mmol/L 其中含有稳定剂，表面活性剂和防腐剂。 注意：1. 此试剂为体外诊断用。

2. 不要摄食，吞服有害。

3. 防腐剂为叠氮钠，与下水管中的铜反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠

氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。 试验用试管的直径在12～16mm。

试剂准备：奥林巴斯AU640的α-淀粉酶是即开即用的。无需特殊准备。 执行参数（性能参数）：以下数据是根据奥林巴斯AU640α-淀粉酶已经建立的程序。

精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的典型的方法7，AU640批内不精密度小于5%，总不精密度小于10%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。 血清：

N=100 平均值（U/L） 69 103 412 尿：

N=100 平均值（U/L） 30 136 批 内 SD 0.5 1.2 精 密 度 CV% 1.7 0.9 总 精 SD 0.9 3.6 密 度 CV% 2.7 2.7 批 内 SD 0.7 0.8 3.1 精 密 度 CV% 1.0 0.8 0.8 总 精 SD 1.3 2.1 7.7 密 度 CV% 1.9 2.0 1.9 方法学比较：

血清：奥林巴斯AU640淀粉酶（方法1）与其它奥林巴斯分析仪器（方法2），共同做181个病人标本。相关系数达到1.000，回归方程如下： 淀粉酶方法1=（淀粉酶方法2×0.976）+0.5 病人结果数值分布： 9～1646 U/L

尿：奥林巴斯AU640 尿淀粉酶方法与其它相似的方法，共同做195个病人标本。相关系数达到0.9997，回归方程如下：

淀粉酶方法1=（淀粉酶方法2×0.977）+1.9 病人结果数值分布： 11～1312 U/L

敏感度：在奥林巴斯AU640生化分析仪上每分钟变化0.11毫吸光度为1 U/L。 试剂的贮存：1.不要对标本呼吸，咳嗽或打喷嚏，避免标本受唾液淀粉酶的影响。

2.当保存于2～8℃，不开盖情况下至标签的失效期。 3.开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定30天。

变质指示：试剂变色表明试剂已分解，不能继续使用。

校准：

标准液的准备：这个实验不需要标准液。

校准程序：淀粉酶的校准基于p-硝基酚的摩尔消光系数，在410/480nm为11,320。

质控：在每一批标本中都应把奥林巴斯水平I与II质控血清（DR0061&62）作为未知标本

进行分析。

操作程序（逐步地）： AU640开机

1.确认两瓶清洗剂有足够的量。

2.打开蒸馏水供应系统的阀门。

3.如果没有设定自动开机，请按分析仪器上的[POWER ON]键。 4.确认打印机为开机并处于联机状态。

5.在[Start Condition]屏幕，输入所需信息，并按F2退出。 6.如果要求输入密码，请输入密码。

7.确认仪器上的在线试剂的位置是否正确、数量（体积）是否充足，不足请添加并在系统状态中的试剂状态检查试剂。

8.在急诊台Wash1的位置的试管中加满一支1N HCL的样品针清洗液。 9. ISE（电极）需要以下步骤定标：

a.在急诊台相应位置放血清/尿高和低值标准液。 b.在系统状态菜单选择ISE状态菜单。 c.选择F5，选定合适的定标条目。

d.定标完成后，确认斜率和因数是否在范围内。

开始分析:

1.把定标、质控、和标本架放在架子传送带上。

2.用鼠标点击屏幕最上方的[START ANALYZER]图标。 3.点击F2退出键，退回到主屏幕。 分析参数 血清参数

样品体积 2微升 稀释水 0微升 试剂1体积 200微升 稀释水 0微升 试剂2体积 n/a 稀释水 n/a 波长 410/480 方法 Rate 读点 5/10 温度 37℃ 尿参数

样品体积 2微升 稀释水 0微升 试剂1体积 200微升 稀释水 0微升 试剂2体积 n/a 稀释水 n/a 波长 410/480 方法 Rate 读点 5/10 温度 37℃ 完整的实验参数与操作程序可以在AU640用户手册中查到。

计算：

无需手工计算，在37℃每个标本的结果自动以U/L打印。

报告结果:

参考范围：

参考值：

血清9： 29-103U/L 尿3： 5-27U/hour

参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

不正常结果的处理程序：根据仪器参数的正常值会打印异常标志。 报告格式：

自动地打印37℃U/L的报告，如果以SI单位（uKat/L）报告结果，要乘以0.017。

操作过程注意事项：

操作过程的限制性：OlympusAU640血清测定淀粉酶的线性范围是10～2000 U/L。尿测

定的线性范围到1500U/L。样品浓度超过线性上限应稀释重做。在AU640中应用自动重做功能，标本稀释重做后会自动乘以稀释倍数。

超范围的标本也可以在四份生理盐水中加一份血清进行手工稀释，轻轻地混匀，在AU640上当常规标本，结果乘以5。 干扰物质：

1. 不要用嘴吸取试剂或标本，以免唾液淀粉酶的污染。实验室研究表明，螯合剂如抗凝血剂柠檬酸盐和EDTA将会干扰这个测定。

2. 研究结果表明淀粉酶测定受以下物质干扰5： 乳糜 乳糜达到1000mg/dL时影响小于5% 溶血 血红蛋白达到500mg/dL时影响小于6% 胆红素 胆红素达到20mg/dL时影响小于10%

Olympus的研究结果是根据现时发表的文献，Olympus美国公司正在进行准确性的研究，对于其它物质的干扰，请参看Young发表的文献6。

参考文献：

1. Friedman,R.B. and Young,D.S.Effects of Diseases on Clinical Laboratory Tests,2nd

Edition,AACC Press,Washington,DC,1989. 2. Blair,H.E.,Genzyme,US Patent Pending.

3. Tietz,N.W.(Ed),Clincial Guide to Laboratory Tests,2nd Edition,W.B. Saunders,1990.

4. Henry,R.J.,Cannon,D.C.and Winkelman,J.W.,Clinical Chemistry,Principles & Technciques,2nd

Edition,Harper & Row,943-949;1974.

5. NCCLS,Interference Testing in Clincial Chemistry,EP7-P,1986.

6. Young,D.S.,Effects of Drugs on Clincial Laboratory Tests,4th Edition,AACC Press,1995. 7. NCCLS,Evaluation Protocol EP5-T2,1992.

8. Rauscher,E. et al.,Fresenius Z, Analyt. Chem.,324,304;1986. 9. 200 blood donors from North Texas.Data on file.