生物制药工艺

生物制药实训报告 A组

2-1培养基的配制与灭菌，辅料及器皿的灭菌

1. 富集培养基的配制 （1）母液的配制

分别配制1.0%KH2PO4、0.4%氯化钙、0.7%七水硫酸镁、0.5%七水硫酸亚铁。（实验室以配制） （2）富集培养基的配制

我们为1号组：

（1）：在以配制好的母液中1.0%KH2PO4、0.4%氯化钙、0.7%七水硫酸镁、0.5%七水硫酸亚铁各用移液管移取10ml入烧杯中，混匀备用。

（2）用电子天平称取玉米淀粉0.80g,加入10ml蒸馏水，搅拌均匀后再倒入约50ml的沸水中，一边倒一边搅拌，在水浴锅中煮沸8分钟，冷却后与步骤（1）的溶液混匀加HCL调节PH至5.0，加入3滴。装入100ml的锥形瓶分装，每瓶25ml（其中一瓶为空白） 2、筛选培养基的配制

称取营养琼脂9.60g,倒入500ml的锥形瓶中，再称取4.50g的玉米淀粉，加入少许蒸馏水溶解加入250ml的沸水中，溶解后，倒入500ml有营养琼脂的锥形瓶中，搅拌均匀，调节PH值至5.0，倒入量筒中至300ml,再倒回锥形瓶中盖好塞子，杀菌。 3、产酶培养基的配制。

称取蛋白胨1.0g，牛肉膏0.5g，氯化钠0.5g.至于烧杯中备用，称取1g的可溶性淀粉，加入约10ml的蒸馏水溶解，搅拌后缓缓倒入60ml沸水中，一边倒一边搅拌溶解后再倒入烧杯中混匀后用HCL调节PH值至5.0，再将溶液倒入量筒中加蒸馏水至100ml 用移液管移取25ml至100ml的锥形瓶中，共4瓶。 4、辅料与器皿灭菌

1ml移液器吸头，200微升移液器吸头，无菌水50ml/瓶 4份，1.5ml离心管50个，老师已灭菌。

2-2 样品采集与富集培养

1、采样

于校园绿化带下腐殖质较厚处采集泥土样品3份，用采样袋装好，用记号笔在采样袋上写好编号，带回实验室。我们小组为A组，2人为一小组，分别采集了实训楼下、5号寝室楼下和2号寝室楼下的土，编号为A1、A2、A3。 2、富集培养

取无菌水50ml浸润5-10g样品，A1:5.37g A2:5.g A3:6.84g,然后把样品在摇床上100转摇1h，然后取1ml上层清夜于富集培养基中,分别称取A1:0.2305g A2:0.2260g A3:0.2304g，最后30摄氏度100转每分钟培养过夜。

2-3/2-4产淀粉酶功能菌株的筛选与纯培养

取富集培养物100微升，稀释至适当浓度，取两个较高稀释倍数的菌液个100微升，接种筛选平板（9块平板），于30℃培养24小时，观察淀粉水解圈大小，并用直尺测量平板上淀粉水解圈的直径。按淀粉水解圈直径从大到小顺序，挑去菌落，运用平板划线法，接种于筛选培养基上，并置于30℃进行过夜培养。