利用基因扫描分析TCRVβ亚家族的CDR3长度方法检测T细胞克生

０　·４８·　１９９８年第１４　利用基因扫描分析ＴＣＲ　ｒｉｂ亚家族的ＣＤＲ３　长度方法检测Ｔ细胞克隆性　李扬秋汪明春（暨南大学血液病研究室，广州５１０６３２）　吴幼华　汕头教育学院生化系，汕头５１５０４１）　中国囝书分类号Ｒ３７１．２　Ｒ７３３－，·产　Ｋ，７　ｊ　ｚ　摘要分析了建康人、Ｔ＿ＡＩ，ＩＪ外周血及Ｔ细胞抹Ｍｏｌｔ一４和Ｊｕｒｋａｔ中ＴＣＲｖ０Ｔ细胞的表　达和克隆性。直用ＲＴ－ＰＣＲ扩增ＴＣＲＶ母２４个亚家族的ｃＤＲ３，井经基田扫描和序列分析确定Ｔ　细胞克隆性　结果表明健康人表达除坤２０外的多克隆Ｔ细胞｝Ｔ＿ＡＬＬ仅表达３～４个Ｖ日亚家族　Ｔ细胞；部分星寡克隆性；Ｍｏｌｔ－４和Ｊｕｒｋａｔ分别表达　和　ｌｇ单克隆　细船。Ｔ＿ＡＬＬ中存在克　隆性生长Ｔ细胞。该方法是检测Ｔ细胞克隆性的敏感和精确的方法。　关键词ＴＣＲＶＢ基因覃　塞壁３（ＣＤＲ３）　基因扫描　Ｔ细胞克隆性　自血瘸　Ｔ细胞抗原受体（ＴＣＲ）是．ｒ细胞表面识别和　外，在　引物的左侧分别设一荧光素标记的ｃ２－　结合抗原，参与特异性细胞免疫的重要分子　在Ｔ　Ｆａｍ引物ｔｃ　ＦａＩｎ　５　ａｍ　ＡｃＡＧｃＧＡＩ　Ｈ　Ｇ　细胞发育过程中，坯系的ＴＣＲ各片段ＣＶ、Ｄ和Ｊ　ＧＴＧＣ￣）和一生物素标记的ｃ　Ｂｉｏ引梅（Ｃ￣－Ｂｉｏ　区）发生重排，重排时在ｖ＾Ｄ，Ｄ－Ｊ区之间可有不同　５　一琢。＿ＣＡＣＡＧＣＧＡ￣ＡＡ）作为基　数量的核苷酸随机插入（Ｎ区），形成具有高度多样　因　描和序列分析之阳　『物由锥画柏林ＴＩＢ生　性的可变化区Ｖ￣Ｄ０．　称为互补决定区　物公司合成。　ＦＣＲ操作按常规方法进行。总反应体　（ＣＤＲ３）　，同一克隆的Ｔ细胞的ＴｃＲＣＤＲ３相同　积为２５　，其中含１　ｅＤＮＡ，０．１ｍｍｏｌ／Ｌ　ｄＮＴＰ　已报道人类ＴＣＲ　基因有２４千亚家菔（ｖｏｌ～　（ｄＡＴＰ．ｄ（　＿Ｐ，ｄＧＴＰ和ｄＴＴＰ），引物浓度均为０．５　。４）０　鹌甩ＶＢ亚家族移Ｃ　硌鹋特蘸．采聃基西　｝ｊ倒　／Ｌ（任一　ｌ弓Ｉ物榔ｃ辟弓ｌ物），＆．２５　Ｕ　Ｔ８ｑ聚　扫描分析是国外检测Ｔ细胞克隆性的新方法　合酶，所有试剂均为　ｒｋｉｆｌ　Ｅｌｍｅｒ公司产品，共进　行４０个循环：　℃，１　ｍｉｎ（首次ｇ　ｍｉｎ）；６０＇Ｃ，１　１材料与方法　ｎ｝７２℃．１血ｎ（束次１０，ａｒｉｎ）；结束后保存于４＇Ｃ　１　１标本　中　各反应均设阳性和阴性对照，产物于２．５　琼脂　经细胞形态学、细胞纽化和细胞免疫学确诊的　糖中电溶分析　一　Ｔ细胞白血病患者（Ｔ＿ＡＬＬ）２例，＇Ｔ细胞抹Ｍｏｌｔ一４　１．２．３　Ｔ细胞克隆性分析（ｃＤＲ３长度分析）　及Ｊｕｒ￣ｔ和正常人８例。　１．工３．１标记ＰＣＲ产物（Ｒｕｎ￣）ｉｉｔｅａ　口　１．２方法　ＲＴ－ＰＣＲ产物经琼脂糖凝腔电泳分析簏现阳性　１．　１外周血单个核细胞分离、ＲＮＡ提取及反转　带者进一步经引物Ｃ￣Ｆｅｍ避行不对纷Ｐ（　扩增，　录台成ｃＤＮＡ　，　以榻到荧光素标记的单链ＰｃＲ产物．总反应体积为　均按常规方法进行。　１０一，含２．　首挺ＰＣＲ产物，ｎ　１．ｕｍｏｌ／Ｌｑ｝Ｆ珊，　１．２。２反转录一多聚酶链反应（ＲＴ　ＰＣＲ）　３ｍｍｏｌ／ＬＭｓ，ｅｌ２，０．２ｍｍｏｌ／Ｌ　ｄＮＴＰ，０．２５ＵＴａｎ　据Ｖｐ　２４个亚家族基因设计相应的２４个ｖｐ特　聚合酶，反应共进行３５个循环，退火温度由６０＂Ｃ改　异性上游引物，并在印区设一　下游引物ｍ　另　为６６＂Ｃ，其余同上　１．　３、２基因扫描（Ｇｅｎｅｓｃａｎ）分析　作者简舟：李扬秋，女，３５岁．博士．副研究员，主要从事造　经Ｒｕｎｏｆｆ·ｒｅａｃｔｉｏｎ所得到的产物１　，加入２　５　血免疫调控和自血病研究；　甲酰胺，０．５　标准品（ＡＢＩ，ＧＥＮＥＳＣＡＮ一５００－　汪明春，男，４９岁，博士．研究员，博士生导师．主　ＴＡＭＰＡ，其中含有不同大小的荧光素Ｔａｍｒａ标记　要从事造血免疫｛胃拄和白血捕研究工作　的ＤＮＡ片段）及０　５　加样缓ｊ中液（含葡聚糖兰５Ｏ　一　维普资讯 http://www.cqvip.com

Ｔ　·４９·　ｍ　／Ｉｎｌ和ＥＤＴＡ　２５　ｍｍｏｌ／Ｌ），于９４℃变性４　ｍｉｎ　后于６　聚丙酰胺凝腔，３７３Ａ　ＤＮＡ序列分析仪　（ＡＢＩ，Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅ１ｍｅｔ公司）中电泳及分析结果，通过　分析软件ｃｏ７２（基因扫描）分析，激光扫描及计算机　收集电泳过程中不同时间所出现的不同强度和颜色　的荧光索而显示出不同的位置，高度，颜色和形态的　峰。荧光索Ｆａｍ呈蓝色，而Ｔａｍｘａ呈红色。峰的位　置表示产物的大小（与标准品比较），高度表示产物　的量，而形态表示产物的均—性，如果所吉的ＤＮＡ　片段大小相同，基因扫描分析结果显示为单峰；如果　绝大多数　Ａ片段大小相同，则呈一主峰及个别　矮峰｝如果产物中ＤＮＡ片段大小不一，则为多峰图　象，这３者分别提示产物来自单克隆、寡克隆和多克　隆的Ｔ细胞。　１．二４核苷酸序列分析　羟基因扫描分析发现单克隆或寡克隆的产物进　步进行序列分析，了解其ＣＤＲ３的序列，进行　ｐｃＲ扩增时，下游引物改用生物索标记的￣￣－Ｂｉｏ引　物，采用非放射性取脱氧核苷酸末端终止法及Ｔ＿　ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ　ｃｙｃｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｒｅａｄｙ　ｒ￣ｃｔｌｏｎ试剂　盒（Ｊ￣ＢＩ，Ｐｅｒｉｋｎ　Ｅｌｍｅｔ公司产品），于３７３Ａ　ＤＮＡ序　列分析仪中电谏分析。　２结果　２．１　ＴＣＲ、ｒ口亚家族Ｔ细胞的表达情况　采用、ｒ口１～２４／Ｃ８引物经ＲＴ－ＰＣＲ扩增结果：８　例正常人外周血表达昧、　Ｏ外的其他ｖＢ亚家族　Ｔ细瞻；Ｔ—ＡＬＬ检溅结果发现：１恻（例１）仅表达　Ｖ阳、Ｖｐ９和Ｖ阳ｌ｝另１倒（倒２）则表达、ｒ日２、Ｖ阳、　Ｖｔ￣－３和Ｖ口ｌ９｝Ｍｏ［一４和Ｊ￣ｒｋａｔ细胞分别为表达　Ｖ阳和Ｖ阳的Ｔ细胞。　；２　Ｔ细胞克隆性分析结果　所有阳性产物基因扫描分析结果显示：８例正　常人全部ＰＣＲ产物呈多峰图象，提示产物大小不　均，即ＣＤＲ３长度不一，即来自不同克隆的Ｔ细胞　（多克隆）￣Ｍｏｌｔ一‘和Ｊ￣ｒｋａｔ的ＰＣＲ产物均呈单峰　图象（单克隆）；Ｔ＿ＡＬＬ例１所表达的３个、　亚家　族的ＰＣＲ产物全部呈一主峰及个别矮峰图象（寡克　隆）。另１饲（倒２）的、　产物为寡克隆，其余为多　克隆Ｔ细胞咽１）。　二３克隆性产物的序列分析结果　基因扫描提示单克隆或寡克隆的ＰＣＲ产物均　进一步进行序列分析，以了解④Ｒ。的序列和Ｄ口　及　的所属片段。Ｍｏｌｔ一４和Ｊｕｒｋａｔ细胞所表达的　１　．　１　．　。．　　．图ｌ　２例Ｔ＿ＡＬＬ的ＰＥＲ产袖的基因扫描分析结　暴　Ｆｉｇ．１　１ｋ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ￣ｏｃｓｏｍ埘Ｉ　ｉｓｆｒｏｍ　ＰＥＲ　ｐｒｏｄｕｃｔｓｉｎ　２　ｃ■嘲　ｔｂ　Ｔ＿ＡＩ正　Ｎａ　：　ｃａ辨１，　ｌ　ＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔ￣，Ｅ　ａ　４ｏ［ｏＬ－￣ｍｔ　ｐｅａｋ　（ｏｌｉａ￣ｃｌｏｎｅ）ｆＢ　ｃａｓｅ　２ｆ　ｐｒｏｄ时ｏｆＶ阳ｓｈｏｗ　ａ　ｄｏｍｉｍｎｔ口ｅ＆ｋ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｏｔｈｅｒ　ｐｍ￣ｃｔｓ　ａｆｅ　ｍｕｌ￣ａｋ　（ｐｏｌｙｄｏｒ￣）　ＴｃＲＢ分别为Ｖ　邵１．１　Ｊ阳．１睇和Ｖ脚Ｄ阻．Ｉ　一　弗１．卿ＩＴ—ＡＬＬ铡１所表达的３十ＴＣＲＶ￣亚家族　的序列分别为　邵２．１棚珏．１　．Ｖ阳　邵２．１　２．１ｃｐ和　２ｌＮ邵２．１埘Ｉ２．１　Ｉ１＂－ＡＬＬ倒２的　２　产物的序列为Ｖ阳　邵２．１　坤１．２　（Ｎ为数量不等，　碱基序列各异的片段）。　３讨论　利用不同克隆Ｔ细胞其１　Ｂ重捧不同，其　ＣＤＲ３长度必然不同的特点，采用荧光素标记ＰＣＲ　产物及基因扫描分析方法检测这种差别，是近年国　外新开展的检测Ｔ细胞克隆性的方法　，国内罕见　报道。该方法既利用ＴＣＲＶ口２４个亚家族将Ｔ细胞　分为２４ＶＢ亚群加上ｃＤＲ３的特点，又采用十分灵　敏的基因扫描分析，经计算机处理得出较为客观的　结果来判断Ｔ细胞的克隆性．结果　峰形图表示，　是一种直观而又迅速判断结果的方法。　该方法首先报道用于检渊黑色素癌组织的浸润　性Ｔ细胞和其他恶性肿癌和免疫性疾病的分析　，　对正常人外周血Ｔ细瞻的分析，未见较系统的研　究。分析８倒正常人外周血Ｔ细胞中、ｒ日亚家族Ｔ　细胞的分布情况，发现几乎所有、　亚家族Ｔ细胞　均存在于正常人外周血中，基因扫描提示各产物呈　多峰图象，即为多克隆性。在未受任何抗原刺激情况　维普资讯 http://www.cqvip.com

·５０·　４　下，正常人外周血Ｔ细胞应是来自各亚群，多克隆，　３　ＦｅｒｒａｄｉｎｉＬ，ＲｏｍａｎＲＳ，Ａ￣ｏｃａｒ　Ｊ　ａ／．Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　只有在特异性抗原刺激下，机体才产生特异针对性　ｔｈｅｈ埘】ａＩ　Ｔ　ｃｅＬＬ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　邝代ｇ　群煅－Ｉ．ｉ＆ｍ－　的克隆性Ｔ细胞。而Ｔ细胞株Ｍｏｈ一４和Ｊｕｒｋａｔ细　ｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　ａｄｄｉｔｉｎｎａｔⅥｓｕｂｆａｍｉｌｉｅｓ．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｉｒａ－　ｍＬＵＦＪ。ｌ，１９９１ｆ２１：９３５　胞为克隆性细胞，前者表达ｖ艘，后者表达ｖ＃８，基　４　Ｐｕｉｓｅｕｘ　Ｉ，Ｅｖｅｎ　Ｊ，Ｐａｎｎｅｔｉｓｒ　Ｃ　ｄ　ａ／．Ｏｌｉｇ。ｃ１ｏｎａ［ｉｔｙ　因扫描显示为单峰图象，即单克隆性。本研究分析２　ｏｆ　ｔｏｍｏｒ－Ｌｒｄｉｌｔｒａｔｉｎｇ　ｌｙｍｐｈｏｅｙｔｅｓ　ｆｒｏｍ　ｈａｍａｎ　例Ｔ＿ＡＬＬ的结果显示均存在克隆性生长的Ｔ细　ｍｅｌａｎｏｍａｓ．Ｊ　Ｉｍｍｕｎｄ，１６９４｝ｌ５３：２８ｏ７　５　ＴｏｙｏｎａｇａＢ．ＹｏｓｈｉｋａｉＹ．ＶａｄａｓｚＶ　ａ／．Ｏｒｇａｎｉｚ－　胞，例ｌ有３个、　亚家族（ｖｆｌ８、、　９和ＶｆｌＺ１）的克　ａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｊｏｉｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｏｎ－　隆性Ｔ细胞，是否均为白血病克隆，有待进一步分　ｓｔａｎｔ　ｒｅｇｉｏｎ　ｇｅｎｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｕｍａｎ　Ｔ－ｃｅｌｌ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｂ　析。　ｃｈａｉｎ．Ｐｒｏｃ　ＮａｔＩ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，１９８５｝Ｂ２：８６２４　６　ＰａｎｎｅｒｉｅｒＣ．ＣｏｃｈｅｒＭ，Ｄａｒｃｈｅ　Ｓ　ａ／．ｍ　ｓｉｚｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＣＤＲ３　ｈｙｐｅｒｖ￣ｉａｂｌｅ　ｒｅｇｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｏｕｔｉｎｅ　Ｔ￣：ｅｌｌ　４参考文献　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｂｃｈａｉｎｓ　ｖａｒｙ　ａｓ　ａｆｕｒ￣ｉｏｃ。ｆｔｈｅ　Ｆ￣ｃｏｍｂｉｎｅｄ　１　Ｊｃｅｇｅｎｓｅｎ　Ｊ　Ｌ，ＥｓｓｅｒＵ，ＧｒｏｔｈＢＦ　ａ／．Ｍ８ｐｐ　ｇｅｎｎ－ｌ￣ｍｅ　ｓｅｇｍｅｎｔｓ．Ｆｒｅｅ　ＮａｔＩ　Ａｃ丑ｄ　ｓｃｉ　ＵＳＡ，１９９３１　Ｔ￣：ｅＬＩ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ—ｐｅｐｔｉｄｅ　ｏｏｎ￣ｃｔｓ　ｂｙ　ｐｅｐｔｉｄｅ　９０：４３１９　ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｎｏ　ｏｆ　ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈｉｎ　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｓ．Ｎａｔｕｒｅ，　７　Ｌｉｍ　Ａ，　ｒｏｕｈｅｒｔ　Ａ，Ｐａｎｎｅｔｉｓｒ　Ｃ　ａ／．Ｓ９ｒｅａｄ　ｏｆ　１９９２ｆ８５５：２２４　ｃｌｏｎａｌ　Ｔ－ｃｅｌＩ　ｅｘｐａｎｓｉｏｎｓ　ｉｎ　ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ｎａ—　２　ＷｉＩ自口ｎＲＫ，Ｌ　Ｐ，Ｃｂｎｃａｎ舭Ｒｄ　．Ｓｔｒｕｃｔｍ　ｏｒ￣　ｔｉｅ￣ｔｓ．Ｈｕｍａｎ　Ｊ２ｎｍｔｍｏＩ，１９９６１４８：７７　ｇ｜ｎ　ｔ＿啪ａｎｄ　ｐ￣ｌｙｍｍ－ｐｈｉｓｍ　ｏｆｒｏｕｔｉｎｅａｎｄ　ｈｕｒＩ衄４　ａｎｄ　ｐ　ｃｈａｉｉ１　ｈｒｅｉｆｌｉ￣．Ｉｍｍｕｎｏｌ　Ｒ　，１９８８，１０１：　［收祷１９９７—０７—１２修回１９９７－１０－１０３　１４９　（编辑李实）　Ｔ　ＣＥＬＬ　ＣＬ０ＮＡＬＩＴＹ　ＩＤＥＴＩＦＩＣＡＴＩｏＮ　ＵＳＩＮＧ　ＧＥＮＥＳＣＡＮ　ＢＹ　ＣＤＲ３　ＳＩＺＥ　ＯＦ　Ｔ　ＣＥＬＬ　ＲＥＣＥＰＴＯＲ邗ＧＥＮＥ　厶Ｙａｎｇｑｉｕ，ＷａｎｇＭｉｎｇｃｈｕｎ．ＤｅｐａｒｔｍｅｒｔｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｙ，ＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＪｉｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉ－　ｔｙ，Ｃｃａａｎｇｚｈｏｕ　５１０６３２　Ｗｕ　Ｋ　＾Ｍ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｒｔ　ｏｆＢｉｏｌｏｇｙ＆Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｈａｎｔｏｕ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｓｈａｎｔｏｕ　５１５０４１　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｃ｜ｏｎａｌｉｔｙ　ａｎｄ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＴＣＲ）　ｓｕｂｆａｍｉ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｏｆ　ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄ　Ｔ．ＡＬＬ　ｃａｓｅｓ　ｏｒ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ　Ｍｏｌｔ一４　ａｎｄ　Ｊｕｒｋａｔ　ｃｅｌｌｓ　Ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｔｈｅ　ｃｏｒｎ－　ｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｒｅｇｉｏｎ　３（ＣＤＲ３）ｏｆ　ＴＣＲ　２４　ＶＢ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　ｇｅｎｅｓ　ｗａｓ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｅｄ　ｕｓｉｇｎ　ＲＴ－ＰＣＲ，ｔｈｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｗｅｒｅ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ｇｅｎｅｓｃａｎ　ａｎｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｇｎ　ａｎ８ｌｙｓｉｓ　ｆｏｒ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｃｌｏｎａｌｌｔｙ．Ｂｅｓｉｄｅｓ　ＶＢ２Ｏ，ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ａｌｌ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　ＴＣＲ　ｖ口　ｐｏｌｙｅｌｏｎａｌ　Ｔ　ｅｃｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｅａｓｅｓ．Ｂｕｔ　ｏｎｌｙ　ｓｏｍｅ　ｖＤ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ％　ｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　２　ｃａｓｅｓ　ｗｉｔｈ　Ｔ．ＡＬＬ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｏｌｉｇｏｃｌｏｎａｌ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｃｏｕｌｄ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　ｓｏｎｌｅ　ｓｕｂｆａｒｒＩｉｌｖ　０ｆ　ＴＣＲ　Ｖ口．Ｍｏｌｔ一４　ａｎｄ　Ｊｕｒｋａｔ　ｅｃｌｌｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｏｎｌｙ　ｖ口２　ｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　ａｎｄ　ｓｈｏｗｅｄ　ｒｌｌｏｎｏ－　ｃｌｏｎｅ　Ｔ　ｃｅｌＩ　ｉｎ　ＰＣＲ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｉｔ　ｉｓ　ａ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｅｘａｃｔ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ　ｉｄｅｎｔｉｆｙ　Ｔ　ｃｄｌ　ｃｌｏｎａｌｉｔｙ．　Ｔ　ｃｅｌＩ　ｃｌｏｎａｌ　ｅｘｐａｎｓｉｏｎ　ｍａｙ　ｂｅ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　Ｔ．ＡＬＬ　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　ＴＣＲ　Ｖｐ　ｇｅｎｅ　Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｒｅｇｉｏｎ　３（ＣＤＲ３）　Ｇｅｎｅｓｃａｎ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｄｏｎａｌｉｔｙ　Ｌｅｕｋｅｍｉａ