中国康复理论与实践２０１４年３月第２０卷第３期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒｅｈａｂｉｌ Ｔｈｅｏｒｙ Ｐｒａｃｔ，Ｍａｒ．２０１３，Ｖｏ１．２０，Ｎｏ．３ ——２３３—— ＤＯＩ：ｉ０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６・９７７１．２０１４．０３．００９ ・基础研究・ 红景天对大鼠脑缺血再灌注ｃ．Ｆｏｓ表达及神经细胞凋亡的影响 陈江君，刘宁， 【摘要Ｊ 目的探讨红景天对大鼠脑缺血再灌注后脑组织中ｃ—Ｆｏｓ表达水平及神经细胞凋亡的影响。方法Ｗｉｓｔａｒ大鼠１２０只， 分为假手术组、模型组和干预组（红景天），各组再分为３ ｈ、６ ｈ、１２ ｈ、２４ ｈ、４８ ｈ共５个亚组，每个亚组８只大鼠。后两组采用大 脑中动脉线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型，干预组术前红景天每天０．６７２ ｅＣｋｇ灌胃１５ ｄ。参考Ｌｏｎｇａ法在大鼠麻醉清醒后进行 评分，应用免疫组化、ＴＵＮＥＬ法检测各组ｃ—Ｆｏｓ表达及神经细胞凋亡。结果分下降（Ｐ＜Ｏ．０５）。结论模型组和干预组缺血脑组织中ｃ．Ｆｏｓ表达明显增加 （尸＜０．０１），于再灌注４８ ｈ达高峰；与模型组相比，干预组ｃ—Ｆｏｓ表达减少（Ｐ＜０．０５），神经元凋亡明显减少（Ｐ＜０．Ｏ１），神经功能缺损评 红景天能抑制大鼠脑缺血再灌注后脑组织中ｃ．Ｆｏｓ表达，减少神经元凋亡，减轻缺血再灌注损伤。 Ｉ关键词ｌ红景天；缺血再灌注；ｃ．Ｆｏｓ；神经元；凋亡 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｒｈｏｄｉｏｌａ ｏｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃ－Ｆｏｓ ａｎｄ Ｎｅｕｒｏｎａｌ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｆｔｅｒ Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｉｓｃｈｅｍｉａ／Ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ Ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ Ｒａｔｓ ＣＨＥＮ Ｊｉ— ａｎｇ－ｊｕｎ，ＬＩＵＮｉｎｇ，ＣＨＥＮＪｕｎ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙ，Ｆｉｒｓｔ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＬａｎｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００００，Ｇａｎｓｕ Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｒｈｏｄｉｏｌａ Ｒｏｓａｅ Ｐ Ｅ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃ—Ｆｏｓ ａｎｄ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｉｎ ｒａｔ ｂｒａｉｎ ａｆｔｅｒ ｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ（Ｉ／Ｒ）ｉｎｊｕｒｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １ ２０ Ｗｉｓｔａｒ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｓｈａｍ ｇｒｏｕｐ，ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ， ｓｕｂｇｒｏｕｐｅｄ ａｓ ３ ｈ，６ ｈ，１ ２ ｈ，２４ ｈ，ａｎｄ ４８ ｈ．Ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐｓ ｕｎｄｅｒｗｅｎｔ ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ，ａｎｄ ｔｈｅ ｌａｔｔｅｒ ａｃｃｅｐｔｅｄ Ｒｈｏｄｉｏｌａ ０．６７２ ｇ／ｋｇ ｄａｉｌｙ ｆｏｒ １ ５ ｄ．Ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ ａｓｓｅｓｓｅｄ ｗｉｔｈ Ｌｏｎｇａ’Ｓ ｓｃｏｒｅ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃ—Ｆｏｓ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｎｄ ＴＵＮＥＬ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｃ—Ｆｏｓ ｉｎ ｔｈｅ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ａｒｅａ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｆｔｅｒ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈ— ｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ（Ｐ＜０．０１），ｐｅａｋｉｎｇ ａｔ ２４ ｈ ａｆｔｅｒ ｉｎｊｕｒｙ，ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ（尸＜０．０１），ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｏｆｎｅｕｒｏｎ印ｏｐ— ｔｏｓｉｓ ａｎｄ Ｌｏｎｇａ’Ｓ ｓｃｏｒｅ ｆＰ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｒｈｏｄｉｏｌａ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ａｇａｉｎｓｔ ｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓ－ ｓｉｏｎ ｏｆ ｃ・Ｆｏｓ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｒａｔｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｒｈｏｄｉｏｌａ；ｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ；ｃ—Ｆｏｓ；ｎｅｕｒｏｎ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ 【中图分类号Ｊ Ｒ７４３．３ ｌ文献标识码ｌ Ａ ｌ文章编号ｌ １００６—９７７１（２０１４）０３－０２３３—０３ Ｉ本文著录格式ｌ陈江君，刘宁，．红景天对大鼠脑缺血再灌注ｃ．Ｆｏｓ表达及神经细胞凋亡的影响［Ｊ］．中国康复理论与实 践，２０１４，２０（３）：２３３—２３５． 缺血性脑血管病是神经系统常见病、多发病，死 亡率、致残率高，严重影响人民群众的生命安全及生 活质量ｕ 。脑缺血后恢复脑血流是治疗脑缺血最关键 １材料与方法 １．１材料 １．１．１实验动物３～４月龄健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠１２０ 的方法，但再灌注后可加重缺血脑组织的损伤。这种 损伤以凋亡为主，减少缺血再灌注后神经元凋亡为重 要的脑保护机制。 ｃ—Ｆｏｓ与细胞凋亡的关系争议较多 。 。实验研究 只，体重２２０～２５０ ｇ，由兰州大学动物实验中心提供。 １．１．２试剂 红景天：诺迪康药业股份有限公司， 批号：Ｚ１０９８００２０。ｃ—Ｆｏｓ单克隆抗体、ＳＡＢＣ免疫组 化试剂盒、ＤＡＢ显色试剂盒、多聚赖氨酸及凋亡检 测试剂盒：南京中杉生物工程有限公司。 １．２方法 显示，长期应用红景天（Ｒｈｏｄｉｏｌａ Ｒｏｓａｅ Ｐ目对脑缺血 再灌注具有一定的保护作用。本研究拟从蛋白水平观 察大鼠缺血再灌注后海马组织ｃ—Ｆｏｓ表达水平与神经 细胞凋亡关系，并阐释红景天脑保护作用的部分机 制 １．２．１动物分组大鼠分为假手术组、模型组和干预 组，各组再分为３ ｈ、６ ｈ、１２ ｈ、２４ ｈ和４８ ｈ共５个亚 组，每个亚组８只。干预组术前予红景天每天０．６７２ ｇ／ 灌胃１５ ｄ，假手术组、模型组每天予等量生理盐水 基金项目：甘肃省自然科学基金项目（Ｎｏ．１１０７Ｒ３ＹＡ０７２）。 作者单位：兰州大学第一医院神经内科，甘肃兰州市７３００００。作者简介：陈江君（１９７８一），男，汉族，甘肃兰州市人，主治医师，主要从事神 经内科脑血管病工作。 ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｊｒｔｐ０ｎｌｉｎｅ．ｃｏｒｎ —－２３４—— 中国康复理论与实践２０１４年３月第２Ｏ卷第３期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒｅｈａｂｉｌ Ｔｈｅｏｒｙ Ｐｒａｅｔ，Ｍａｒ．２０１３，Ｖｏ１．２０，Ｎｏ．３ 灌胃１５ ｄ。 ＡＮＯＶＡ），方差齐用Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ检验，方差不齐用 １．２．２动物模型制备１．３行为学评分 根据Ｌｏｎｇａ 的改良线栓法制备 Ｔａｍｈａｎｅ ｆ检验。显著性水平ａ＝０．０５。 ２结果 大鼠大脑中动脉闭塞（ＭＣＡＯ）２ ｈ后再灌注模型。 参考Ｌｏｎｇａ的５分法在大鼠麻醉清醒后进行评 ２．１行为学评分 分。０分：无神经损伤症状。１分：不能完全伸展对侧 前爪。２分：向对侧转圈。３分：向对侧倾倒。４分： 不能自发行走，意识丧失。 １．４ ｃ—Ｆｏｓ免疫组化染色 大鼠清醒后均出现轻重不等的神经功能缺损症 状；与模型组比较，干预组于术后各时间点均明显降 低 ０．０１）。见表１。 ２．２ ｃ．Ｆｏｓ免疫组化染色 假手术组见极少量阳性细胞；模型组再灌注３ ｈ 脑组织海马ＣＡ１区ｃ—Ｆｏｓ阳性细胞数增加，４８ ｈ达高 峰，７２ ｈ仍有表达（Ｐ＜０．０１）。干预组ｃ—Ｆｏｓ阳性细胞数 在缺血后各时间点均较模型组明显减少（Ｐ＜０．０１）。见 表２。 采用ＳＡＢＣ法，参照免疫组化试剂盒说明书操 作。ｃ．Ｆｏｓ蛋白阳性细胞为胞浆和胞核着色呈棕黄 色。每张切片选择缺血灶周围６个不连续的高倍视野 （４００￣），计数阳性细胞数，取平均值。 １．５ ＴＵＮＥＬ法检测 石蜡包埋大鼠脑组织块，海马平面连续冠状切 ２．３神经元凋亡数 假手术组海马ＣＡ１区有少量凋亡细胞。模型组再 灌注３ ｈ后，ＣＡ１区凋亡细胞数明显增多，４８ ｈ最多 （尸＜Ｏ．０１）。干预组细胞凋亡数明显减少（尸＿＜０．０１）。见表 ３ 片，厚４ ｐ．ｍ。试剂盒染色，光镜观察凋亡细胞数。 １．６统计学分析 采用ＳＰＳＳ １３．０统计软件进行处理。结果用 ± 表示。各组比较采用单因素方差分析方法（Ｏｎｅｗａｙ． 表１各组行为学评分比较 注：ａ：与假手术组比较，Ｐ＜０．０１；ｂ：与模型组比较。Ｐ＜０．０１ ３讨论 内外学者共同关心的课题。脑组织海马ＣＡ１区对脑缺 脑血管病是人类死亡的三大杀手之一，其中７０％ 为脑梗死。寻找对脑梗死有效的治疗途径，是目前国 血最为敏感，即使短暂的脑缺血也可造成延迟性神经 元死亡（ＤＮＤ），ＤＮＤ主要机制为细胞凋亡。 中国康复理论与实践２０１４年３月第２Ｏ卷第３期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒｅｈａｂｉｌ Ｔｈｅｏｒｙ Ｐｒａｃｔ，Ｍａｒ．２０１３，Ｖｏ１．２０，Ｎｏ．３ ——２３５—— 细胞凋亡是缺血后脑细胞丢失的一种形式。凋亡 调节基因如ｂｃｌ一２、ｂａｘ可能在脑细胞凋亡过程中起重 稳定动脉粥样硬化斑块的作用。本研究结果显示，大 鼠脑组织缺血再灌注３ ｈ后，Ｃ－Ｆｏｓ蛋白表达增加，同 时ＣＡ１区凋亡神经元数量增加。提示ｃ－Ｆｏｓ在神经元 中的出现是凋亡发生的信号。 ［参考文献］ ［１］蔡紫峰，杨卓．脑缺血损伤的研究进展［Ｊ］．继续医学教育， ２００４，１８（４）：５３—５５． 要作用；此外，兴奋性氨基酸如谷氨酸、Ｃａ 、自由 基、血小板凝集因子（ＰＡＦ）等亦参与凋亡过程 】。 Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋａｒ等注意到，在缺血过程中，ｃ—ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ 等基因较早表达 ；ｃ ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ家族基因产物通过亮 氨酸拉链形成可结合至核因子．ｒ，ＢｆＮＦ．ｒ＿Ｂ）、激活蛋白一 １（ＡＰ．１ 等转录因子位点的异二聚体，从而选择性 迟发性基因的表达。 ［２］Ｋｏｅｎｎｅｃｋｅ ＨＣ．Ｅｄｉｔｏｒｉａｌ ｃｏｍｍｅｎｔ－ｃｈａｌｌｅｎｇｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｐｔ ｏｆ ａｄｙｎａｍｉｃ ｐｅｎｕｍｂｒａ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｓｔｒｏｋｅ［Ｊ］．Ｓｔｒｏｋｅ， ２００３，３４（１ ｏ）：２４－３４． ［３】Ｎａｇａｓａｗａ Ｈ，Ｋｏｇｕｒｅ Ｋ．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｌｆｏｗ ａｎｄ ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ａ ｎｅｗ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅ． ｃ．１ｏｓ原癌基因研究始于２０世纪８０年代中后期， 因与小鼠成骨肉瘤中致癌基因ｖ—ｌｏｓ同源，故称为ｃ— ｌｏｓ原癌基因 ］，它属于即刻早期基因。一般情况下， ｃ—ｌｏｓ基因在许多组织低水平表达，可能与ＤＮＡ损伤 及修复相关，具有神经保护作用，与细胞的生长、繁 ｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｓ￣ｏｋｅ，１９８９，２Ｏ（８）：１０３７—１０４３． ［４］Ｌｏｎｇａ ＥＺ，Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ ＰＲ，Ｃａｒｌｓｏｎ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａ￣ｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ ｗｉｔｈｏｕｔ ｃｒａｎｉｅｃｔｏｍｙ ｉｎ ｒａｔｓ［Ｊ］． Ｓｔｒｏｋｅ，１９８９，２０（１）：８４—９１． ［５］Ｅｓｐｉｎｏｚａ ＭＩ，Ｐａｒｅｒ ＪＴ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ａｓｐｈｙｘｉａｌ ｂｒａｉｎ ｄａｍ— 殖、分化、信息传递、学习和记忆等众多生理功能有 关；当受到外界如缺血、缺氧等刺激时，表达水平会 有显著改变 ，可出现过度表达，其产物Ｆｏｓ蛋白由胞 质转入核内，与ｃ—ｊｕｎ基因的产物Ｊｕｎ蛋白形成Ｆｏｓ— Ｊｕｎ异源二聚体，作用于ＤＮＡ的特殊序列，调节相关 基因转录，发挥第三信使的作用，进而干预细胞核的 修复，导致细胞凋亡［９１。也有研究表明，ｃ。ｆｏｓ基因的 表达能抑制脑缺血后神经元死亡或凋亡的程度，ｃ．ｆｏｓ 基因表达越高，相应的脑组织损伤越轻ｎ 。 ａｇｅ，ａｎｄ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ，ｉｎ ｔｈｅ ｆｅｔｕｓ［Ｊ］． Ａｍ Ｊ Ｏｂｓｔｅｔ Ｏｙｎｅｃｏｌ，２００５，１ ６４１：６）：１ ５８２－１ ５８９． ［６］Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋａｒ Ｂ，Ｍｕｍｍｉｄｉ Ｓ，Ｍａｈｉｍａｉｎａｔｈａｎ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｔｅｒｌｅｕ— ｋｉｎ－－１ ８・・ｉｎｄｕｃｅｄ ｈｕｍａｎ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ ｍｉ—・ ｇｒａｔｉｏｎ ｉｓ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎ ｃ－ｆｏｓ ａｎｄ ＡＰ－１一ｍｅｄｉａｔｅｄ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌ— ｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ一９ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｓ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｂｙ ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００６，２８１（２２）：１５０９９—１５１０９． 【７］Ｍｏｒｇａｎ Ｊ１，Ｃｕｒｒａｎ Ｔ．Ｓｔｉｍｕｌｕｓｒｔｎｓａｃｒｉｐｔｉｏｎ ｃｏｕｐｌｉｎｇ ｉｎ ｈｅｔ ｎｅｒ－ ＶＯＵＳ ｓｙｓｔｅｍ：ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｐｒｏｔｏｏｎｃｏｇｅｎｅｓ ｆｏｓ 红景天主要成分有红景天苷、多种黄酮和人体必 需的１８种氨基酸、多种微量元素。它通过黄酮类化合 物对血管壁的软化作用，以及血液流变学的改变实现 ｎｄｊｕｎ［ａＪ］＿Ａｎｎ ＲｅｖＮｅｕｒｏｓｃｉ，１９９１，１４：４２１—４５１． 【８］Ｒａｕ ＳＷ，Ｄｕｂａｌ ＤＢ，Ｂ６ｔｔｎｅｒ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｅｓｒｔａｄｉｏｌ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ 对脑血管的保护作用；其中黄酮及红景天苷能祛除血 液中过多的脂质成分和沉积在血管上的脂质，对过氧 ｒｅｇｕｌａｔｅｓ Ｃ—Ｆｏｓ ａｆｔｅｒ ｆｏｃａｌ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ［Ｊ］．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ， ２００３，２３（３３）：１０４８７—１０４９４． ［９］Ｓｃｈｂｉｔｚ ＷＲ，Ｓｃｈａｄｅ Ｈ，Ｈｅｉｌａｎｄ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ｈｙ— ｐｅｒｂａｒｉｃ ｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｆｏｃａｌ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈ－ 化脂质生成有明显抑制作用，具有抑制血小板聚集， 抗氧化应激及改善微循环等作用。以往的研究显示， 红景天可能通过多种途径，保护缺血脑组织、挽救缺 血半暗带，具有神经保护作用。 他汀类药物能通过调节ｃ．Ｆｏｓ等炎症介质的活 性，减轻动脉粥样硬化病变中的炎症反应，从而发挥 ｅｍｉａ ｍｏｎｉｔｏｒｅｄ ｂｙ ＭＲＪ［Ｊ］．Ｓｔｒｏｋｅ，２００４，３５（５）：１ １ ７５—１ １ ７９． ［１０］Ｗｈｉｔｉｆｅｌｄ Ｊ，Ｎｅａｍｅ ＳＪ，Ｐａｑｕｅｔ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｄｏｍｉｎａｎｔ・ｎｅｇ￣ｉｖｅ Ｃ— Ｊｕｎ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｂｙ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ＢＩＭ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｃｙｔｏｃｈｒｃｍｅｃ ｒｅｌｅａｓｅ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｎ， ２００１，２９（３）：６２９－６４３． （收稿日期：２０１３—０７．１５ 修回日期：２０１３．０９．１１） ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｊｒｔｐｏｎｌｉｎｅ．ｃｏｒｎ
