不同品种猪背最长肌eIF4E、PPARGC-1、VEGFA和C-Jun mRNA丰度比较研究

１　Ｃ　Ｔ　●　１１８ＲＩＣＵＬＴＵＲＡＥ　Ｂ１１ＲＥＡｔｌ－ＳＨＩｃＩ　华北农学报・２０１０，２５（增刊）：２５　８—２６２　不同品种猪背最长肌ｅｌＦ４Ｅ、ＰＰＡＲＧＣ．Ｊ７、ＶＥＧＦＡ　和Ｃ—Ｊｕｎ　ｍＲＮＡ丰度比较研究　杨　舟，王修启　（华南农业大学动物科学学院，广东广州５１０６４２）　摘要：为了研究ｍＴＯＲ通路及其相关联途径上与蛋白质合成有关的ｅｌＦ４Ｅ、与能量代谢有关的ＰＰＡＲＧＣ．Ｊ、与血管　形成有关的ＶＥＧＦＡ、与细胞增殖有关的Ｃ—Ｊｕｎ　４个基因在不同品种猪背最长肌中的表达丰度，选用上市体重的长白　猪、地方猪种蓝塘猪和大花白猪各８头作为动物模型，以管家基因ＧＡＰＤＨ作为内标，采用Ｒｅａ１．ｔｉｍｅ　ＲＴ．ＰＣＲ方法，比　较这些品种猪的背最长肌中目的基因ｍＲＮＡ表达丰度。结果表明：大花白猪背肌ｅｌＦ４Ｅ　ｍＲＮＡ的表达量显著高于蓝　塘猪和长白猪（Ｐ＜０．０５），其在蓝塘猪背肌的表达量高于长白猪但差异不显著（Ｐ＞０．０５）；蓝塘猪背肌ＰＰＡＲＣ．Ｃ．　ｍＲＮＡ的表达水平显著高于大花白猪（Ｐ＜０．０５），与长白猪相比差异不显著（Ｐ＞０．０５），长白猪与大花白猪相比无显　著差异（尸＞０．０５）；ＶＥＧＦＡ和Ｃ—Ｊｕｎ　ｍＲＮＡ在蓝塘、长白、大花白猪背肌中的表达没有差异（Ｐ＞０．０５）。以上结果提　示，ｅｌＦ４Ｅ和ＰＰＡＲＧＣ１基因的差异表达可能与不同猪品种间肌肉性状和肉质差异密切相关。　关键词：猪；背最长肌；ｅｌＦ４Ｅ；ＰＰＡＲＧＣ—Ｊ；ＶＥＧＦＡ：ｃ—Ｊｕｎ　中图分类号：ｓ８２８妫Ｉ标识码：Ａ　文章编号：１０００—７０９１（２０１０）增刊一０２５８—０５　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｅＩＦ４Ｅ，ＰＰＡＲＧＣ—ｌ，ｖＥＧＦＡ　ａｎｄ　Ｃ－Ｊｕｎ　Ｇｅｎｅ　ｍＲＮＡ　Ａｂｕｎｄａｎｃｅ　ｏｆ　Ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ　Ｄｏｒｓｉ　Ｍｕｓｃｌｅ　ｉｎ　Ｄｉｆｅｒｅｎｔ　Ｄｏｍｅｓｔｉｃ　Ｐｉｇｓ（Ｓｕｓ　ｓｃｒｏｆａ）　ＹＡＮＧ　Ｚｈｏｕ，ＷＡＮＧ　Ｘｉｕ—ｑｉ　（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｏｕｔｈ　Ｃｈｉｎａ　Ａ　ｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５　１０６４２，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｗａｓ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ　ｔｏ　ｃｏｍｐａｒｅ　ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ａｂｕｎｄａｎｔ　ｏｆ　ｅｌＦ４Ｅ，ＰＰＡＲＧＣ。１，ＶＥＧＦＡ　ａｎｄ　Ｃ—Ｊｕｎ　ｇｅｎｅ　ｏｆ　ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ　ｄｏｒｓｉ　ｍｕｓｃｌｅ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｄｏｍｅｓｔｉｃ　ｐｉｇｓ．Ｔｈｏｓｅ　ｇｅｎｅｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，　ｅｎｅｒｇｙ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｅｌｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｗｅｒｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｍＴＯＲ　ｐａｔｈｗａｙ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｐａｔｈ—　ｗａｙｓ，ｔｈｅｎ　ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＲＴ—ＰＣＲ　ｗａｓ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　ｃｏｍｐａｒｅ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｉｆｃ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅｉｒ　ｍＲＮＡ　ｏｆ　ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ　ｄｏｒｓｉ　ｍｕｓｃｌｅ　ｉｎ　Ｌａｎｔａｎｇ，Ｌａｎｄｒａｃｅ　ａｎｄ　Ｌａｒｇｅ　Ｗｈｉｔｅ—ａｎｄ—Ｂｌａｃｋ　ａｔ　ｔｈｅ　ｍａｒｋｅｔｉｎｇ　ａｇｅ．Ｉｔ　ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｔｈａｔ：Ｌａｒｇｅ　Ｗｈｉｔｅ—ａｎｄ—　Ｂｌａｃｋ　ｓｈｏｗｅｄ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ｅｌＦ４Ｅ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ　ｄｏｒｓｉ　ｍｕｓｃｌｅ，ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｏｔｈｅｒ　ｂｒｅｅｄｓ．Ｔｈｅ　ｅｌＦ４Ｅ　ｍＲＮＡ　ａｂｕｎｄａｎｔ　ｏｆ　ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ　ｄｏｒ￣ｉ　ｍｕｓｃｌｅ　ｉｎ　Ｉ＿ａｎｔａｎｇ　ｗａｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　Ｌａｎｄｒａｃｅ，ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｗａｓ　ｎｏｔ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ（Ｐ＞０．０５）；ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ＰＰＡＲＧＣ—Ｊ　ｍＲＮＡ　ｏｆ　ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ　ｄｏｒｓｉ　ｍｕｓｃｌｅ　ｉｎ　Ｌａｎｔａｎｇ　ｗａｓ　ｓｉｎｇｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｈｔａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　Ｌａｒｇｅ　ｈＷｉｔｅ—ａｎｄ—Ｂｌａｃｋ（Ｐ＜Ｏ．０５），ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ａｌｓｏ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｈｔａｔ　ｉｎ　Ｌａｎｄｒａｅｅ　ｉｎｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ（Ｐ＞０．０５），ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌ　ｉｎ￣ｎｄｒａｃｅ　ｗａｓ　ｈｉｈｇｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　Ｌａｒｇｅ　Ｗｈｉｔｅ－　ｎａｄ—Ｂｌａｃｋ（Ｐ＞０．０５）；ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｐａｔｔｅｒｎ　ｏｆ　ＶＥＧＦＡ　ａｎｄ　Ｃ．且孔ｍＲＮＡ　ｗｅｒｅ　ｓｅｅｍｅｄ　ｔｏ　ｂｅ　ｎｏｔ　ｓｉｎｇｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｄｉｆｅｒ－　ｅｎｔ　ａｍｏｎｇ　ｔｈｅｓｅ　ｔｈｒｅｅ　ｂｒｅｅｄｓ（Ｐ＞０．０５）．Ｔｈｅ　ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｅｌＦ４Ｅ　ａｎｄ　ＰＰＡＲＧＣ．』ｍａｙ　ｌｅａｄ　ｔｏ　ｓａｒｃｏｕｓ　ｔｒａｉｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ａｍｏｎｇ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｄｏｍｅｓｔｉｃ　ｐｉｇｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｐｉｇ；Ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ　ｄｏｒｓｉ　ｍｕｓｃｌｅ；ｅｌＦ４Ｅ；ＰＰＡＲＧＣ—　；ＶＥＧＦＡ；Ｃ—Ｊｕｎ　近年来，哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（Ｍａｍｍａｌｉａｎ　水平变化以及生长因子等信号，整合细胞内与合成　ｔａｒｇｅｔ　ｏｆ　ｒａｐａｍｙｃｉｎ，ｍＴＯＲ）越来越受到研究人员的　代谢相关的通路信号，通过激活其下游效应蛋白和　关注。ｍＴＯＲ可以感受细胞外营养成分含量、能量　信号分子，参与细胞增殖分化、能量平衡、蛋白质合　翟：　Ｆ　东－２省１人民政府联合基金（蓍蓄　ｕ０７３１：　ｏｏ４）；国家重点基础研究发展计划项目（恸　删　叫ｕ２ｏｏ９ｃＢ９４１６０１）　通讯作者：翥　挈修　１王修启（　一９６。８　：　），男，河南人，霉　研究员，蛋　圭＿博士后，璺　主要从事动物分于营乔与饲科　删刑计咒。与饲料添加剂研究。　———　———．．————　———．．．———．．．——．．．．——．．．——．．．．．．．．．—．．．．—－－———－————－－———————－———－—————————－———－—————————－——一－　Ｂ　Ｔ　●　增刊　！至璺苎　竺　墨苎　兰　：竺！　：！：　！　１　料　竺　±　竺至查　青　　一　。！：３　ＬＴ龋髂　成等机体代谢过程的调节。　真核细胞翻译起始因子（Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ　ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ　ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ　４Ｅ，ｅＩＦ４Ｅ）在蛋白质翻译起始过程中　异，分析其与营养物质沉积之间可能的内在联系。　发挥重要作用。ｍＴＯＲ可直接使４Ｅ—ＢＰ１磷酸化，进　而解离出ｅｌＦ４Ｅ，游离的ｅＩＦ４Ｅ结合到ｍＲＮＡ　５端帽　１．１试剂及仪器　Ｉ．１．Ｉ　试剂Ｔｒｉｚｏｌ、ＤＮａｓｅ　Ｉ、Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉ・　子结构，进而促进翻译…。过氧化物酶体增殖物激活受体　辅激活因子　（ＰＰＡＲ—ｇａｍｍａ　ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ　１，　ＰＧＣ一１　、ＰＧＣ．１、ＰＰＡＲＧＣ，１）可以介导目的基因的转　录激活，从而参与骨骼肌纤维类型决定［２　；其还可　以通过ｉｎｓｕｌｉｎ信号对ｍＴＯＲ信号通路作用，影响机　ｔｏｒ、ＲＮａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ：ＴａＫａＲａ公司。Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合　酶、ｄＮＴＰ：Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司。反转录酶（Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｔｒａｎ’　ｓｃｒｉｐｔａｓｅ　ＸＬ，ＭＭＬＶ）：Ｐｍｍｅｇａ公司。Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ试剂盒：ＴＯＹＯＢ０公司。　１．１．２仪器．　梯度基因扩增仪：型号为ＰＴＣ２００，美　体的生物合成；研究还发现ｍＴＯＲ下游靶蛋白Ｓ６ＫＩ　可以调控ＰＰＡＲＧＣ一１的表达，从而增加线粒体生物　合成和机体能量代谢，改善胰岛素抗性　Ｊ。ＶＥＧＦＡ　国枷公司。实时荧光定量ＰＣＲ仪：型号为　Ｍｘ３０００Ｐ，美国Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ公司。　１．２试验方法　是ｍＴＯＲ下游的血管内皮生长因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔ　ｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔ　ｈ　ｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）转录剪接时形成的两种　异构体之一ｌ４．５］，激活后能促发血管形成，抑制细胞　凋亡　；通过ｍＴＯＲ—ＨＩＦ一１ＯＬ－ＶＥＧＦ可以影响肝、胰、　肺、骨髓和卵巢的癌细胞增殖＂　；目前尚未有肌肉　１．２．１样品的采集选取上市体重的长白、蓝塘、　大花白三个品种猪各８头。屠宰后，取倒数第２，３　肋骨处背最长肌组织样，置液氮里速冻，一８Ｏ℃冷冻　保存。　１．２．２总ＲＮＡ提取采用Ｔｒｉｚｏｌ法分别抽提三个　组织中ｍＴＯＲ和ＶＥＧＦ作用的研究报道。转录因子　Ｃ—Ｊｕｎ属于ｍＴＯＲ上游的ＭＡＰＫ通路，通过磷酸化　品种猪的背最长肌总ＲＮＡ，紫外比色法测定总ＲＮＡ　的浓度和纯度（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ　ＢｉｏＰｈｏｔｏｍｅｔｅｒ　２６０　ｎｌｎ）。　Ｃ．Ｊｕｎ—Ｎ端激酶ＪＮＫ，调控细胞的增殖和分化－ｌ叫；最　新的研究指出ｍＴＯＲ可以增加ＪＮＫ通路在肌肉和　用１．４％甲醛变性琼脂糖凝胶电泳，根据２８　Ｓ　ｒＲＮＡ　和１８　Ｓ　ｒＲＮＡ的灰度比评价ＲＮＡ的质量。取适量　胰岛的应激反应…川，因此Ｃ—Ｊｕｎ的表达可能对肌　的ＲＮＡ提取液进行ＤＮＡ消化。　细胞生命活动有一定的影响。总之，ｍＴ０Ｒ经典途　径上关键基因的作用机制已经受到广泛关注，但是　与其相关的、涉及蛋白质、能量代谢以及组织生长发　育的基因研究较少。　本试验在ｍＴＯＲ通路及其相关联途径中，选取　１．２．３反转录１　ｇ总ＲＮＡ，３　随机引物（１Ｏ　ｍｍｏｌ／Ｌ），２．５　ｄＮＴＰ（１０　ｍｍｏｌ／Ｌ），１０　Ｕ　ＲＮＡ酶　抑制剂（ＲＮａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ），２００　Ｕ　ＭＭＬＶ　Ｒｔａｓｅ，４　ＭＭＬＶ　５×Ｂｕｆｆｅｒ（含２５０　ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｔｒｉｓ．ＨＣＩ，ｐＨ　８．３；　１５　ｍｍｏＬ／Ｌ　ＭｇＣＩ　；３７５　ｍｍｏｌ／Ｌ　ＫＣｌ；５０　ｍｍｏｌ／Ｌ　与蛋白质合成有关的ｅｌＦ４Ｅ、与能量代谢有关的ＰＰＡＲＧＣ—　、与血管形成有关的ＶＥＧＦＡ、与细胞增殖　有关的Ｃ—Ｊｕｎ　４个基因，选用生长速度慢但肉质较　好的中国地方品种蓝塘猪、大花白猪和生长速度快　的外来品种长白猪作为试验动物，通过Ｒｅａ１．ｉｔｍｅ　ＲＴ－ＰＣＲ检测不同品种背最长肌目的基因的表达丰度，探讨肌肉中目的基因ｍＲＮＡ丰度的品种问差　ＤＴＦ），反应总体系２Ｏ　Ｌ。先加ＲＮＡ模板和随机引　物在反转录前７０℃变性５　ｍｉｎ，冰上放置５　ｍｉｎ，再　加入其余试剂，混匀后于３７￣Ｃ反应９０　ｍｉｎ，８０￣Ｃ变　性５　ｍｉｎ。反转录产物一２ＯｃＩ＝保存备用。　１．２．４　引物设计　实时定量ＲＴ—ＰＣＲ引物采用　Ｐｒｉｍｅｒ　Ｐｒｅｍｉｅｒ　５．０设计，由上海生物工程技术服务　有限公司合成，引物序列及参数见表１。　表１　ｅｌＦ４Ｅ、ＰＰＡＲＧＣ．１、ＶＥＧＦＡ、Ｃ－Ｊｕｎ和ＧＡＰＤＨ基因引物参数　Ｔａｂ．１　Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｏｆ　ｐｒｉｍｅｒ　ｐａｉｒｓ　ｆｏｒ　ｅｌＦ４Ｅ，ＰＰＡＲＧＣ．１，ＶＥＧＦＡ，Ｃ－Ｊｕｎ　ａｎｄ　ＧＡＰＤＨ　ｇｅｎｅ　基因　Ｇｅｎｅｓ　ｅｌＦ４Ｅ　引物序列　竺！！　！　Ｓ　５　－ＴＡＣＴＧ　兀’ＧＡＡＧＡＣ邢’ＧＣＧ．３　Ａ　５　一ＣＡＣＡＴＡＧＧＣＴＣＡＡＴＡＣＣＡＴＣ．３　位置　Ｐｏｓｉｉｏｎ　ｔ产物／ｂｐ　Ｐｒｏｄｕｃｔ　１７１—１９１　２３６—２５６　１０５　１０７　１１８　ｌ３８　１７０　ＰＰＡＲＧＣ．ｉ　陋Ｇ　Ｓ　５　・ＧＣＣ从ＣＣＡＡＧＡＴＡＡＣＣＣ一３　Ａ　５　一ＧＴＣＣＣＣＧＡＡＧＡＣＴＣＡＣＴ．３　Ｓ　５　一ＣＧＡＣＧ从ＧＧＴＣ１ＩＧＧＡＧＴＧ－３　Ａ　５　一下兀１Ｇ１＇ｒＧ　ＣＴＧＴＡＧＧＡＡＧ．３　Ｓ　５　－ＧＴＡＡＣＧＧＧＣＡＣＡＴＣＡＣＣ－３　Ｃ－Ｊｕｎ　Ｇ　ＰＤＨ　Ａ　５　一ＣＧＣＴＧＧＧＣＡＧＡＧＴＧＴＴ．３　Ｓ　５　一ＧＧＴＣＣＧＡＧＴＧＡＡＣＧＧＡＴＩ’ｒＧ．３，　Ａ　５　一ＣＣ　ｒ１’ＧＡＣＴＧＴＧＣＣＧＴＧＧ从Ｔ．３　●　Ｃ　－Ｔ　●。‘————　————————————————————————————————————－————————————————————————————————一　ＪｇＲＩｉｌＯＩ￣￣　ｃｕＬＡＬＩＴＳｉＵＲｅｌＨｉＣ●—－　２６０　—－－——　——－－－－－－．．．．．．．．．．．．．．．．．．　．．．．．　．．．．．．　．．．．．．．．．．．．．．．．—．．．．．．．　．华．．．．：—北—．．．农　：．——．学：．．　报２５卷　１．２．５　样品的实时荧光定量ＲＴ—ＰＣＲ检测　以　ＧＡＰＤＨ管家基因作为内标，对目的基因进行实时定　量ＲＴ—ＰＣＲ检测。１　ｉ．ｚＬ　ｅＤＮＡ模板，１　ｔｘＬ引物，１０　Ｌ　Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ，反应总体系２０　。　反应条件为：９５℃变性１　ｍｉｎ；９５℃变性１５　Ｓ，６２￣Ｃ退　火１５　ｓ，７２℃延伸４０　Ｓ，共３５个循环。６２℃收集荧　光信号。在确定各目的基因与ＧＡＰＤＨ基因扩增效　率接近的基础上，直接采用２’厶ｃ　法计算样品中各基　因ｍＲＮＡ表达丰度。　１．３数据处理　试验数据均采用ＳＰＳＳ１４．０统计软件进行单因　子方差分析（Ｏｎｅ—ｗａｙ　ＡＮＯＶＡ），以Ｄｕｎｃａｎ方法进　行多重比较。数值用平均数±标准误（Ｍｅａｎ　４－Ｓ．Ｅ）　表示，取Ｐ＜０．０５作为差异显著临界值。　２　结果与分析　２．１不同品种猪背最长肌ｅｌＦ４Ｅ　ｍＲＮＡ丰度比较　如图１所示，ｅｌＦ４Ｅ　ｍＲＮＡ在大花白猪背肌中　呦　啪　啷　咖　的表达显著高于蓝塘猪和长白猪（Ｐ＜０．０５），在蓝　塘猪的表达量高于长白猪但差异不显著（Ｐ＞　０．０５）。　Ｌｌｍ【ａｎｇ　Ｌａｎｔａｎｇ　Ｌａｒｇｅ　Ｗｈｉｔｅ－　ａｎｄ—Ｂｌａｃｋ　图上方标有相同字母者表示差异不显著（Ｐ＞０．０５）；标有不同字母　者表示差异显著（Ｐ＜０．０５）；Ｉ１＝８。下图同。　Ｔｈｅ　８Ⅲｅ　ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｄｅｎｏｔｅ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＞０．０５）；　Ｔｈｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｄｅｎｏｔｅ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０５）；ｎ＝８；Ｔｈｅ　ｉｆｇｕｒｅｓ　ｂｅｌｏｗ　ａｒｅ　Ｓａｍｅ．　图１三个品种猪的背肌中ｅｌＦ４Ｅ　ｍＲＮＡ表达　ｇ．１　ｅｌＦ４Ｅ　ｍＲＮＡ　ｌｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ　ｍｔｔ￣ｃｌｅ　ｏｆ　Ｌａｎｔａｎｇ，Ｌａｎｄｒａｃｅ　ａｎｄ　Ｌａｒｇｅ　Ｗｈｉｔｅ－ａｎｄ－Ｂｌａｃｋ　２。２不同品种猪背最长肌ＰＰＡＲＧＣ－１　ｍＲＮＡ丰度　比较　如图２所示，ＰＰＡＲＧＣ１　ｍＲＮＡ在蓝塘猪背肌中　的表达显著高于大花白猪（Ｐ＜０．０５），高于长白猪　但差异不显著（Ｐ＞０．０５），在长白猪的表达量高于　大花白猪但差异不显著（Ｐ＞０．０５）。　２．３　不同品种猪背最长肌ＶＥＧＦＡ和Ｃ－Ｊｕｎ　ｍＲ・　ＮＡ丰度比较　如图３，４所示，ＶＥＧＦＡ和Ｃ一几　ｍＲＮＡ在蓝塘、　长白、大花白猪背肌中的表达没有差异（Ｐ＞０．０５）。　ｍ　ｍ啪　．　．．．呦啪　．一　。●■一　蓝塘猪　长白猪　１．，ａｎｔｍａｇ　ｔａｎｓ　。图２三个品种猪的背肌中ＰＰＡＲＧＣ－Ｉ一大花自猪　Ｌ　１　ｍＲＮＡ表达　一　　一　Ｆｉｇ．２　ＰＰＡＲＧ￣Ｉ　ｍＲＮＡ　ｌｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｌｏｎｇｌｓｓｉｍｕｓ　ｍｕｓｃｌｅ　ｏｆ　Ｌａｎｔａｎｇ，Ｌａｎｄｒａｃｅ　ａｎｄ　Ｌａｒｇｅ　Ｗｈｉｔｅ－ａｎｄ－Ｂｌａｃｋ　０７０　丕　ｇ　Ｏ６Ｏ　’　●　『　ｌ　０５０　一　０４０　０３０　虿　目　Ｏ２０　暮　０ｌ０　｜Ｉ－Ｔｌ＿ｌＩＴ　虿目墨％ｙ。，ｖＮ１ｌ目　０　０　０　０　Ｏ　呦　啪　呦　啪　＿ＩＩｊ．１．　３　讨论　蓝塘猪和大花白猪是我国优良的地方品种，肉　质优良，但生长速度慢，脂肪含量高，其中蓝塘猪为　脂肪型，大花白为脂肉兼用型。长白猪是世界著名　的瘦肉型猪种，其背肌中脂肪含量与蓝塘猪相差甚　远，具有生长发育快，饲料转化率高，胴体瘦肉率高　等特点，但抗逆性差，对饲料营养要求高。研究表　明，外来品种和本地品种猪背最长肌肌纤维的差异　主要表现在９０日龄后ｌ１３］。达到出栏日龄时，肌肉　生长减慢而脂肪沉积加快，代谢状态和组织间物质　沉积速率改变。以出栏日龄的猪作为动物模型，对　肌肉组织中相应基因的表达量进行检测，利于对基　因表达的品种间差异与营养物质沉积之间的联系进　行比较。　一—————————————————————————————————————————————————————————————————————一●　Ｃ　Ｔ　●　增．于　Ｉ望　兰：至璺兰翌竺笪垦苎　：　兰：　兰竺！！：！：　！　！：　竺　±　苎！查　１　８３　船　蹁　定量分析结果显示ｅｌＦ４Ｅ　ｍＲＮＡ在大花白猪背　肌中的表达显著高于蓝塘猪和长白猪（Ｐ＜０．０５），　ｎ１ＴＯＲ来阻止ＶＥＧＦ在骨髓瘤细胞中的表达；相关　性分析也表明ｐ－ｍＴＯＲ和ＶＥＧＦ间存在统计学关　蓝塘猪高于长白猪但差异不显著（Ｐ＞０．０５）。结果　显示本地品种猪肌肉中的蛋白质合成活动比瘦肉型　猪活跃，这可能与本地猪生长发育慢有关系，同时也　反映出长白猪虽然生长发育较快，但是在出栏上市　时其肌肉中蛋白质合成不如地方品种猪。本地猪肌　肉内ｅＩＦ４Ｅ表达量高于瘦肉型猪，与此前的ｅＩＦ４Ｅ　联［５】。细胞内许多重要信号通路如ＭＡＰＫ（Ｍｉｔｏｇｅｎ—　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅｓ，促分裂素原活化蛋白激　酶）、Ａｋｔ、ＰＩ３Ｋ（Ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ　３－ｋｉｎａｓｅ，磷酸肌醇　３．激酶），都汇聚到ｍＴＯＲ来调控细胞活动，而近几　年来转录因子Ｃ—Ｊｕｎ在这些信号通路的研究中受到　密切关注；ＭＡＰＫ活化后即可进入细胞核，作用于　抑制物　ＥＢＰｌ（４Ｅ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　１，４Ｅ结合蛋　白１）缺失可导致脂肪聚集的研究结论¨　相一致。　而大花白猪肌肉中突出的高表达量，可能与其脂肉　兼用的肉质特性有关。　ＰＰＡＲＧＣ—　ｍＲＮＡ在蓝塘猪背肌中的表达显著　高于大花白猪Ｐ＜０．０５，高于长白猪但差异不显著。　由于ＰＰＡＲＧＣ．１一方面对骨骼肌中的葡萄糖酵解具　有控制作用，可以上调ＥＲＲｃ￣（Ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ—ｒｅ－　ｌａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ仪，雌激素受体相关受体　）来提高　ＰＤＫ４（Ｐｙｒｕｖａｔｅ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ　ｋｉｎａｓｅ　４，丙酮酸脱氢　酶激酶４）的表达，因此它可以通过暂时降低葡萄糖　的酵解作用来相应增加脂肪酸的氧化，还可以抑制　葡萄糖的氧化来增加肌肉中葡萄糖的吸收¨　，糖异　生促进脂肪形成。另一方面，ＰＰＡＲＧＣ一１通过钙调　素依赖型蛋白激酶途径（ＣａＭＫ）与生肌增强因子２　（Ｍｙｏｃｙｔｅ　ｅｎｈａｎｃｅｒ　ｆａｃｔｏｒ　２，ＭＥＦ２）作用¨　，而ＭＥＦ２　与肌肉调节因子（Ｍｕｓｃｌｅ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒｓ，ＭＲＦｓ）存　在重要的协同作用，影响到胚胎期肌肉纤维的生长　与分化和出生后肌肉的肥大过程　Ｊ，ＰＰＡＲＧＣ．１表　达增加可减少骨骼肌脂肪比重，增加有氧肌肉类型　和胰岛素敏感性＿】引。简而言之，ＰＰＡＲＧＣ一１一方面　增加骨骼肌糖原含量，一方面减少骨骼肌脂肪比重，　增加有氧肌肉类型。所以在脂肪型蓝塘猪和瘦肉型　长白猪背肌中的ＰＰＡＲＧＣ．１表达量都较高且差异不　显著，这个结果表明ＰＰＡＲＧＣ－１在调控肉品质的两　个方面都起着作用，对脂肪型和瘦肉型猪肌肉有截　然不同的两种调控途经，其中以增加糖原量促进脂　肪沉积作用更为突出。而大花白因为其脂肉兼用，　在ＰＰＡＲＧＣ一１所调控的两个方面并不突出，其背肌　中的ＰＰＡＲＧＣ一１表达量在三种猪中最低。ＰＰＡＲＧＣ一　１参与到诸多的代谢途径决定了它对肉品质会产生　巨大的影响，很多有关能量代谢和肉品质的问题还　有待进一步的探索和研究。　Ｂｒｕｇａｒｏｌａｓ等¨　提出ＴＳＣ２（Ｔｕｂｅｒｏｕｓ　ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　ｃｏｍｐｌｅｘ　２，结节性脑硬化复合物２）通过ｒｏＴＯＲ的依　赖性和非依赖途径来调节ＶＥＧＦ；Ｆｒｏｓｔ［９　研究指出　ＡＫＴ（Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　Ｂ，蛋白激酶Ｂ）通路通过负调控　Ｃ．Ｊｕｎ［加　；研究还发现Ｃ—Ｊｕｎ和ＰＴＥＮ呈负相关，并　由此影响Ａｋｔ通路　¨。本研究结果显示，三个品种　猪背肌中ＶＥＧＦＡ和Ｃ．Ｊｕｎ的表达没有差异。可能　是由于上市猪肌肉组织中血管发育和细胞增殖都已　比较稳定，因而背肌中这两个基因的表达都相对稳　定。此外，有关ｍＴＯＲ・ＨＩＦ１　Ｑ（Ｈｙｐｏｘｉａ　ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　ｆａｃ—　ｔｏｒ　ｌ　ｏ【，缺氧诱导因子１ＯＬ）一ＶＥＧＦＡ和Ｃ—Ｊｕｎ／ＪＮＫ－　ｍＴＯＲ作用机制的研究刚刚起步，有待于进一步的　深入研究。　综上所述，猪肌肉组织中ｅｌＦ４Ｅ和ＰＰＡＲＧＣ１基　因的差异表达可能与不同品种间肌肉性状差异密切　相关。但是，由于这些基因在营养调控过程中的作　用还未研究透彻，它们与ｍＴＯＲ作用关系的研究才　刚刚起步，而且利用实时定量ＰＣＲ只是在ｍＲＮＡ水　平上进行检测分析，所以还需要更多的检测指标和　进一步的研究来阐明一些品种问差异的机理。　参考文献：　［１］　ｃ　ｋｏｖｉｃ　Ｂ，Ｔｏｐｉｓｉｒｏｖｉｃ　Ｉ，Ｂｏｒｄｅｎ　Ｋ　Ｌ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ＲＮＡ　ｒｅｇｕｌｏｎｓ：ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｕｋａｒｙ・　ｏｔｉｃ　ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ　ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ　ｅｌＦ４Ｅ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ　Ｃｙｃｌｅ，　２００７，６（１）：６５—６９．　［２］金锋，孙亮，王沥．核辅激活因子ＰＧＣ－１作用分　子机制的研究进展［Ｊ］．遗传，２００５，２７（２）：３０２—３０８．　［３］　Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ　Ｊ　Ｔ，Ｒｏｄｇｅｒｓ　Ｊ　Ｔ，Ａｄｏｗ　Ｄ　Ｈ，ｅｔ　ｏ２．ｍＴＯＲ　ｃｏｎｔｒｏｌｓ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ａ　ＹＹ１．　ＰＧＣ－１　Ｍｐｈａ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ　ｃｏｍｐｌｅｘ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２００７，　４５０（７１７０）：７３６—７４０．　［４］Ｓｔｒｉｍｐａｋｏｓ　Ａ　ｓ，Ｋａｒａｐａｎａｇｉｏｔｏｕ　Ｅ　Ｍ，Ｓａｉｆ　Ｍ　Ｗ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆｍＴＯＲ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ　ｆｏ　ｓｏｌｉｄ　ｔｕｍｏｒｓ：Ａｎ　ＯＶ￣：ｒｏ　ｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　Ｒｅｖｉｅｗｓ，２００９，３５（２）：１４８—　１５９．　［５］Ｘｉａｎｇ　Ｈ　Ｇ，Ｈｕ　ｚ　Ｑ，Ｗａｎｇ　ｗ　Ｊ，ｅｔ　ｏ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆｐｈｏｓ．　ｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ　ｍａｍｍａｌｉａｎ　ｔａｒｇｅｔ　ｏｆ　ｒａｐａｍｙｃｉｎ　ｉｎ　ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ　ｃａｎｃｅｒ　ａｎｄ　ｉｔ　Ｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ［Ｄ］．Ａｃａｄ　Ｊ　Ｓｅｃ　Ｍｉｌ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ，２００９（３０）：５１７—５２０．　［６］　Ｅｎｔｒｅｚ　Ｇｅｎｅ：Ｖａｓｃｕｌ８１＂ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　Ａ．　［７］　Ｗａｎｇ　Ｙ，Ｚｈａｏ　Ｑ，Ｍａ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ｈｕｍａｎ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｂｙ　ａ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　华北农学报　２５卷　ｌｉｎｋｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　ｏｆ　ｍＴＯＲ／ＨＩＦ・１　ａｌｐｈａ／ＶＥＧＦ　ｓｉｇ—　ｎａｉｌｎｇ［Ｊ］．ＩＵＢＭＢ　Ｌｉｆｅ．２００７，５９（１１）：７１７—７２１．　［８］　Ｍｉｙａｚａｗａ　Ｍ，Ｙａｓｕｄａ　Ｍ，Ｆｕｊｉｔａ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｓｔｒａｔ－　ｅ　ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍＴＯＲ・ＨＩＦ－１　ａｌｐｈａ・ＶＥＧＦ　ｐａｔｈｗａｙ　ｉｎ　ｏ＿　ｖａｒｉａｎ　ｃｌｅａｒ　ｃｅｌｌ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｐａｔｈｄｏｇｙ　Ｉｎｔｅｍａ．　ｔｉｏｎａ１．２００９，５９（１）：１９—２７．　［９］　Ｆｒｏｓｔ　Ｐ，Ｓｈｉ　Ｙ，Ｈｏａｎｇ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．ＡＫＴ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｒｅｇｕｌａｔｅｓ　ｔｈｅ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｍＴＯＲ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｔｏ　ｐｒｅｖｅｎｔ　ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ａｎｄ　ＶＥＧＦ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｍｙｅｌｏｍａ　ｃｅＨｓ［Ｊ］．Ｏｎｔｏ－　ｇｅｎｅ，２００７，２６（１６）：２２５５—２２６２．　［１Ｏ］　Ｓａｂａｐａｔｈｙ　Ｋ，Ｈｏｃｈｅｄｌｉｎｇｅｒ　Ｋ，Ｎａｍ　ＳＹ，ｅｔ　ａ１．Ｄｉｓｔｉｎｃｔ　ｒｏｌｅｓ　ｆｏｒ　ＪＮＫ１　ａｎｄ　ＪＮＫ２　ｉｎ　ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ＪＮＫ　ａｃｔｉｖｉｙｔ　ａｎｄ　Ｃ－Ｊｕｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｃｅｌｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｃｅｌｌ，２００４，　１５：７１３　７２５．　［１１］　Ｆｒａｅｎｋｅｌ　Ｍ，Ｋｅｔｚｉｎｅｌ—Ｇｉｌａｄ　Ｍ，Ａｒｉａｖ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．ｍＴＯＲ　ｉｎ—　ｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｂｙ　ｒａｐａｍｙｃｉｎ　ｐｒｅｖｅｎ￣ｂｅｔａ－ｃｅｌｌ　ａｄａｐｔａｔｉｏｎ　ｔｏ　ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａ　ａｎｄ　ｅｘａｃｅｒｂａｔｅｓ　ｔｈｅ　ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｓｔａｔｅ　ｉｎ　ｔｙｐｅ　２　ｄｉａｂｅｔｅｓ［Ｊ］．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００８，５７（４）：９４５—９５７．　［１２］　钟显飞，蒋明德．Ｃ—Ｊｕｎ氨基末端激酶信号转导通路　在细胞凋亡中的作用［Ｊ］．第四军医大学学报，２００５，　２６（１６）：１５３３—１５３６．　［１３］　杨晓静．猪骨骼肌生长及肌纤维类型分布的分子机　理研究［Ｄ］．南京：南京农业大学，２００４．　［１４］　Ｌｅ　Ｂａｃｑｕｅｒ　Ｏ，Ｐｅｔｍｕｌａｋｉｓ　Ｅ，Ｐａｇｌｌａｌｕｎｇａ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｅｌｅｖａｔ－　ｄｅ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｔｏ　ｄｉｅｔ・－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｏｂｅｓｉｙｔ　ａｎｄ　ｉｎｓｕｌｉｎ　ｒｅｓｉｓｔ—　ａｌｉｃｅ　ｉｎ　ｍｉｃｅ　ｌａｃｋｉｎｇ　４Ｅ—ＢＰ１　ａｎｄ　４Ｅ—ＢＰ２［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，２００７，１１７（２）：３８７—３９６．　［１５］　Ｗｅｎｄｅ　Ａ　Ｒ，Ｈｕｓｓ　Ｊ　Ｍ，Ｓｃｈａｅｆｆｅｒ　Ｐ　Ｊ，ｅｔ　ｏ２．ＰＧＣ－ｌａｌｐｈａ　ｃｏａｃｔｉｖａｔｅｓ　ＰＤＫ４　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｖｉａ　ｔｈｅ　ｏｒｐｈａｎ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ＥＲＲａｌｐｈａ：ａ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｆｏｒ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ　ｃｏｎ－　ｔｒｏｌ　ｏｆ　ｍｕｓｃｌｅ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌ，　２００５，２５（２４）：１０６８４—１０６９４．　［１６］　Ｃｚｕｂｒｙｔ　Ｍ　Ｐ，ＭｃＡｎａｌｌｙ　Ｊ，Ｆｉｓｈｍａｎ　Ｇ　Ｉ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－ａｃｔｉｖａｔｄｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｇａｍｍａ　ＣＯ＇－　ａｃｔｉｖａｔｏｒ　１　ａｌｐｈａ（ＰＧＣ一１　ａｌｐｈａ）ａｎｄ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉｌａ　ｆｕｎｃ－　ｔｉｏｎ　ｂｙ　ＭＥＦ２　ａｎｄ　ＨＤＡＣ５［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，２００３，１００（４）：１７１１～１７１６．　［１７］　Ｙｕｎ　Ｋ．Ｗｏｌｄ　Ｂ．Ｓｋｅｌｅｔａｌ　ｍｕｓｃｌｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｆ－　ｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ：ｓｔｏｒｙ　ｏｆ　ａ　ｃｏｒｅ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｎｅｔｗｏｒｋ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｃｏｎｔｅｘｔ［Ｊ］．Ｃｕｒｔ　Ｏｐｉｎ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌ，１９９６，８（６）：８７７—　８８９．　［１８］　路文盛，程桦．ＰＧＣ．１及其基因多态性与胰岛素抵　抗［Ｊ］．国际内分泌代谢杂志，２００６，２６（４）：２５７—　２５９．　［１９］　Ｂｒｕｇａｒｏｌａｓ　Ｊ　Ｂ，Ｖａｚｑｕｅｚ　Ｆ，Ｒｅｄｄｙ　Ａ，ｅｔ　ａ１．ＴＳＣ２　ｒｅｇｕ－　ｌａｔｅｓ　ＶＥＧＦ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｍＴＯＲ・・ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ａｎｄ・・ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｐａｔｈｗａｙｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｅｌｌ，２００３，４（２）：１４７—１５８．　［２０］　王红霞，张凤春，黄明主．ＭＡＰＫ信号转导通路在托瑞　米芬非雌激素抗肿瘤中的作用［Ｊ］．上海交通大学学　报：医学版，２００８，２８（１）：６６—６８．　［２１］　Ｈｅｔｔｉｎｇｅｒ　Ｋ，Ｖｉｋｈａｎｓｋａｙａ　Ｆ，Ｐｏｈ　Ｍ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｃ—Ｊｕｎ　ｐｒｏ－　ｍｏｔｅｓ　ｃｅｌｌｌｕａｒ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｂｙ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＰＴＥＮ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ　Ｄｅａｔｈ　ａｎｄ　Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，２００７，１４：２１８—２２９．