Ｏｃｔ．２０１３．３３（５） 实验动物与比较医学Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３２９ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４—５８１７．２０１３．０５．００１ ・论著・ Ｇａｂ２在ＳＨＰ．２激活突变导致的小鼠肥大细胞异常 增殖活化及其导致器官损伤中的作用 陈吉・，陈卓ｚ，汪心怡 ，都红１，瞿成奎 ２，汪思应１ （１．安徽医科大学基础医学院，合肥２３００３２；２．Ｃａｓｅ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｒｅｓｅｒｖｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＵＳＡ，４４１０６） ［摘要］目的观察接头蛋白Ｇａｂ２对激活突变ＳＨＰ．２导致的肥大细胞异常增殖活化是否具有 作用，对激活突变ＳＨＰ．２小鼠器官损伤有无影响。方法用Ｇａｂ２～／、ＳＨＰ一２Ｄ６１Ｇ／＋小鼠杂交建立四 种基因型（ＳＨＰ一２ 、Ｇａｂ２ 、ＳＨＰ．２ 、ＳＨＰ一２Ｄ６ ￣／＋／Ｇａｂ２－／－）小鼠为研究对象：取小鼠骨髓细胞用 ＩＬ一３诱导建立肥大细胞，用ＭＴＳ法检测不同基因型小鼠肥大细胞对细胞因子刺激增殖反应性：用 ＥＬＩＳＡ法检测小鼠血清及肥大细胞分泌炎症因子水平，放射免疫法检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶 （ＡＬＴ）和心肌肌钙蛋白Ｉ（ｃＴｎＩ）的水平；用病理组织学技术检测小鼠组织白细胞浸润及器官损伤情况。 结果 Ｇａｂ２缺失后，ＳＨＰ一２激活突变导致的小鼠肥大细胞异常增殖及活化现象明显改善，对细 胞因子增殖反应性下降，相应细胞因子分泌减少，心脏及肝脏组织损伤减轻。结论 Ｇａｂ２缺失 降低了ＳＨＰ一２激活突变导致的小鼠肥大细胞异常增殖活化和心脏及肝脏组织损伤。 【关键词］ＳＨＰ一２；Ｇａｂ２；肥大细胞异常增殖及活化；器官损伤 【中图分类号】Ｒ３６３ Ｑ９５．３３ ［文献标识码］Ａ ［文章编号】１６７４—５８１７（２０１３）０５—０３２９—０５ ＳＨＰ．２是一种非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶，广 出现Ｎｏｏｎａｎ综合症和骨髓异常增殖性疾病，其中 泛表达于各组织细胞，在血细胞中高表达，对造 血细胞的发育、分化起正作用［卜 。多项研究 表明，ＳＨＰ一２与白血病的发生发展密切相关，在 包括肥大细胞异常增殖、脾脏肿大、关节炎等【引。 作者曾采用此基因敲入小鼠模型，证实激活突变 ＳＨＰ一２促进组织白细胞浸润和心、肝、脾、肺等 Ｎｏｏｎａｎ综合征（伴髓系增殖病）、幼年型粒单细胞白 血病（ＪＭＭＬ）、及其他白血病和一些实体瘤中均发 现ＳＨＰ一２激活突变体 ６１。其中最常见的是Ｅ７６Ｋ和 Ｄ６１＠，Ｙ突变，这些突变导致ＳＨＰ一２酪氨酸磷酸酶 的活性不同程度的活化 钔。Ｎｅｅｌ实验室建立了 多器官损伤【７ｌ，临床也发现部分青少年粒细胞白血 病（ＪＭＭＬ）患儿（３５％患者体内存在ＳＨＰ一２激活突变） 发病早、进展快，多数患者因白细胞包括白血病 细胞大量浸润导致多器官衰竭而早期死亡［ 。同时 此模型小鼠分离得到的肥大细胞对几．３增殖反应性 增高［８］，提示ＳＨＰ一２激活突变可能参与肥大细胞的 增殖活化。肥大细胞不仅在超敏反应中起重要 作用 ，还参与急、慢性炎症反应。其活化后通 过合成和释放多种炎症因子（如ＴＮＦ． ＩＬ一１，ＩＬ一４， ＳＨＰ一２Ｄ６１Ｇ／＋基因敲入小鼠模型，发现该模型小鼠 ［收稿日期】２０１３．０３．０７ ［基金项目］国家自然科学基金（编号：３０８７３０４６，３０９７３４２４， ８１２７２２５８）；教育部博士点基金（编号：２００８０３６６０００５）； ＩＬ一６等）来招募效应细胞（如白细胞）到炎症部位，发 挥免疫效应功能【ｌｏ川。而细胞因子和炎症介质（如 ＴＮＦ．０ｃ）的失控性释放会引起器官功能损伤，最终 导致多器官功能衰竭的发生。 那么如何控制ＳＨＰ一２激活突变导致的肥大细胞 异常增殖活化和器官损伤呢？多项研究表明，ＳＨＰ一２ 安徽省出国留学回国人员科技项目 （编号：２００９—２０１ １） 【作者简介】陈吉（１９８７一），女，硕士研究生。 Ｅ—ｍａｌｌ：ｃｈｅｎｊｉ１９８７＠１２６．ｃｏｍ ［通讯作者】汪思应（１９６３．），男，教授，博士生导师。 Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｙｗａｎｇ＠ａｈｍｕ．ｅｄｕ．ｃａ ３３０ 实验动物与比较医学Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 参与ＳＣＦ、ＩＬ一３、ＩｇＥ等引发的肥大细胞增殖及信 号活化，而此过程中Ｇａｂ２发挥关键的接头蛋白 功［３，１２－１４］。作者设想在激活突变ＳＨＰ．２导致的肥 大细胞异常增殖活化及器官损伤过程中，Ｇａｂ２发挥 了重要作用。为验证这一假设。本实验在Ｇａｂ２ 、 ＳＨＰ一２ ６ Ｇ／＋模型小鼠基础上，在建立的四种基因型 小鼠（ＳＨＰ一２ ＋、Ｇａｂ２ 、ＳＨＰ．２０６１Ｇ／ 、ＳＨＰ一２Ｄ６１Ｇ／＋］ Ｇａｂ２。／。） 】观察Ｇａｂ２缺失后，ＳＨＰ．２激活突变导致的 小鼠肥大细胞异常增殖活化及其导致的器官损伤是 否可以改善，为临床疾病治疗提供新线索。 １材料与方法 １．１材料 １．１．１药品与试剂ＲＰＭＩ一１６４０、胎牛血清购于 ＧＩＢＣＯ公司；生理盐水购于北京双鹤药业；放射免 疫试剂盒有中国原子能科学研究院提供；仪器为ＦＪ一 ２００８型免疫计数器。 １．１．２实验动物Ｃ５７ＢＬ／６背景品系ＳＨＰ一２Ｄ６１Ｇ／＋及 Ｇａｂ２ 小鼠由美国Ｃａｓｅ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｒｅｓｅｒｖｅ大学瞿成 奎教授提供。用Ｇａｂ２。／。和ＳＨＰ一２Ｄ６１Ｇ／＋小鼠杂交生 产，鉴定出雌雄ＳＨＰ．２Ｄ６．Ｇ，＋／Ｇａｂ２＋，－小鼠作为种鼠杂 交，生产并鉴定出本实验所需的四种基因型小鼠 ， 分别为：ＳＨＰ一２ 、Ｇａｂ２～／、ＳＨＰ一２Ｄ６１Ｇ／＋、ＳＨＰ一２Ｄ６１０／＋／ Ｇａｂ２－，－。取１６周龄小鼠备用，雌雄各半，每组８只， 饲养于ＳＰＦ级屏障环境［ＳＹＸＫ（皖）２０１ １－００７１。 １．２方：法 １．２．１骨髓细胞的建立 小鼠处死后，放入７５％酒 精中浸泡５ ｍｉｎ，无菌分离双侧股骨和胫骨并剪去 骨端，用３ ｍｌ ＲＰＭＩ １６４０培养液冲洗骨髓３次， 收集冲洗液，吹打混匀成单细胞悬液，用白细胞 稀释液稀释，作骨髓有核细胞计数后备用。 １．２．２骨髓中单个核细胞的分离 用来分离骨髓单 个核细胞（ＰＢＭＣ）的分层液比重是１．１２０±０．００１的 聚蔗糖一泛影葡胺（Ｆ／Ｈ）分层液。收集骨髓细胞冲洗 液，缓慢加入分层液面上，室温离心后，红细 胞、粒细胞比重大，沉于管底；淋巴细胞和单核 细胞的比重小于分层液比重，漂浮于分层液的上 方，也可有少部分细胞悬浮于分层液中。小心吸 取分层液液面的细胞，就可以从骨髓中分离到单个 核细胞，主要包括淋巴细胞和单核细胞。将细胞置 于另一离心管中，加入５倍体积的Ｈａｎｋｓ液，离心洗 涤细胞２次，弃上清，加入含有体积分数１０％ＦＢＳ、 ０．５ ｎｇ／ｍｌ ＩＬ．３的ＲＰＩＭ １６４０，重悬细胞，常规培养。 １．２－３肥大细胞的获取和培养骨髓单个核细胞分 离后，按１．０×１０６／ｍｌ细胞浓度接种于培养皿， １０％ＦＢＳ、０．５ ｎｇ／ｍｌ ＩＬ．３的ＲＰＭＩ１６４０培养液，３７℃、 体积分数５％ＣＯ 及饱和湿度的培养箱内进行培养， ４８ ｈ后贴壁生长细胞为巨噬细胞，吸取悬浮细胞于 另一培养皿中。每７２ ｈ更换培养基，每周更换培 养皿，同样条件下培养２周后即为肥大细胞。 １．２．４ ＭＴＳ法检测肥大细胞增殖取分离得到的四 种骨髓来源肥大细胞，培养至生长对数期，以每 孔１×１０４／０．１ ｍｌ细胞接种于９６孔板。用ＩＬ一３ （０．５ ｎｇ／ｍ１）诱导０ ｄ、１ ｄ、２ ｄ、３ ｄ、４ ｄ，每日 定时每孔加入２Ｏ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（Ｒ）ＡＱｕｅｏｕｓ单溶液 试剂，３７℃、５％ＣＯ 培养箱中培养２ ｈ，酶联检 测仪４９０ ａｍ处检测各孔的光吸收值（ＯＤ ｏ）。 １．２．５ ＥＬＩＳＡ检测细胞因子ＴＮＦ一仅设置空白孔， 标准孔和待测样品孔（每孔加样１００ ，加入一抗工作 液５０ ｌ，室温孵育２ ｈ后用洗涤缓冲液反复洗涤 ５次；然后加入ＨＲＰ标记的二抗工作液１００ ，室 温反应３０ ｍｉｎ后充分洗涤；依次加入显色剂Ａ和Ｂ 各５０山，室温避光显色３０ ｍｉｎ，之后加入终止液 ５０山终止反应；酶标仪检测４５０ｎｎｌ波长下Ａ值。根 据样品的Ａ 。值由标准曲线计算出相应的浓度，再乘 以稀释倍数即可得到样品中待检物质的实际浓度。 １．２．６血清中ＡＬＴ和ｃＴｎＩ水平的检测取１６周龄 小鼠，取内眦静脉血，分离血清，按试剂盒说明采用放 射免疫法检测血清中的丙氨酸转氨酶和肌钙蛋白Ｉ。 １．２．７ 心脏组织病理学观察 常规石蜡切片（厚度 ６～７ ｌａｒｎ），采用ＨＥ染色，依次进行脱蜡（二甲苯Ｉ １０ ｍｉｎ，二甲苯ＩＩ ５ ｒａｉｎ）、水化（１００％酒精Ｉ ５ ｍｉｎ， １００％酒精ＩＩ ５ ｍｉｎ，９５％酒精Ｉ ５ ｍｉｎ，９５％酒 精ＩＩ ５ ｍｉｎ，８５％酒精３ ｍｉｎ，７５％酒精２ ｍｉｎ， 蒸馏水冲洗１ ｒａｉｎ）、染色（苏木精染色５ ｍｉｎ，自 来水洗，盐酸酒精分化１５ Ｓ，自来水洗１５ ｍｉｎ， 蒸馏水洗２ ｍｉｎ，７５％酒精２ ｍｉｎ，８５％酒精２ ｍｉｎ， ０．５％伊红染色１ ｍｉｎ，９５％酒精Ｉ ５ ｍｉｎ，９５％酒 精ＩＩ ５ ｍｉｎ，１００％酒精Ｉ ５ ｍｉｎ，１００％酒精ＩＩ ５ ｍｉｎ， 二甲苯Ｉ ５ ｍｉｎ，二甲苯ＩＩ ５ ｍｉｎ）。中性树胶封片 后，光镜下观察组织病理变化。 １．３统计学分析 数据采用 ± 表示＇各实验指标均重复至少３次， ＳＰＳＳ １０．０统计软件对数据进行ｔ检验，以Ｐ＜Ｏ．０５为 差异显著。 Ｏｃｔ．２０１３．３３（５） 实验动物与比较医学Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３３３ 【３】Ｗａｎｇ Ｓ，Ｙｕ ＷＭ，Ｚｈａｎｇ Ｗ，ｅｔａ１．Ｎｏｏｎａｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ／ｌｅｕｋｅｍｉａ－ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＡＲＦ１ ｉｎ ＦｃｅＲＩ’ｍｅｄｉａｔｅｄ ｒｇａｎｕｌｅ ｔｒａｎｓｌｃｏａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｇａｉｎ—・ｏＧｆｕｎｃｆｉｏｎ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ＳＨＰ－－２ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ｍａｓｔｃｅｌｌ ｄｅｇｒａｎｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１１，１８７（２）：９３２—９４１． （ＰＴＰＮ１ １）ｅｎｈａｎｃｅ ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｉｔｏｎ ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｌ 【１０】Ｍａｕｓ Ｍ，Ｍｅｄｇｙｅｓｉ Ｄ，Ｋｏｖｅｓｄｉ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｇｒｂ２ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｃｈｅｍ，２００９，２８４（２）：９１３—９２０． ｂｉｎｄｅｒ ２ ｃｏｕｐｌｅｓ Ｂ－ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｏ ｃｅｌｌ ｓｕｒｖｉｖａｌ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌ， ［４】Ｘｕ Ｄ，Ｗａｎｇ Ｓ，Ｙｕ ＷＭ， 日Ｚ．Ａ ｇｅｒｍｌｉｎｅ ｇａｉｎ－ｏｆ－ｆｕｎｃｔｉｏｎ ２００９，２１（２）：２２０—２２７． ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ Ｐｔｐｎ ｌ １（Ｓｈｐ一２）ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ｉｎｄｕｃｅｓ ｍｙｅｌｏ。 【１ １】Ｖａｕｇｈａｎ ＴＹ，Ｖｅｒｍａ Ｓ，Ｂｕｎｔｉｎｇ ＫＤ．Ｇｒｂ２一ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｂｉｎｉｄｎｇ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｂｙ ａｂｅｒｒａｎｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ （Ｇａｂ）ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｆｉｃ ｎａｄ ｉｍｍｕｎｅ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ［Ｊ］． ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，２０１０，１ １６（１８）：３６１ １－３６２１． Ａｍ ＪＢｌｏｏｄＲｅｓ，２０１ｌ，１（２）：１３０—１３４． 【５】Ｍａｒｔｉｎｅｌｌｉ Ｓ，Ｎａｒｄｏｚｚａ ＡＰ，Ｄｅｌｌｅ Ｖｉｇｎｅ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｕｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ 【１２】Ｃｈａ Ｙ，Ｐａｒｋ ＫＳ．ＳＨＰ一２ ｉｓ ａ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｔａｒｇｅｔ ｏｆＺＡＰ７０ ｔｏ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｐｅｒａｔｉｎｇ ｏｎ Ｓｒｃ・－ｈｏｍｏｌｏｇｙ ２ ｄｏｍａｉｎ－・ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｒｅｇｕｌａｔｅ ＪＡＫ１／ＳＴＡＴ３ ａｎｄ ＥＲＫ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ２（ＳＨＰ２）ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｄｒｉｖｅ ｓｅｌｅｃ— ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｓｅｔｍ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ，２０１０，５８４（１９）：４２４１－４２４６． ｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ Ｙ６２Ｄ ａｎｄ Ｙ６３Ｃ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｎｏｏｎａｎ ［１３】Ｇｒｏｓｓｍａｎｎ ＫＳ．Ｔｈｅ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ Ｓｈｐ２ ｉｎ ｄｅｖｅｌｏｐ— ｓｙｎｄｒｏｍｅ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２０１２，２８７（３２）：２７０６６—２７０７７． ｍｅｎｔ ｎａｄ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ａｄｖ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２０１０，１０６：５３—８９． ［６】Ａｒａｋｉ Ｔ，Ｍｏｈｉ ＭＧ，Ｉｓｍａｔ ＦＡ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆＮｏｏｎａｎ ［１４］Ｘｕ Ｄ，Ｌｉｕ Ｘ，Ｙｕ ＷＭ，ｅｆ ａ１．Ｎｏｎ—ｌｉｎｅａｇｅ／ｓｔａｇｅ—ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ ｓｙｎｄｒｏｍｅｒｅｖｅａｌｓｃｅｌｌｔｙｐｅ－－ａｎｄｇｅｎｅｄｏｓａｇｅ－－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｅｆｆｅｃｔｓ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａ ｇａｉｎ—ｏｆ－ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓ— ｏｆ Ｐｔｐｎ１ １ ｍｕｔａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｍｅｄ，２００４，１０（８）：８４９—８５７． ｐｈａｔａｓｅ Ｐｔｐｎ １ １（Ｓｈｐ２）ｏｎ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ［７】胡中倩，汪心怡，储著朗，等．ＳＨＰ一２酪氨酸磷酸酶激活突 ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，２０１ １，２０８（１０）：１９７７—１９８８． 变促进组织白细胞浸润和器官损伤［Ｊ１．中国比较医学杂 ［１５】杨金莲，卢艳敏，杨帆，等．白血病相关的激活突变ＳＨＰ．２ 志，２０１ １，２１（１２）：１０—１４． 对小鼠体内血管新生能力的影响ｆＪ］．实验动物与比较医 ［８］霍寅萍，储著朗，余科科，等．ＳＨＰ．２酪氨酸磷酸酶激活突 学，２０１２，３２（４）：２５９．２６４． 变的肥大细胞对ＩＬ３呈高增殖敏感性［Ｊ］．安徽医科大学学 ［１６】张风英，余科科，李菲菲，等．ＳＨＰ一２酪氨酸磷酸酶激活突 报，２０１０，（０５）：５９３—５９６． 变促进白细胞黏附和迁移的观察［Ｊ］．安徽医科大学学报， 【９】Ｎｉｓｈｉｄａ Ｋ，Ｙａｍａｓａｋｉ Ｓ，Ｈａｓｅｇａｗａ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｇａｂ２，ｖｉａ ＰＩ一３Ｋ， ２０１０，４５（４）：４８７—４９０． Ｇａｂ２ ｉｎ Ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ Ａｂｎｏｒｍａｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｉｃｅ Ｍａｓｔ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｏｒｇａｎ Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ Ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ Ｍｕｔａｎｔ ＳＨＰ一２ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ＣＨＥＮ Ｊｉ ，ＣＨＥＮ Ｚｈｕｏ ，ＷＡＮＧ Ｘｉｎ—ｙｉ ，ＺＨＥＮＧ Ｈｏｎｇ ，ＱＵ Ｃｈｅｎｇ—ｋｕｉ ’。，ＷＡＮＧ Ｓｉ・ｙｉｎｇ ｛１．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ。Ａｎｈｕｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｈｅｆｅｉ，２３００３２．Ｃｈｉｎａ； ２．Ｃａｓｅ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｒｅｓｅｒｖｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉ Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＵＳＡ，４４１０６） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｉｔｇａｔｅ ｔｈｅ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ａｄａｐｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇａｂ２ ｉｎ ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ａｂｎｏｒｍａｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ， ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｏｒｇａｎ ｄａｍａｇｅ ｉｎ ＳＨＰ一２Ｄ６１Ｇ／＋ｍｕｔａｎｔ ｍｉｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄ Ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｇｅｎｏｔｙｐｅｄ ａｓ ＳＨＰ．２ ，Ｇａｂ２一，ＳＨＰ一２。６１Ｇ，＋，ａｎｄ ＳＨＰ一２０ ／Ｇａｂ２ ｗｅｒｅ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｃｒｏｓｓｂｒｅｅｄｉｎｇ ｏｆ Ｇａｂ２一 一 ａｎｄ ＳＨＰ．２Ｄ６ Ｇ／＋ｍｏｕｓｅ．Ｍｏｕｓｅ ｍａｓｔ ｃｅｌ１ ｗａｓ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｂｏｎｅ ｍａｌＴＯＷ ｃｅｌｌｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＩＬ一３，ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｍａｓｔ ｃｅｌｌｓ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＭＴＳ ａｓｓａｙ； Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ＥＬＩＳＡ，ａｎｄ ａｌａｎｉｎｅ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＡＵｒ）ａｎｄ ｃａｒｄｉａｃ ｔｒｏｐｏｎｉｎ Ｉ（ｃＴｎＩ）１ｅｖｅｌｓ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ；ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｔｉｓｓｕｅｓ ａｎｄ ｏｒｇａｎ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ Ｇａｂ２ ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｒｅｄｕｃｅｄ ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ａｂｎｏｒｍａｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＳＨＰ一２０６ Ｇ ｍｕｔａｔｉｏｎ．ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ａｃｃｏｒｄｉｎｇｌｙ ｏｆ ＳＨＰ一２Ｄ６１Ｇ／＋ｍｉｃｅ．ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｒｅｄｕｃｅｄ ｈｅａｒｔ ａｎｄ ｌｉｖｅｒ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｇａｂ２ ｎｋｏｃｋｏｕｔ ｗｅａｋｅｎｓ ｈｔｅ ｍｉｃｅ ｍａｓｔ ｃｅｌ１ ａｂｎｏｒｍａｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂＶ ＳＨＰ一２０６ Ｇ／＋ｍｕｔａｔｉｏｎ， ｎａｄ ｍｉｔｉｇａｔｅｓ ｔｈｅ ｈｅａｒｔ ａｎｄ ｌｉｖｅｒ ｄａｍａｇｅ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ＳＨＰ一２：Ｇａｂ２；Ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ａｂｎｏｒｍａｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｔｉ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ；Ｏｒｇａｎ ｉｍｐａｉｍｒｅｎｔ
