枳椇子的生药鉴定与研究

北方药学２０１１年第８卷第１２期　５　枳棋子的生药鉴定与研究　文Ｕ以霞（江苏省射阳县中医院盐城２２４３００）　摘要：目的：对枳棋子进行鉴定，为其制定质量标准提供参考依据。方法：以槲皮素为对照品。采用薄层色谱法对枳棋子药材醇提物　进行了定性鉴别及含量测定。结果：含量测定中，槲皮素在１．３１—５．２６￣ｇ范围线性关系良好（ｒ＝０．９９９９），回收率为９９．７８％。ＲＳＤ＝　１．０８％。结论：Ｔ　鉴别方法专属性强；含量测定方法精密度高，重复性好，简便快速，可用于枳棋子生药鉴定的质量提供依据。　关键词：枳楔子槲皮素生药学鉴定质量标准　中图分类号：Ｒ２８４　文献标识码：Ｂ　文章编号：１６７２—８３５１（２０１１）１２—０００５—０２　枳棋子为鼠李科（Ｒｈａｍｎａｃｅａｅ）拐枣属（Ｈｏｖｅｎｉａ）植物枳棋　酸乙酯一甲酸（５．５：２：０－３）为展开剂，展至约１０ｃｍ，取出，晾干，　（Ｈｏｖｅｎｉａ　ｄｕｌｃｉｓ　Ｔｈｕｎｂ）的带肉质果柄的果实或种子，具有止渴　除烦、解酒毒、镇惊、利尿之功效，用于醉酒、烦热、口渴、二便　不利。枳棋子作为传统中药材应用历史悠久。本课题组研究发　现：枳棋子醇提取物能提高急性肝损伤小鼠的还原型谷胱甘　肽（ＧＳＨ）氧化功能，增强谷胱甘肽巯基转移酶（ＧＳＴ）催化的　ＧＳＨ结合反应，增加超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、过氧化氢酶（Ｃａｔ）　活性，拮抗乙醇所致的小鼠急性肝损伤，７５％乙醇提取物具有　明确抗肝纤维化作用ｌｌ　Ｉ。已从枳棋子中分离得到含有槲皮素　等多种黄酮类化合物，可能是其药效有效成分。目前关于枳棋　子的质量标准的报道尚未见到。本文以槲皮素为对照品，采用　薄层色谱法（ＴＬＣ）和高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）对枳棋子进行质　量控制，为枳棋子开发成中药的新药奠定基础。　１材料　１．１实验材料　采自江苏盐城药业有限公司经盐城市药品检验所鉴定为　枳棋子的种子。　１．２仪器　Ｌｅｉｃａ—Ｍｐｓ６０生物显微镜。　性状鉴别：枳棋种子扁平圆形，背面稍隆起，腹面较平坦，　直径３￣５ｍｍ，厚１～１．５ｍｍ。表面红棕色、棕黑色或绿棕色，有光　泽，于扩大镜下观察可见散在凹点，基部凹陷处有点状淡色种　脐，顶端有微凹的合点，腹面有纵行隆起的种脊。种皮坚硬，胚　乳白色，子叶淡黄色，肥厚，均富油质。气微，味微涩。　１．３仪器与试药　ＨＨＳ精密恒温水浴锅（江苏金坛市医疗仪器厂）；５２００Ｈ　超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；ＲＥ一５２ＣＳ型旋　转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；ＳＨＢ～Ⅲ循环水式多用真空　泵（鄂州长城科工贸有限公司）；ＹＸＪ一１型离心机（深圳天南海　北实业有限公司）；Ａｇｉｌｅｎｔｌ　１００型高效液相色谱仪；ＤＡＤ检测　器。薄层板为以羧甲基纤维钠为粘合剂的硅胶Ｇ预制板。水为　双蒸水，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。　槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定　用，批号０８１—９００３）；枳棋子药材购自江苏盐城药业有限公司，　经盐城市药品检验所鉴定为鼠李科植物枳棋（Ｈｏｖｅｎｉａ　ｄｕｌｃｉｓ　Ｔｈｕｎｂ）的种子。　２方法与结果　２．１　ＴＩＥ鉴别　取３批枳棋子粗粉各Ｏ．５ｇ，分别以７５％乙醇为溶剂，索氏　提取３．２ｈ，提取液过滤，减压回收乙醇至无醇味，热水分散，放　冷，石油醚（６０—９０℃）脱脂３次，水液浓缩，８０￣Ｃ干燥制成干浸　膏，粉碎成细粉。加醋酸乙酯回流提取２次，每次１５ｍｉｎ，每次　１５ＩＩｌｌ。合并醋酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加甲醇２ｍｌ使溶解，作　为供试品溶液。另取槲皮索对照品，加甲醇制成每ｌｍｌ含　０．３３ｍｇ的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法『《中国药典》　２００５版（一部）附录ＶＩＢ］试验，吸取上述２种溶液各１０ｔｘｌ，分别　点于同一硅胶Ｇ薄层板上，先以醋酸乙酯一甲酸一水（８：１：０．８）　为展开剂，饱和１０ｍｉｎ，展至约４ｃｍ，取出，晾干；再以甲苯一甲　喷以Ｉ％Ａ１Ｃ１，乙醇溶液，待乙醇挥干后，置紫外光灯（３６５ｎｍ）　下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同　颜色的荧光斑点。　２．２含量测定　２．２．１对照品溶液的制备：精密称取经五氧化二磷减压干燥器　中干燥至恒重的槲皮素对照品１６．５ｒａｇ于２５ｍｌ量瓶中，加甲醇　溶解并稀释至刻度，定容，摇匀，即得６６０￣ｚｇ／ｍｌ的对照品溶液。　２．２．２供试品溶液的制备：取枳棋子粗粉Ｏ．５ｇ，按２．１项下同法　操作至“粉碎成细粉”。精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加人　甲醇２５ｍｌ称定重量，超声处理（功率１２５ｗ，频率４０ｋＨｚ）　１５ｍｉｎ，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤　过，续滤液过０．４５１．￣ｍ微孔滤膜，即得。　２．２．３色谱条件：色谱柱：ＺＯＰＢＡＸ　ＳＢ—Ｃ】８（４．６ｍｍｘ２５０ｍｍ，　５　ｍ）；流动相：乙腈一０．０２ｍｏ］ｆｌ　ＫＨ２ＰＯ　（３５：６５），用磷酸调节ｐＨ　值为４．１；检测波长：２５６ｎｍ；流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ；柱温：３０℃；理论　塔板数按槲皮素峰计算不低于２５００。在该条件下槲皮素与其　他组分均能达到基线分离，对照品在槲皮素色谱峰的保留时　间处无干扰。　２．２．４线性关系的考察：精密吸取对照品溶液１．０、１．５、２．０…２　５　３．０、３．５、４．０ｗｌ，分别置于１０ｍｌ容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，分　别取各浓度对照品进样２０１ｚ，ｌ，按上述色谱条件依序进样测定。　以槲皮素对照品浓度（ｗｇ／ｍ］）为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，　绘制标准曲线，建立回归方程：Ａ＝１９．２２＋７９２．０１Ｃ，ｒ＝０．９９９９，结　果表明，槲皮素浓度在１．３１—５．２７１ｘｇ范围内与色谱峰面积线性　关系良好。　２．２．５精密度试验：精密吸取６６０１．ｚｇ／ｍｌ槲皮素对照品２．０ｍｌ，重　复进样５次，测得１３内ＲＳＤ＝Ｉ．３０％，隔日再重复进样５次，测　得日间ＲＳＤ＝２．１％。　２．２．６重复性试验：取同一批次枳棋子粗粉按２．２．２项下制备供　试品溶液５份，依序进样测定槲皮素含量，结果平均含量为　２．６７１ｘｇ／ｍｌ，ＲＳＤ＝Ｉ．６％ｏ　２．２．７稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，分别于０，２、４、　８、１２、２４ｈ进样，依法测定，由峰面积积分值统计结果，可见样　品溶液在２４ｈ内保持稳定，ＲＳＤ＝２．７％。　２．２．８加样回收率试验：精密称定已知槲皮素含量的枳棋子粉　末适量，共５份，分别以高、中、低３个浓度水平准确加人一定　量的槲皮素对照品，按上述供试品溶液制备方法和色谱条件　进行测定并计算回收率。结果平均回收率为９９．７８％，ＲＳＤ＝　１．０８％。结果见表１。　表１加样回收率测定结果（ｎ＝５）　６　ｊＥ方药学２０１１年第８卷第１２期　　２．２．９样品的含量测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶　２５６ｎｍ为检测波长。在枳棋子槲皮素含量测定条件中，磷酸的加入作用有二：　液２０１－ｄ，注入高效液相色谱仪，依法测定，结果见表２。经过对　３批枳棋子药材的含量测定并经统计学处理，规定枳棋子药材　其一，流动相中加人磷酸，可抑制黄酮苷酚羟基的电离，改善分　离效果，防止拖尾，使峰形尖锐、对称，缩短分离时间；其二，流动　中槲皮素含量不得少于０．７０２ｍｇ／ｇ。　表２槲皮素含量测定结果｛　±ｓ，ｎ＝３）　相的ｐＨ值对测定影响显著，采用磷酸调节一系列不同ｐＨ值　的缓冲溶液进样检测，结果发现，ｐＨ值偏大或偏小，分离效果不　样品　槲皮素含量（ｍｇ／ｇ）　好，拖尾现象较严重，因此，优选ｐＨ＝－４．１，分离效果好。　１　０．８７９￣０．００３　本实验组研究发现，枳棋子的种子在７５％乙醇提取物具有　２　０．８７３￣０．００７　抗脂质过氧化和抗肝纤维化的作用，通过对枳棋子有效部位的初　３　０．８７６￣０．ｏ０５　步研究，总黄酮可能是其药效部分，因此，对枳棋子黄酮化合物　３讨论　中槲皮素含量测定的研究具有积极的意义。结果表明，该方法　枳棋子中总黄酮常用的提取溶剂有水、不同浓度的乙醇　简便可行，准确可靠，重复性好，能有效地控制该药物的质量。　等，提取方法有浸渍法、渗漉法、索氏提取法、回流法等，总体　参考文献　分为冷提和热提两种方式。故用不同溶剂、不同方法进行提　［１］徐亚军，郭华春．黄山药的研究进展　中国农学通报，　取，以干浸膏得率和槲皮素含量为指标，并结合药效学实验结　２００５，２１（２）：９４．　果进行了对比实验，结果表明：枳棋子提取方法以７５％乙醇为　［２］胡志林，刘文娜，张永军．枳棋子中总黄酮提取工艺研究［Ｊ】　．提取溶剂，索氏提取法最佳。　中成药，２００４，２６（１２）：１０６５．　对槲皮素对照品溶液进行紫外可见光全波长扫描，结果　ｆ３降克明，任丽娟．枳棋子化学成分研究、黄酮类成分的分离与　在３６０ｎｍ和２５６ｎｍ处均有较大吸收，比较相同色谱条件下　鉴定ｆＪ１冲草药，１９９９，３０（增刊）：６０—６０．　３６０ｎｍ和２５６ｎｍ波长下的色谱图，检测波长为２５６ｎｍ时的色　［４］张洪，叶丽萍，张如洪，等．枳棋子有效部位的初步研究【Ｊ］．广　谱图具有分离度好、灵敏度高、杂质干扰少的优点，因此。采用　东药学院学报，２００３，１９（２）：１１１．　・经验交流・　基层医院如何防范剖宫产术后子宫切口愈合不良　邹　群（湖北省松滋市中西医结合医院松滋４３４２００）　关键词：基层医院剖宫产术子宫切口　中图分类号：Ｒ７１９．８　文献标识码：Ｂ　文蕈编号：１６７２—８３５１（２０１１）１２—０００８—０１　随着剖宫产技术在基础医院的普及和近年来剖宫产率的　淋巴管的暴露、缝合后切口处凝血和血供减少等诸多因素都　感染。而子宫切口感染是导致子宫切口愈合　升高，子宫切口预后不良已成为剖宫产术后产后出血最多见　可导致子宫切ＶＩ的原因。如何防范，着重谈以下几点体会。　１提高认识，及早发现　１．１晚期产后出血是子宫切口预后不良的主要表现　临床上一般表现为术后长时间阴道流血，流血量多时可　不良的主要原因。胎膜早破、产前多次肛诊及阴道检查等术前　感染诱因可增加子宫切口愈合不良的危险性。　２．２子宫下段横切口位置选择不当　①切口位置过低：子宫下段由子宫峡部扩展而来，组织和　伴有晕厥、休克和贫血。感染明显者可有发热，腹痛甚至盆腔　宫体部组织相似，８０％是平滑肌，愈合能力强。切口位置过低　脓肿。多数患者阴道流血发生在术后２周左右，子宫切口溃疡　时，可能切到或靠近宫颈组织，而子宫颈是以结缔组织为主，　或窦道形成所致的阴道出血时间晚于子宫切口裂开，有的可　平滑肌组织占１０～１５％，血供差，不易愈合；且切Ｅｌ过低容易撕　长达数月。　裂，靠近阴道易导致感染，均不利子宫切口愈合。②切Ｉ＝１位置　过高：切口选择在子宫体与子宫下段交界处，切口上下缘厚薄　１．２　Ｂ超检查时重要的辅助检查　剖宫产子宫切口最初粘合是由胶原纤维束和纤维蛋白柬　不一，缝合时不易对合，产后子宫收缩，两切缘发生错位，导致　构成。这些胶原纤维、纤维蛋白及周围结缔组织之间声阻抗的　切口愈合不佳。③切１５１大小不当：妊娠晚期子宫右旋，切口往　改变不同，故超声回波成像也就不同。有报道剖宫产术后７—８　往偏左，致左侧血管受损、撕裂；娩头时用力不当或胎位异常　天左右，愈合良好的切口声像图呈一边界清晰的平或弧形强光　致子宫切口下段撕裂，组织回缩，造成漏缝，止血不彻底形成　带，若愈合不良，则上述强回声光带中可见周边毛糙、不规则并　血肿，或盲目过多的缝合止血造成子宫切口缺血、坏死，致子　与周围形成强弱不等的混合性光团。剖宫产术后４周左右，愈　宫切口愈合不良。　合良好的子宫切ＩＺｌ，浆膜面完整光滑，子宫肌层回声均匀，无强　２．３缝合技术不当　回声光斑、光带及低回声，缝线未完全吸收肌层内可见强回声　缝合时切口创面对合不整齐、断裂血管缝扎不紧、切口两　光斑。如浆膜面不光滑，向膀胱突出，子宫切口处肌壁回声不　侧角未将回缩血管缝扎形成血肿、缝扎组织过多过密致切口　均，可见强回声光斑及低回声暗区，则提示子宫切ＶＩ愈合不良。　缺血坏死等均可导致子宫切口愈合不良。现多数学者主张子　２明确病因　宫切口单层缝合更利于局部循环及子宫切ＶＩ愈合。选择缝合　子宫肌层和子宫内膜层全层缝合技术可以显著降低子宫切１２１　２．１子宫下段切ＶＩ感染　寄生在下生殖道的细菌上行、手术时子宫切口处血管和　愈合不良。