TNF-α、IL-1在高氧肺损伤动物模型中表达的动态变化

山东医药２００８年第４８卷第４６期　ＴＮＦ一　、ＩＬ一１在高氧肺损伤动物模型中　表达的动态变化　张晓慧，初清，王璇　（烟台毓璜顶医院，山东烟台２６４０００）　［摘要］　建立高氧肺损伤大鼠模型，于给氧后不同时间点取肺组织标本，ＨＥ染色观察肺组织病理形态学改　变；并检测不同时间点肿瘤坏死因子　（ＴＮＦ—ｄ）、白细胞介素１（ＩＬ一１）的表达。结果高氧组随给氧时间延长肺泡腔　内出现炎性细胞浸润、肺泡腔增大、肺泡间隔变薄、肺泡数量减少；对照组肺泡上皮自不规则结构逐渐发育成熟。　高氧组肺泡上皮细胞、血管内皮细胞、支气管上皮细胞内各时间点ＴＮＦ－　、ＩＬ．１均呈阳性表达，给氧后３　ｄ表达明显　增强，持续到给氧后第６天；对照组新生鼠肺组织ＴＮＦ－ｄ、ＩＬ—ｌ均呈阴性或弱阳性反应。认为高氧肺损伤的病理过　程中ＴＮＦ－ｄ、ＩＬ一１可能发挥着重要作用。　［关键词］肿瘤坏死因子　；白细胞介素１；肺损伤，高氧　［中图分类号］　Ｒ５６３　［文献标识码］　Ｂ　［文章编号］　１ｏｏ２－２６６ｘ（２ｏ０８）４６ＪＤｏ３７一Ｄ２　随着极低出生体质量儿存活率的显著提高，幸　存者常见的肺部并发症——支气管肺发育不良的发　生率也有逐年增加的趋势，并成为新生儿慢性肺疾　病（ｃＬＤ）的最常见形式。２ｏ０６年７月～２００７年１２　月，我们通过监测高氧肺损伤大鼠模型中肿瘤坏死　因子　（ＴＮＦ．　）、白细胞介素１（ＩＬ一１）表达的变化，　以探讨其在ＣＬＤ发病中的作用。　表１腹主动脉一腔静脉分流对大鼠心脏　质量和体质量的影响（ｉ±　）　１材料与方法　１．１动物分组及模型的建立足月新生ｓＤ大鼠　共８０只，生后第２天随机分成高氧组和对照组，每　组４０只。高氧组置于密闭氧箱中，持续输入氧气，　钠石灰吸收二氧化碳，保持氧浓度≥８５％。每天定　时开箱１　ｈ，添加水、饲料及更换垫料，并更换母鼠，　恒温恒湿饲养。对照组的小鼠置于空气中，饲养方　实验组大鼠的心脏质量和心脏体质量体质量比均大　于常规组，说明实验组大鼠心肌肥厚比常规组明显，　分析原因可能是实验组大鼠分流量大于常规组所　致。另外，Ｇａｒｃｉａ所用方法是术中拔出针头后再用　胶水粘合腹主动脉破口，这样所用时间长，主动脉破　口出血较多；而我们所用方法是在拔出针头后立即　收紧荷包缝合线，所用时间短，出血机会少。　［参考文献］　［１］“ｕ　ｚ，Ｈｉｌｂｅｌｉｎｋ　ＤＲ，ｃｒｏｃｋｅｔｔ　ｗＢ，ｅｔ　ａｌ＿Ｒｅ　０ｎａｌ　ｃｈａｎｇｅ　ｉｎ　ｈｅ＿　ｍｏｄｙｎａｍｉｃ８　ａｎｄ　ｃａｒｄｉａｃ　ｍｙｏｃｙｔｅ　ｓｉｚｅ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　ａ０ｎｏｃａｖａｌ　ｆｉｇｔＩｌｌａｓ　注：与假手术组比较，’Ｐ＜Ｏ．Ｏ１　极寻求有效途径，减缓或改善肺动脉高压的形成，对　患者的手术成功及预后改善甚为重要　Ｊ。大鼠　ＡＣＦ模型病理生理过程和上述两种疾病极为相似，　已成为重要的研究工具。　ｄｅｖｅｌ叩ｉ玎ｇ　ａｎｄ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ［Ｊ］．ｃ　Ｒｅｓ，１９９１，６９　（１）：５２　８．　目前，建立大鼠ＡｃＦ模型的方法较多，但均不　臻善。Ｇａｒｃｉａ报道了一种较为简便的手术方法，即　［２］０ｚｅｋ　ｃ，ｚｈａｎｇ　Ｆ，“ｎｅａｗｅａｖｅｒ　ｗｃ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｎｅｗ　ｈｅａｎ　ｌｕｒｅ　ｍ０ｄｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｔ　ｂｙ　８ｎ　ｅｎｄ—ｔｏ－ｓｉｄｅ　ｆｅｍ０ｒａ】ｖｅｓｓｅｌ蛐ａｓｔｏｍ０ｓｉｓ［Ｊ］．　Ｃａｒｄｉ０ｖａｓｃ　Ｒｅｓ，１９９８，３７（４）：２３６＿２３８．　用１８Ｇ针头造成腹主动脉与下腔静脉之间瘘道后，　用胶水粘合腹主动脉左侧壁破口。但我们在应用中　发现Ｇａｒｃｉａ所用方法有不足之处：大鼠分流不均　瘘口易闭塞。我们改用９　线缝合腹主动脉破　口，缝合过程中针头起到了支撑瘘口作用，防止了瘘　口闭塞。本研究显示，实验组大鼠分流非常明显，心　脏质量标准差小（Ｏ．１４），说明此心衰模型较为稳　定，缝合腹主动脉破口的方法是行之有效的。另外，　一［３］ｃｈ【）ｕ　ＴＦ，ｃｈｅｎ　Ｙｓ，Ｙ　ｃｃ，ｅｔ　ａ１．ｓｉＩＴＩｐｌｅ　ｍｅｔｈｏｄ８　ｔ０　ｅｌｅｖａｔｅ　ｐｕｌ—　ｍ０ｎａｒｙ　ａｎｅＴ　ｐｒｅｓｓｕｒｅ　ｂｙ　ｐｒｅＩａｎｄ　ｐｏｓｔ－　ｃｕｓｐｉｄ　ｓｈｕｎｔｓ　ｉｎ　ｒａｔｓ［Ｊ］．　Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｐｈｙ８ｉｏｌ，２００２，４５（３）：１３１—１３５．　，［４］康俊萍，杜听，马长生．心力衰竭的预后和影响因素［Ｊ］．心血　管病学进展，２ｏｏ４，２５（２）：８５．８８．　［５］范瑾，杜军保．先天性心脏病合并肺动脉高压的治疗进展［Ｊ］．　实用儿科ｌ临床杂志，２００３，１８（１１）：８５８－８６２．　（收稿日期：２００８ＪＤ９一ｌ１）　３７　…东医药２００８年第４８卷第４６艄　法与高氧组相同。　１．２实验方法分别于给氧后的第ｌ、３、６、９、ｌ２天　处死大鼠，取左肺置于ｌ０％甲醛中固定。标本固定　４８　ｈ后，梯度酒精脱水，常规石蜡包埋、切片（厚度５　～２　结果　２．１　肺组织的病理改变　对照组出生后肺泡上皮　呈不规则结构，至第１２天肺泡结构规整，表现为肺　泡大小较为均匀一致，肺泡间隔变薄。高氧组第ｌ　天与对照组无明显差别，肺泡样结构不规则，肺泡腔　较小，肺泡间隔较厚；第３天时肺泡结构逐渐规整，　大小较均匀，肺泡间隔变薄，肺泡腔内及间隔均有少　许炎性细胞渗出；第６天时肺泡腔增大，肺泡间隔明　显变薄；第ｌ２天时肺泡腔明显增大，肺泡数量减少。　２．２肺组织中细胞因子的表达ＴＮＦ一０【、ＩＬ一１在对　照组小鼠肺组织均呈阴性或弱阳性反应，部分胞质　７　ｍ），进行ＨＥ染色，光镜下观察肺组织病理形　态学变化。同时采用免疫组织细胞化学Ｅｎｖｉｓｉｏｎ二　步法检测细胞因子ＴＮＦ—　、ＩＬ一１的表达，所有操作步　骤严格按照试剂盒说明书进行。使用细胞图像分析　系统，通过显微镜放大（２５０倍）摄取图像，输入图像　分析系统内，每张切片随机取３个视野，自动测量细　胞因子ＴＮＦ—ｏ【、ＩＬ—ｌ阳性细胞着色面积及光密度，计　算积分光密度（ＩＯＤ）。１０Ｄ＝阳性细胞的光密度　值×阳性细胞着色的面积。　呈浅染色。与对照组相比，高氧组各时间点均呈阳　性反应，表现为胞质中的棕色颗粒；在肺泡上皮细　胞、血管内皮细胞、支气管上皮细胞内均有广泛表　达，从给氧后第３天，持续到第６天均呈现高水平表　达。显微图像分析两组ＴＮＦ一仪、ＩＬ．１表达见表ｌ、表　２　１．３统计学方法采用ＳＰＳＳ１３．Ｏ软件包进行统计　学分析，检测数据以　±ｓ表示，两组间比较采用　检　验，多组间比较采用单因素方差分析。Ｐ≤０．０５为　差异有统计学意义。　表１两组肺组织耵　－ｄＩＯＤ值比较（ｉ±　）　注：与对照组比较。　Ｐ＜Ｏ．ｏ５　３讨论　高表达，与上述报道结果相吻合。近年有学者提出，　死于支气管肺发育不良的患儿病理特征主要为肺发　高氧肺损伤是一种以弥漫性肺细胞损伤为基　础，可迅速影响气体交换的肺部炎症，其主要病理特　征为肺水肿和微肺不张。我们研究发现，高氧可造　成新生鼠肺组织明显的病理损伤，随着吸氧时间的　延长，其病理损伤逐渐加重，亦说明高氧肺损伤动物　模型建立成功。　ＴＮＦ一仅来源极为广泛，包括各种免疫细胞、内皮　细胞、表皮细胞、成纤维细胞等，且具有广泛的生物　育受阻或停滞，感染、机械通气、高浓度氧等仅为促　进肺部炎症因素，而炎症可能是肺发育受阻的主要　因素，从本质上揭示了炎症因子在ＣＬＤ发病机制中　的重要作用。　总之，各种因素导致的肺部炎症是ＣＬＤ发生的　主要因素，而ＴＮＦ—　、ＩＬ—ｌ是重要的具有炎症介导活　性的细胞因子，参与了ｃＬＤ发病过程。动态监测上　述因子的表达变化，将有助于明确其作用环节，对　ｃＬＤ早期诊断及其发病机制的研究有重要意义。　学活性，参与炎症反应和免疫应答等多种病理过程。　正常肺组织中仅有极少量肺泡巨噬细胞表达ＴＮＦ—　ｍＲＮＡ，无ＴＮＦ—　蛋白检出。ＩＬ—ｌ与ＴＮＦ同属于促　炎因子的一种，且均属于早期反应因子。动物模型　［参考文献］　ｆ　１］Ｐａｃ【ｅ砧ｏｎ　ＡＭ，Ｔ　ｃ　Ｖ，Ｉ　ｖｃｈｉｋ，ｅｔ　ａ１．ｕｒｅ　ｐｌａｓｍａ　ｕｒｅａｌｙｔｊｃｕｍ　一　ｓｐｉｍｔ０ｒｙ　ｔｍ、，ｔ　ｃｏｌ（）ｎｉｚａｔｉｏｎ　ｉ８　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ａｎ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｉｎ　ｊⅢｃ—ｅｕ—　和临床研究表明，ＩＬ—ｌ、ＴＮＦ。仅等可能参与了ｃＬＤ发　病过程，并可能是在ＣＬＤ炎症的始动阶段发挥重要　作用¨　Ｊ。常立文等　对机械通气患儿行肺灌洗，　显示ＣＬＤ组生后第５天肺灌洗液中ＴＮＦ、ＩＬ　１均明　ｋｉｎ　ｌ＿ｂｅｔａ　ａｎｄ　ｔｕｍ０ｒ　ｎｅｃｍｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ　ａ】ｐｈａ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｔｏ　ｉｎ把ｒｌｅＩＩｋｉｎ　６　ｉｎ　ｔｒａｃｈｅａｌ　ａｓｐｉｒｄｔｅｓ　ｏｆ　１）ｒｅｔｅｎｎ　ｉｎｆａｌｎｔｓ［Ｊ］．Ｐｅｄｉ　ｒ　ｌｎｆｅｃｔ　１）ｉｓ　Ｊ．１９９８，　１７（４）：３２ｌ＿３２８．　［２］ｓｐｅｅｒ　ｃＰ．　１｜】ｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｎｌｅｃｈａｎｉｓｍａ　ｉｎ　ｎｅｎｎａｔａｌ　ｃｈ１、）Ｉ１ｉｃ　１ｕｎｇ（Ｉｉｓ—　ｅａｓｅ［ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｐｅｄｉａ仃，ｌ９９９，】５８（ｓｕｐｐ】１）：１８＿２２．　［３］常立文，容志惠，Ｉ』长晓慧，等．肺灌洗液ｌ｝ｌ细胞因子水平动念变　显高于其他组，亦说明上述因子在ｃＬＤ的发病中可　能起重要作用，并可作为早期诊断指标。本研究结　果表明，高氧组ＴＮＦ一仅和ＩＬ．Ｉ于生后３、６　ｄ均呈现　３８　化任诊断早产儿慢性肿部疾病一｝＿ｌ的意义［Ｊ］．１｝Ｉ华　广：医学杂　．２（）ｏ４，７　ｒ５）：２８６－２８９．　（收稿¨船：２∞８Ｊ０８．１９）